阮 君 肖鐵剛 王 兵△

1.上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院中醫(yī)科 (上海， 200233) 2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬上海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院

柴胡皂苷含量占柴胡總干重的7%[1]，其中柴胡皂苷a、柴胡皂苷b2、柴胡皂苷c、柴胡皂苷D被認(rèn)為是柴胡藥理活性最強的物質(zhì)[2,3]。非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈上升趨勢，非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是NAFLD的一個臨床和組織學(xué)分支，與全球人口死亡率、肝硬化和終末期肝病、心血管疾病死亡率的增加以及與肝相關(guān)和非肝相關(guān)癌癥發(fā)病率的增加有關(guān)，本文研究柴胡皂苷D對NASH大鼠糖脂代謝和肝臟脂肪變性的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SPF級雄性Wistar大鼠44只，體重(130±15)g，由上海斯萊克試驗動物有限責(zé)任公司提供，動物生產(chǎn)許可證號[SCXK(滬)2007-0005]，自由進食飲水，12 h明暗交替照明，適應(yīng)性普通飼料喂養(yǎng)1 周。

1.2 藥物與試劑 柴胡皂苷D由中國藥品生物制品研究所提供；羅格列酮片，葛蘭素史克(天津)有限公司，批號：H20020475；碘125胰島素放射免疫分析試劑盒，購于上海西唐生物有限公司。

1. 3 造模和分組方法 44只雄性Wistar 大鼠隨機分為空白對照組(C) 10 只和造模組34只。C組大鼠給予普通飼料喂養(yǎng)，造模組大鼠給予高脂高糖飼料(68%基礎(chǔ)飼料+15%豬油+15%蔗糖+2%膽固醇)喂養(yǎng)。以上飼料均由中國科學(xué)院上海斯萊克實驗動物有限公司提供。于第2、4、6、8周末各處死1只造模大鼠，行肝組織病理切片HE染色，判斷造模情況。造模8周后，將造模成功大鼠隨機分為模型組(M，n=10)、羅格列酮組(R，n=10)、柴胡皂苷D組(CD，n=10)。

1.4 給藥方法 CD組大鼠以100 mg/kg劑量的柴胡皂苷D灌胃R組大鼠以0.4 g/kg劑量的羅格列酮的灌胃，均1次/d，連續(xù)4周。M組和C組大鼠均以等量生理鹽水灌胃。CD、R和M組大鼠繼續(xù)給予高脂高糖飼料，C組大鼠給予普通飼料。用藥4周后處死大鼠取材。

1.5 觀察指標(biāo) 觀察大鼠行為、狀態(tài)、食欲、毛發(fā)及死亡情況；稱量體重；觀察肝臟形態(tài)，包括重量、外形、色澤、質(zhì)地；計算肝體比(肝體比=肝臟濕重/體重×100%) 。檢測血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、ALT、AST、FFA、TBA、FBG及FINS水平，計算IRI：IRI=(FBG×FINS)/22.5。

1.6 病理學(xué)檢測 取各組大鼠肝右葉相同部位大小(1.0×0.8×0.3)cm3兩塊肝組織放入 4% 甲醛中固定，石蠟包鹽、切片后行HE染色，光鏡下觀察各組大鼠肝臟脂肪變性和炎癥程度。

