2 饒體宇李 婷 張 益 包細(xì)明 吳伯梅 彭慶波

(1.貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025； 2.貴州省動物疫病研究所，貴州 貴陽 550025)

鴨瘟又稱鴨病毒性腸炎，是由皰疹病毒科(Herpesviridae)的鴨瘟病毒(Duck plague virus， DPV)引起鴨、鵝和其他雁形目水禽的急性、熱性、敗血性傳染病[1]。DPV有極強(qiáng)的傳染力，傳播速度快，發(fā)病率和死亡率高，給養(yǎng)鴨業(yè)造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。主要造成血管的破壞，內(nèi)臟器官和淋巴器官的廣泛出血[2]。潛伏期為2～7天，出現(xiàn)癥狀后常在1～5天內(nèi)死亡，病情緩慢的可延長至1周以上，通常感染后陸續(xù)死亡[3]。2019年3月，貴陽市某蛋鴨養(yǎng)殖場引進(jìn)鴨7 天后發(fā)生疫情，現(xiàn)將診斷情況介紹如下。

1 流行病學(xué)調(diào)查

2019年3月19日該場新引進(jìn)90日齡鴨 5 000羽，7天后突然發(fā)病，陸續(xù)死亡，共計死亡3 142羽，死亡率達(dá)62.84%(3 142/5 000)。引進(jìn)鴨曾接種禽流感、新城疫重組二聯(lián)活疫苗，發(fā)病后使用抗生素、抗應(yīng)激藥物治療無效。

2 臨床癥狀

患病鴨初期眼部有漿液性分泌物，致使眼部周圍羽毛粘連，無法睜眼；眼瞼水腫，眼結(jié)膜充血；精神萎靡，呼吸困難，食欲減退至廢絕。

3 病理變化

將養(yǎng)殖場送檢的4只病死鴨進(jìn)行剖檢，可見頸部皮下出血，食道有潰瘍灶，氣管出現(xiàn)環(huán)狀出血，腸漿膜表面有出血點，肌胃表面有出血斑和出血點，腺胃壁出血，肝臟有出血點，心肌內(nèi)膜充血，泄殖腔黏膜充血水腫。根據(jù)典型病理變化初步診斷為鴨瘟。

4 實驗室PCR檢測

為確定病原，無菌采集4只病死鴨的心、腎、肺、肝、脾組織病料，剪碎研磨并勻漿，反復(fù)凍融4次，8 000 r/min 離心5 min，取上清液用DNA柱式提取試劑盒提取病原核酸。根據(jù)參考文獻(xiàn)[5]合成特異性引物：DPV-UL6-F：5’-GAAGCATATCGTTCGGAGG AG-3’，R：5’-TATCGCCTGCCAACTTATATCG-3’(登錄號：AY995224)。引物由英濰捷基(上海)貿(mào)易公司合成，預(yù)擴(kuò)增片段大小376 bp。PCR擴(kuò)增采用25 μL反應(yīng)體系：2×TaqPCR Master Mix 12.5 μL，上、下游引物各1 μL，DNA模板 2 μL，最后加ddH2O補(bǔ)足25 μL。反應(yīng)程序：95 ℃預(yù)變性 5 min；95 ℃變性 45 s，56 ℃退火 45 s，72 ℃延伸45 s，擴(kuò)增35個循環(huán)；72 ℃終延伸 10 min，4 ℃反應(yīng)結(jié)束。同時設(shè)立DPV陽性對照與陰性對照。凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果(見圖1)：4份病料提取的DNA樣本經(jīng)過PCR擴(kuò)增有3份病料擴(kuò)增出約376 bp的特異性條帶，與預(yù)擴(kuò)增大小基本相同，確定為DPV感染。

圖1 病原核酸PCR檢測結(jié)果M：DL 2 000 DNA Marker； 1～4：檢測病料；5：陰性對照(ddH2O)； 6：陽性對照

5 小結(jié)

5.1通過對病鴨的流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀、病理變化等進(jìn)行初步診斷，發(fā)現(xiàn)其病變(食道出現(xiàn)潰瘍灶、腸漿膜出血、氣管環(huán)狀出血)與鴨瘟的病變極其相似。進(jìn)一步設(shè)計鴨瘟病毒特異性引物，進(jìn)行鴨瘟病毒核酸PCR檢測，確診為鴨瘟病毒感染。

5.2鴨瘟的防控措施：(1)鴨瘟雞胚化弱毒疫苗對鴨瘟有良好的免疫效果，雛鴨出生20天后進(jìn)行第 1次接種，可有效降低鴨瘟病毒的感染。如果已有鴨瘟發(fā)生，發(fā)病鴨要緊急接種鴨瘟活疫苗(10倍劑量)并飼喂添加抗菌藥物的飼料(玉米粒24 kg+阿莫西林40 g+氟苯尼考83 g，混勻)防止細(xì)菌繼發(fā)感染加重病情。其他未發(fā)病的鴨接種鴨瘟活疫苗(4倍劑量)并飼喂增強(qiáng)免疫力的中成藥(玉米粒24 kg+芪黃素80 g+雙黃連160 g，混勻)提高鴨的免疫力，控制病情的蔓延[6]。(2)引進(jìn)鴨時要求出售方提供免疫記錄檔案，不在無免疫記錄檔案或者記錄檔案不清楚的鴨場引種；運載車輛在運輸前應(yīng)進(jìn)行徹底消毒，路途不經(jīng)過疫區(qū)[7]。(3)引進(jìn)鴨進(jìn)場后需要在隔離區(qū)隔離觀察7天并進(jìn)行檢疫，確定健康后才能混群飼養(yǎng)。(4)養(yǎng)殖人員在進(jìn)入養(yǎng)殖區(qū)前必須進(jìn)行消毒、換鞋。保持鴨舍通風(fēng)，定期進(jìn)行清掃消毒，控制好濕度、溫度及飼養(yǎng)密度。飼喂全價飼料，根據(jù)鴨群的采食量控制飼喂量，防止飼料霉?fàn)€變質(zhì)。