張 芬，楊一平，陳偉國(guó)，錢秋杰，林蔚紅，戴建忠，孫海燕

（海寧市蠶桑技術(shù)服務(wù)站，浙江 嘉興 314400）

吡蟲啉（imidacloprid）屬硝基亞甲基類內(nèi)吸殺蟲劑，作用于昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)煙酸乙酰膽堿酯酶受體，從而阻斷昆蟲中樞神經(jīng)系統(tǒng)的正常傳導(dǎo)，對(duì)刺吸式口器害蟲防效良好，對(duì)人畜毒性低［1～2］。吡蟲啉在我國(guó)從上世紀(jì)末開始使用，是近20年來新煙堿類殺蟲劑的代表品種之一，害蟲對(duì)吡蟲啉已產(chǎn)生高抗性［3～4］，實(shí)際使用濃度隨之成倍增加，但目前仍然是水稻、果樹、杭白菊等作物防治飛虱、薊馬、蚜蟲的推薦藥劑［5］。自從吡蟲啉問世以來，因污染桑葉造成的養(yǎng)蠶生產(chǎn)安全事故屢有發(fā)生，有關(guān)吡蟲啉對(duì)家蠶的毒性研究結(jié)果卻不盡相同［6－10］，尤其是已經(jīng)遭受養(yǎng)蠶中毒或懷疑桑葉被污染時(shí)，對(duì)如何判斷毒性殘留的當(dāng)期或下一期蠶的安全隱患帶來不確定性和困惑。為此，我們于2018年秋季測(cè)定了10%吡蟲啉可濕性粉劑對(duì)家蠶的毒性和殘毒期，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試農(nóng)藥

10%吡蟲啉可濕性粉劑，杭州泰豐化工有限公司生產(chǎn)，農(nóng)藥登記證號(hào)PD20040353。

1.1.2 供試家蠶品種

“白玉×秋豐”，浙江省海寧市新興蠶種制造有限公司生產(chǎn)。

1.1.3 供試桑園及桑樹品種

海寧市蠶桑技術(shù)服務(wù)站試驗(yàn)桑園，農(nóng)桑14號(hào)，8年生，中干偏低樹型養(yǎng)成，每667 m2桑園栽植1000株。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 吡蟲啉對(duì)家蠶急性食下毒性試驗(yàn)

經(jīng)預(yù)備試驗(yàn)，將10%吡蟲啉可濕性粉劑按質(zhì)量濃度稀釋成5～7個(gè)濃度梯度，取適齡桑葉分別浸入不同濃度的稀釋藥液中1 min，取出后自然晾干，放置于保鮮盒內(nèi)，然后給入3齡起蠶供試。每個(gè)濃度處理小區(qū)20頭，以清水處理為空白對(duì)照，重復(fù)3次，在溫度（26.5±1.0）℃、相對(duì)濕度75%～85%的恒溫室內(nèi)飼養(yǎng)，24 h后改用新鮮無毒桑葉繼續(xù)飼養(yǎng)至4齡起蠶，每天調(diào)查幼蟲中毒死亡率。采用DPS（15.10版）統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)藥液質(zhì)量濃度對(duì)數(shù)與幼蟲死亡率概率值進(jìn)行線性回歸分析［11］，求出致死中濃度（LC50）和95%置信限。

1.2.2 吡蟲啉在桑葉上的殘留毒性和內(nèi)吸傳導(dǎo)毒性試驗(yàn)

