聶法慧
青島菲優(yōu)特檢測有限公司 山東青島 266000
深海魚油富含不飽和脂肪酸,主要有效成分為歐米伽3不飽和脂肪酸。歐米伽3不飽和脂肪酸的主要成分為EPA(二十碳五稀酸)、DHA(二十二碳六稀酸)具有增強(qiáng)記憶、改善動脈硬化[1]、促進(jìn)嬰幼兒大腦發(fā)育等重要功效。因此,對其有效組分進(jìn)行測定具有重要意義。
儀器與分析條件。島津GC2010plus氣相色譜儀。
色譜柱:SP-2560,100m×0.25mm×0.20μm;檢測器:氫火焰離子化檢測器(FID)。
載氣:高純氮氣99.999%;色譜柱流量:1.67mL/min;進(jìn)樣口溫度:250℃;檢測器溫度:260℃;溫度程序:初始溫度140℃保留5min,140-152℃升溫速度2℃/min;152-175℃升溫速度3℃/min;175-205℃,升溫速度4℃/min;205-230℃,升溫速度10℃/min,保留20min;230-240℃,升溫速度5℃/min,保留5min;進(jìn)樣量:1μL;分流比:40:1。
實驗用水為GB/T6682規(guī)定的一級用水。
(1)氫氧化鈉:優(yōu)級純。
(2)甲醇:色譜純。
(3)無水硫酸鈉:分析純。
(4)氯化鈉:分析純。
(5)三氟化硼-甲醇溶液:14%。
(6)異辛烷:色譜純。
(7)0.5M氫氧化鈉–甲醇溶液:2g氫氧化鈉溶于100mL甲醇中。該溶液放置較長時間,可能會產(chǎn)生少量白色碳酸鈉沉淀,不影響甲酯的制備。
(8)飽和氯化鈉溶液:36g氯化鈉溶于100mL水。
將32種脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)品(上海安譜GLC-461)配成標(biāo)準(zhǔn)系列,濃度分別為3,10,50,100,150μg/mL,以30μg/mL二十三烷酸甲酯為內(nèi)標(biāo),以脂肪酸甲酯與內(nèi)標(biāo)物濃度比為橫坐標(biāo),響應(yīng)峰面積比為縱坐標(biāo),作標(biāo)準(zhǔn)曲線[2]。
樣品前處理。準(zhǔn)確稱取樣品0.02g于已準(zhǔn)確加入0.9mg二十三烷酸甲酯的50mL玻璃離心管中,加入1.5mL氫氧化鈉-甲醇溶液,蓋緊蓋子,渦旋混合,沸水浴5min,通風(fēng)櫥冷卻,加2mL三氟化硼-甲醇溶液,蓋緊蓋子,渦旋混合,沸水浴30min,冷卻,加5mL異辛烷,充氮氣20s,蓋緊蓋子,渦旋混合。加5mL飽和氯化鈉溶液,充氮氣20s,蓋緊蓋子,渦旋混合,離心機(jī)2500r/min離心10min。取上清液加入盛有0.5g無水硫酸鈉的帶蓋試管中,混勻,上清液稀釋6倍過有機(jī)過濾器(0.22μm),氣相色譜儀檢測。
(1)定性。由于脂肪酸屬于同系物,出峰順序與碳鏈長度有一定的關(guān)系,對照標(biāo)準(zhǔn)圖譜,判斷21種脂肪酸甲酯的出峰順序,見圖。
(2)定量。以二十三烷酸甲酯為內(nèi)標(biāo),以脂肪酸甲酯與內(nèi)標(biāo)物濃度比為橫坐標(biāo),響應(yīng)峰面積比為縱坐標(biāo),作標(biāo)準(zhǔn)曲線。將處理好的待測液注入氣相色譜儀中,以保留時間定性,以目標(biāo)峰與內(nèi)標(biāo)峰面積比與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較確定待測液中脂肪酸甲酯的濃度[3]。
樣品中脂肪酸含量(%)計算如下式:
式中:
X——樣品中脂肪酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù);
C——待測液中脂肪酸甲酯濃度,單位:μg/mL;
V——定容體積,單位:mL;
f——稀釋倍數(shù);
m——樣品質(zhì)量,單位:g;
FFAMEi-FAi——脂肪酸甲酯i轉(zhuǎn)化成脂肪酸的系數(shù)。
在實驗條件下,21種脂肪酸甲酯響應(yīng)具有良好的線性關(guān)系,R2大于0.999。
(1)方法精密度。選取兩個魚油作為樣品,每個樣品測定10次,分別計算21種脂肪酸含量,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.8%-4.8%之間,符合檢測要求。
(2)方法準(zhǔn)確度。在魚油樣品種做脂肪酸甲酯的添加回收,平行測定10次,平均回收率在97-105%之間。購買有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(FapasT14152)進(jìn)行測定,結(jié)果都在允許誤差范圍內(nèi)。該方法準(zhǔn)確度符合檢測要求[4]。
通過測定結(jié)果可以看出,本方法能夠?qū)︳~油中的脂肪酸進(jìn)行較好的分離定性和定量檢測,具有較好的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。能夠較為準(zhǔn)確的檢測魚油中脂肪酸的含量。