張春光，朱 兵，張曉娟，劉 蕾，楊文亮，郭志利*

（包鋼職工第三醫(yī)院，內蒙古 包頭 014000）

一般情況下，民族、地區(qū)的差異性，研究對象、方法的不同，會致使人群的MTHFR與MTRR基因多態(tài)性的分布也具有較大的差異性，表明出民族、區(qū)域的不同。現(xiàn)如今，按照分子醫(yī)學研究證實，在葉酸代謝時，甲硫氨酸合成酶還原酶（MTRR）、亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）被作為關鍵的酶，編碼該類酶的基因具有多態(tài)性。本文主要是對包頭市孕前及孕早期婦女葉酸代謝障礙相關基因位點分布特點的研究，確保此地區(qū)婦女個體化的孕期保健有一個科學的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究選擇的是2018年1月～2018年9月在內蒙古自治區(qū)包頭市包鋼職工第三醫(yī)院展開孕前或者孕期檢查的女性當作分析對象。將受檢者口腔粘膜細胞采集起來，并且展開基因型檢測，基于實際的樣本要求，得到有效樣本294例，受檢女性平均年齡為27.15±3.12歲，漢族276人，回族4人，滿族3人，蒙古族11人，所有患者在檢測前均簽署相關的知情同意書。

1．2

借助有關的軟件來分析MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G基因多態(tài)性，確定對各個樣本的基因分型結果。294例患者都借助棉拭紙對患者的口腔黏膜細胞進行采集，借助柱式質粒DNA 試劑盒少量抽提，同時提取樣本DNA Taqman-MGB 探針（表1）實施熒光定量PCR檢測MTHFR C677TA1298C、MTRR A66G的基因多態(tài)性的設備試劑（美國ABI公司），總體積10 μL/反應體系，涉及了濃度在20 ng/μL的DNA模板1 μL，2 x Taqman Universal MasterMix 5μL，20 x Taqman-MGB 探針0.5 μL，去離子水3.5 μL。95℃下反應10 min，92℃ 15 s、60℃ 1 min擴增20個循環(huán)，89℃15s，60℃ 90 s擴增30個循環(huán)反應結束后在ABI7900型熒光定量PCR儀上對樣品孔中的終點熒光讀取,借助Hardy-Weinberg平衡分析[8]。

1.3 統(tǒng)計學方法

用SPSS 16.0軟件對相關數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計與分析，通過P＜0.05表示有統(tǒng)計學意義；（±s）代表計量資料，并且借助t實施檢驗。

表1 Taqman-MGB 探針所在位置

2 結 果

包頭市女性MTHFR、MTRR基因多態(tài)性研究入組人群的數(shù)據(jù)和我國總體報道的數(shù)據(jù)分別展開對比，和南方區(qū)域對比得到以下結果。

2.1 和全國及南方區(qū)域女性MTHFR C677T基因型分布（見表2）對比

包頭市MTHFR C677T純合突變TT型與全國及南方區(qū)域相比差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），其等位基因C和T的分布與全國及南方區(qū)域相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

表2 不同地區(qū)女性MTHFRC677T基因多態(tài)性分布對比

2.2 與全國及南方區(qū)域女性MTHFR A1298C基因型分布（見表3）對比

包頭市女性MTHFR A1298C純合突變型CC與全國及南方區(qū)域女性相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。其等位基因A和C的分布與全國及南方區(qū)域女性相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

表3 不同地區(qū)女性MTHFR A1298C基因多態(tài)性分布對比

2.3 全國及南方區(qū)域女性MTRR A66G基因型分布分布（見表4）

包頭市MTHFR A66G純合突變GG型與全國及南方區(qū)域女性相比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