試驗(yàn)在晚秋蠶期（9月下旬）進(jìn)行，將10%吡蟲啉可濕性粉劑稀釋成750倍和1500倍液（吡蟲啉質(zhì)量濃度分別為133.33、66.67 mg/L），2種試驗(yàn)濃度各選定15株桑樹，在枝條頂端最大葉位處做好標(biāo)記，防止后期采摘未噴到藥液的新生桑葉。每株供試桑樹中各選取1～2根生長(zhǎng)中等的枝條，上半部分用透明塑料袋暫時(shí)密封，將試驗(yàn)藥液均勻噴灑于供試桑樹，桑葉正反葉面噴濕為度，處理間設(shè)保護(hù)行隔離。待葉面及塑料袋表面的藥液干后撕開套在枝條上的塑料袋頂部并做好固定，以免袋內(nèi)未噴藥處理的桑葉受污染。噴藥后間隔一定時(shí)間采摘不同濃度藥液噴灑的桑葉，以及袋內(nèi)未直接噴藥處理的桑葉喂蠶，以新鮮無毒桑葉為對(duì)照，每處理小區(qū)30頭3齡起蠶，重復(fù)3次，飼養(yǎng)至4齡起蠶結(jié)束，逐日調(diào)查記載各處理區(qū)中毒死亡蠶頭數(shù)，計(jì)算中毒死亡率。

1.2.3 吡蟲啉對(duì)家蠶的中毒癥狀觀察

在毒性試驗(yàn)過程中，觀察記錄家蠶中毒癥狀。

2 結(jié)果與分析

2.1 吡蟲啉對(duì)3齡家蠶的急性食下毒性

采用浸葉法測(cè)定10%吡蟲啉可濕性粉劑對(duì)3齡起蠶的急性食下毒性，添毒24 h的毒力回歸方程為Y=4.4316+5.2343X，相關(guān)系數(shù) r=0.9824，LC50為1.2841 mg/L，95%置信限為1.2003～1.3654 mg/L。參照2014年發(fā)布的《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則第11部分：家蠶急性毒性試驗(yàn)》附錄A“農(nóng)藥對(duì)家蠶的毒性等級(jí)劃分”［12］，10%吡蟲啉可濕性粉劑對(duì)家的毒性等級(jí)為高毒（0.5＜LC50≤20 mg/L）。10%吡蟲啉可濕性粉劑防治稻飛虱常用稀釋倍數(shù)為750～1500倍（質(zhì)量濃度133.33～66.67 mg/L），是LC50的52～104倍（毒性比），對(duì)養(yǎng)蠶生產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)較高。

2.2 吡蟲啉在桑樹上的殘留毒性和內(nèi)吸傳導(dǎo)毒性

由表1可見，10%吡蟲啉可濕性粉劑750倍稀釋藥液噴于桑樹枝葉，至噴藥后7 d采摘藥液處理桑葉飼喂3齡起蠶，死亡率100%，噴藥后9 d開始死亡率逐漸下降，但到噴藥后39 d時(shí)仍有38.89%的蠶死亡；10%吡蟲啉可濕性粉劑1500倍藥液處理的桑葉，噴藥后27 d和31 d僅有個(gè)別蠶死亡，噴藥后35 d的桑葉喂蠶不再出現(xiàn)中毒死亡。采摘10%吡蟲啉可濕性粉劑750倍和1500倍處理區(qū)枝條上部未直接噴藥的桑葉飼喂3齡起蠶，間隔1～5 d均未出現(xiàn)中毒癥狀和死亡蠶，表明試驗(yàn)條件下吡蟲啉通過桑葉內(nèi)吸傳導(dǎo)的毒性作用很小。

2.3 吡蟲啉對(duì)家蠶的中毒癥狀

3齡蠶食下吡蟲啉藥葉后，食桑停止或減少，初期頭胸?fù)u擺呈苦悶狀，狂躁爬行，吐液較多；然后胸部膨大，頭尾向背彎曲，呈“U”或“O”字形，死亡后仍保持這種狀態(tài)，是家蠶吡蟲啉中毒的典型癥狀，其它煙堿類殺蟲劑也多有相似癥狀。

表1 10%吡蟲啉可濕性粉劑在桑葉上的殘留毒性和內(nèi)吸毒性測(cè)定結(jié)果Table 1 Determination of Residual Toxicity and Ssystemic Toxicity of 10%Imidacloprid Wettable Powder on Mulberry Leaves