2 結(jié)果

2.1 4組大鼠體重、肝濕重、肝體比測定情況 見表1。

表1 4組大鼠體重、肝濕重、肝體比比較

2.2 4組大鼠肝功能檢測結(jié)果 見表2。

表2 4組大鼠肝功能結(jié)果比較

2.3 4組大鼠總膽汁酸、游離脂肪酸檢測結(jié)果 見表3。

表3 4組大鼠TBA、FFA結(jié)果比較

2.4 4組大鼠血脂指標(biāo)檢測結(jié)果 見表4。

表4 4組大鼠血脂情況比較

2.5 4組大鼠血糖、胰島素、胰島素抵抗指數(shù)結(jié)果 見表5。

表5 4組大鼠血糖、胰島素、胰島素抵抗指數(shù)比較

2.6 4組大鼠肝脂肪變性和炎癥情況 見表6。

表6 4組大鼠肝脂肪變性、炎癥程度比較

3 討論

非酒精性脂肪性肝病以全身性代謝障礙為主要特點,歸屬中醫(yī)“肝癖”“積聚”“脅痛”“痰濁”等范疇[4]?！胺才K腑十二經(jīng)之氣化, 皆必藉肝臟之氣化以鼓舞之, 始能調(diào)暢而不病”(清代周學(xué)?！蹲x醫(yī)隨筆》)”，肝臟為氣機升降之樞, 有研究認(rèn)為肝主疏泄對氣機的調(diào)節(jié)功能為脂類代謝主要途徑[5]。脾失健運，肝氣郁結(jié)，最終導(dǎo)致氣機郁阻、痰瘀互結(jié)是NAFLD的發(fā)病趨勢和特點[6]。

柴胡為傘形科植物柴胡(DC.)或狹葉柴胡(Willd.)的干燥根，有“北柴胡”“南柴胡”之分[7]，以柴胡為主藥的方劑對防治脂肪肝有良好效果，如小柴胡湯及其類方大柴胡湯、柴胡疏肝散、柴胡桂枝干姜湯、柴胡加龍骨牡蠣湯、柴苓湯等[8]。柴胡皂苷D的藥理作用較為廣泛，包括抗腫瘤、抗癌、保肝、鎮(zhèn)靜、抗癲癇及雌激素樣作用等[9],且療效確切。

糖脂代謝紊亂包括胰島素抵抗、糖耐量異常和脂質(zhì)代謝改變，被認(rèn)為是NAFLD和NASH的分子發(fā)病機制。機體營養(yǎng)過剩時脂質(zhì)轉(zhuǎn)錄因子包括碳水化合物反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(ChREBP)以及甾醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c (SREBP-1c)上調(diào)，導(dǎo)致脂肪生成基因的表達增加，乙酰輔酶a羧化酶(ACC)升高，促進新生脂肪生成(NDL)，抑制肝內(nèi)脂肪酸氧化作用來驅(qū)動脂肪變性[10]。有實驗證明，NAFLD患者不僅肝新生脂肪生成升高，而且血漿FFAs也升高，胰島素抵抗(IR)時，抑制激素敏感脂肪酶的作用消失，導(dǎo)致脂肪組織向血液中大量釋放游離脂肪酸[11]。本次實驗結(jié)果顯示M組大鼠血清TC、TG和FFA均升高，與上述結(jié)果符合，柴胡皂苷D可降低NASH大鼠血脂、血糖和游離脂肪酸水平，改善糖脂代謝紊亂狀態(tài)。

IR與NAFLD之間存在關(guān)聯(lián)，并且IR還是一種獨立的危險因素，可用于預(yù)測NAFLD的發(fā)生發(fā)展[12，13]。本研究發(fā)現(xiàn)，M組大鼠血糖、胰島素含量和胰島素抵抗均有增加，經(jīng)過柴胡皂苷D治療后，血糖、胰島素含量和胰島素抵抗均明顯降低，柴胡皂苷D可有效改善胰島素抵抗，從而減輕NASH。

實驗表明柴胡皂苷D具有利膽保肝作用。戴維等[14]證明柴胡皂苷D能夠通過降低膽汁酸的濃度，抑制肝細胞鈣超載，上調(diào) STIM1 mRNA 的表達，進而減輕阻塞性黃疸對大鼠肝臟的損傷。法尼醇X受體(FXR)作為膽汁酸相關(guān)受體，當(dāng)膽汁酸增加到一定程度時，可以通過誘導(dǎo) Fxr 來調(diào)節(jié)膽汁酸轉(zhuǎn)運基因的表達，達到調(diào)節(jié)膽汁酸平衡的作用。如柴胡皂苷D通過誘導(dǎo) Abcc4 mRNA 表達促進膽汁酸從肝細胞進入體循環(huán)進而降低膽汁酸的含量；在回腸中，柴胡皂苷D通過誘導(dǎo) Mdr1 mRNA 表達促進其外排來調(diào)節(jié)膽汁酸的含量[15]。本研究結(jié)果也證明柴胡皂苷D能降低血清總膽汁酸水平、降低ALT，對NASH大鼠有利膽保肝之效。