表4 不同地區(qū)女性MTRR A66G基因多態(tài)性分布對比

3 討 論

按照葉酸代謝障礙機制可以證實，在葉酸代謝時5-甲基四氫葉酸有著十分關鍵的作用，該葉酸的被視為同型半胱氨酸轉換為甲硫氨酸的基礎之一，并且其也被作為甲基在這兩者之間的重要傳遞[11.12]。在葉酸攝入量未變化的前提下，受到MTHFR、MTRR等會控制5-甲基四氫葉酸的量，換句話說MTHFR、MTRR酶活性與5-甲基四氫葉酸的產量呈現(xiàn)正相關的關系。若是MTRR基因突變會制約酶活性，降低甲硫氨酸合成酶活性，對同型半胱氨酸的轉化、甲基的傳遞均有著負面影響[13]。另一方面，充分的的5-甲基四氫葉酸被視為確保血液中同型半胱氨酸水平的關鍵基礎，是對體內甲基化程度有效的基石。

MTHFR基因包含了C677T基因、A1298C基因，另一方面，對酶的活性改變來說，MTRR中的A66G基因情況扮演關鍵的角色，與孕早期婦女的本身葉酸代謝障礙息息相關，最大程度上降低了MTR酶活性、MTHFR酶活性[5-8]。在葉酸攝入量不改變的狀據(jù)，依據(jù)相關的文獻數(shù)據(jù)表明，和正常型CC和雜合突變型CT型相對比，MTHFR 677TT型會相應的下降，降MTHFR酶活性。另一方面，1298AC型、MTHFR 677CT型存在較大的協(xié)同增加效應，和正常酶活力相比較來說，攜帶該基因分布特征的人群MTHFR酶活力獲得下降[13]。針對對孕婦細胞內葉酸的濃度而言，MTHFR C677T基因分型會造成制約關系，在同樣條件下，和正常基因對比來說，TT型以及CT型婦女細胞內葉酸含量往往較低[7]，但是對葉酸的需求孕期婦女大于普通人,，鑒于此，在防止出生缺陷的出現(xiàn)過程中，該基因位點至關重要。在294例樣本中，未發(fā)現(xiàn)風險組發(fā)現(xiàn)只有32.00%，低風險組只有7.00%，但是中風險為35.00%顯著的高于未發(fā)現(xiàn)風險組，高風險組為26. 00%，給予基因型對葉酸進行補充，可確保出生缺陷率 MTHFR、MTRR基因型得到下降，與出發(fā)生的出生缺陷有著直接的關系，還和復發(fā)性流產明顯有關[8-9]，另一方面，葉酸的不足也被作為視為引發(fā)新生兒出生缺陷的關鍵因素之一。現(xiàn)如今，在孕前3個月至孕期前3個月，我國建議育齡婦女補服葉酸，劑量保證在400 mg/d，然而依據(jù)相關的研究證實，MTHFR和MTRR基因分布很大程度上具體一定的差異性，所以有效的掌握基因的地域分布特征很關鍵。

本研究統(tǒng)計結果顯示，和全國及南方區(qū)域女性MTHFR C677T基因型分布（表）相對比而言，包頭市MTHFR C677T純合突變TT型與全國及南方區(qū)域相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），其等位基因C和T的分布與全國及南方區(qū)域相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。與全國及南方區(qū)域女性MTHFR A1298C基因型分布（表3）對比來說，包頭市女性MTHFR A1298C純合突變型CC與全國及南方區(qū)域女性相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。其等位基因A和C的分布與全國及南方區(qū)域女性相比差異存在統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。全國及南方區(qū)域女性MTRR A66G基因型分布分布（表4）對比而言，包頭市MTHFR A66G純合突變GG型與全國及南方區(qū)域女性相比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。由此可知，從北方地區(qū)到南方地區(qū)，MTHFR 677TT純合突變型分布頻率大幅度下降[14]。新生兒神經管不足與高同型半胱氨酸息息相關，被視為一個獨立危險因素[15]。各地區(qū)基因分布特征出現(xiàn)不同，很大程度上是由于人群位于的生活環(huán)境，人們的飲食生活習慣的差異性，若是女性的葉酸檢測為中度、高度風險，需強化對膳食葉酸、葉酸制劑的補充計量，確保孕產期疾病、新生兒出生缺陷大大的降低，所以，給予各地不同人群的遺傳特征，借助構建區(qū)域性的基因多態(tài)性分布數(shù)據(jù)庫對各地地域特點制定區(qū)域性的衛(wèi)生政策充分的了解，給予行之有效的合理依據(jù)。