3 小結(jié)與討論

3.1 吡蟲啉對(duì)家蠶的急性毒性

本試驗(yàn)測(cè)定10%吡蟲啉可濕性粉劑對(duì)3齡起蠶的急性食下毒性，添毒24 h的LC50為1.2841 mg/L，對(duì)家蠶的毒性等級(jí)為高毒（0.5＜LC50≤20 mg/L），與李二蘭等［13］（3齡起蠶96 h）的1.1771 mg/L、于彩虹等［14］（2 齡起蠶 96 h）的 1.548 mg/L、何明遠(yuǎn)等［15］（2齡起蠶96 h）的1.182 mg/L結(jié)果相近；崔新倩等［16］（2齡起蠶96 h）的0.174 mg/L、羅雁婕等［17］（2齡起蠶96 h）的0.256 mg/L、吳若函等［18］（2齡起蠶96 h）的0.256 mg/L則達(dá)到劇毒等級(jí)（LC50≤0.5 mg/L）。

3.2 吡蟲啉對(duì)家蠶的殘留毒性

杜國(guó)良［8］試驗(yàn)10%吡蟲啉可濕性粉劑4000倍（25 mg/L）噴施20 d采葉喂蠶，未發(fā)現(xiàn)蠶兒有中毒現(xiàn)象，對(duì)蠶后期發(fā)育及上蔟、結(jié)繭、發(fā)蛾制種基本無影響。周春濤等［9］測(cè)定70%吡蟲啉水分散粒劑2500倍（280 mg/L）噴藥后15 d采葉喂飼3齡起蠶不致死。魯興萌等［10］測(cè)試10%吡蟲啉可濕性粉劑3000倍（33.33 mg/L）在秋季噴施桑園，對(duì)2齡起蠶測(cè)試一個(gè)齡期，殘效期為15 d；但春季噴施桑園，噴藥后30 d喂飼2齡起蠶并持續(xù)測(cè)試，飼養(yǎng)至3齡期或4齡期仍有中毒蠶出現(xiàn)，表明吡蟲啉的安全期較為復(fù)雜。

本試驗(yàn)測(cè)定10%吡蟲啉可濕性粉劑1500倍（66.67 mg/L）藥液處理桑葉的殘毒期為35 d，750倍（133.33 mg/L）噴藥后39 d時(shí)仍有38.89%的蠶死亡。吡蟲啉在桑葉上的殘留毒性比前述試驗(yàn)結(jié)果明顯延長(zhǎng)，可能與試驗(yàn)在晚秋蠶期進(jìn)行，試驗(yàn)桑園未飼養(yǎng)秋蠶，枝葉生長(zhǎng)旺盛，郁閉度高，光照和氣溫偏低。盡管吡蟲啉具有內(nèi)吸作用，但本試驗(yàn)采用10%吡蟲啉可濕性粉劑750倍和1500倍藥液對(duì)枝條下部桑葉噴霧，上部未直接噴藥的桑葉對(duì)3齡起蠶不表現(xiàn)出毒性作用，表明吡蟲啉通過桑葉內(nèi)吸向上傳導(dǎo)的毒性作用很小。

3.3 吡蟲啉對(duì)家蠶的安全性

吡蟲啉對(duì)家蠶的急性食下毒性很高，在桑葉上的毒性殘留時(shí)間很長(zhǎng)，因此吡蟲啉對(duì)養(yǎng)蠶生產(chǎn)具有潛在危害性。庾琴等［19］研究了吡蟲啉在油菜葉面的消解速度，隨著溫度升高和光照增強(qiáng)而加快。被吡蟲啉污染的桑葉，應(yīng)充分考慮污染途徑、污染程度以及污染后溫度、光照等環(huán)境條件的影響，切不可簡(jiǎn)單參照個(gè)別試驗(yàn)結(jié)果來判斷。為避免不必要的中毒損失，建議在桑園及其周圍，或在距養(yǎng)蠶較近時(shí)不使用吡蟲啉。