林少華，陳存坤，張慧杰，羅紅霞，*，王麗瓊，崔夢(mèng)嬌，許文濤，鄧毛程，*

（1.北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院食品與生物工程系，北京 102442；2.國(guó)家農(nóng)產(chǎn)品保鮮工程技術(shù)研究中心（天津），天津市農(nóng)產(chǎn)品采后生理與貯藏保鮮重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300384；3.天津科技大學(xué)食品工程與生物技術(shù)學(xué)院，食品營(yíng)養(yǎng)與安全省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300457；4.廣東輕工職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物技術(shù)學(xué)院，廣東高校特色調(diào)味品工程技術(shù)開(kāi)發(fā)中心，廣東 廣州 510300；5.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)工程學(xué)院，食品營(yíng)養(yǎng)與人類健康高精尖創(chuàng)新中心，北京 100083）

香椿（Toona sinensis）又名椿芽，作為一種中國(guó)特有的木本蔬菜，風(fēng)味獨(dú)特，保健功效顯著，是名副其實(shí)的綠色蔬菜[1]。香椿含有的活性成分，如黃酮、皂甙、萜類和內(nèi)酯等，具有清除人體中的自由基，抑制細(xì)菌生長(zhǎng)和消除炎癥等作用[2-3]。然而，香椿季節(jié)性強(qiáng)，嫩芽水分含量高，采后呼吸旺盛，容易發(fā)生萎蔫、脫葉和腐爛等現(xiàn)象，貯藏期和貨架期較短。在常溫下放置1 d～2 d已基本失去商品價(jià)值，貯藏和運(yùn)輸?shù)碾y度較大，嚴(yán)重制約了香椿產(chǎn)業(yè)的發(fā)展[4]。

為了延長(zhǎng)香椿的貯藏期，研究者單獨(dú)或者聯(lián)合使用了物理（控溫、控濕、減壓和氣調(diào)等）、化學(xué)（吸附型、防腐型和抑制型保鮮劑）以及各類生物制劑等保鮮方法[5-8]。大多從感官（如失重率、L*值、a*值和 b*值），理化（如呼吸率、乙烯生成率、葉綠素、酚類、可溶性糖等）和酶活（多酚氧化酶、過(guò)氧化酶、過(guò)氧化氫酶和超氧化酶等）等指標(biāo)對(duì)香椿貯藏的結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。然而，對(duì)新鮮香椿貯藏期間微生物數(shù)量及群落多樣性的變化的研究較少。趙芳等[9]發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)不同冷殺菌處理的半加工香椿在常溫貯藏過(guò)程中，細(xì)菌總數(shù)明顯的升高。即使蔬菜貯藏在低溫環(huán)境中，微生物的數(shù)量仍會(huì)增加[10]，這些微生物的種類非常豐富，包括不同門類的細(xì)菌和真菌，其中一些腐敗菌的增長(zhǎng)與蔬菜的腐爛變質(zhì)有很強(qiáng)的正相關(guān)[11]。但是傳統(tǒng)的依靠于可培養(yǎng)微生物檢測(cè)方法不能全面地鑒別菌群種類而導(dǎo)致不可培養(yǎng)微生物信息的缺失。而近些年發(fā)展起來(lái)的下一代測(cè)序技術(shù)（基于illumina 平臺(tái)的高通量測(cè)序技術(shù)）具有準(zhǔn)確率高、信息量全，能夠快速地分析出復(fù)雜微生物群落的多樣性等優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于食品加工[12]、植物生長(zhǎng)[13]、土壤和水體環(huán)境[14-15]、人體健康[16]等領(lǐng)域的研究。在果蔬貯藏保鮮領(lǐng)域，Abdelfattah 等[17]發(fā)現(xiàn)通過(guò)下一代測(cè)序技術(shù)首次發(fā)現(xiàn)了蘋果表面許多未知的真菌類群，青霉屬在受傷的果皮中占優(yōu)勢(shì)，鏈格孢屬在花萼和莖端中占優(yōu)勢(shì)。Diskin 等[18]發(fā)現(xiàn)引起貯藏期間芒果莖端腐爛的主要病原菌是鏈格孢菌（Alternaria alternata）和色二孢菌（Lasiodiplodia theobromae）。但是采用下一代測(cè)序技術(shù)分析蔬菜在貯藏期間微生物多樣性的研究仍未見(jiàn)報(bào)道。

本文以香椿為研究對(duì)象，在研究了聚氯乙烯（polyvinyl chloride，PVC）保鮮膜，及其與紫外（ultraviolet irradiation，ZW）照射結(jié)合、與1-甲基環(huán)丙烯（1-methylcyclopropene，1-MCP） 結(jié)合、與乙烯吸附劑（ethylene absorbent，EA）結(jié)合的保鮮處理對(duì)香椿貯藏品質(zhì)影響的基礎(chǔ)上，采用下一代測(cè)序技術(shù)，通過(guò)對(duì)細(xì)菌的16S rDNA V57 區(qū)和真菌ITS 1 區(qū)進(jìn)行測(cè)序，進(jìn)一步分析了這3 種不同保鮮方法處理的香椿表面細(xì)菌和真菌的多樣性，從而為更好地延長(zhǎng)香椿的貨架時(shí)間并提高其貯藏品質(zhì)，以及為其他果蔬的貯藏保鮮提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

香椿：北京市門頭溝區(qū)雁翅鎮(zhèn)葦子水村。

1-甲基環(huán)丙烯：陜西咸陽(yáng)西秦生物公司，每袋凈含量0.3 g；乙烯吸收劑（EA）：山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，每袋凈含量8 g，有效成分為高錳酸鉀（質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥10%）；PVC 膜：國(guó)家農(nóng)產(chǎn)品保鮮工程技術(shù)研究中心，厚度0.01 mm，伸長(zhǎng)率365.525%，抗張強(qiáng)度13.005 MPa，透氣性 1 213.27 cm3/2 h·0.1 MPa，透濕率 61.82 g/m2·24 h；三羥甲基氨基甲烷（分析純）：美國(guó)Amresco 公司；宏基因組DNA 提取試劑盒25T/50T：北京福德安科技（北京）有限公司；10×PCR buffer、dNTP、rTaq DNA 聚合酶、上樣緩沖液6×Loading Buffer：寶生物工程（大連）有限公司；引物：Thermo Fisher Scientific 公司合成；2 000 bp marker：賽默飛世爾科技公司；高通量測(cè)序試劑：諾禾致源生物信息技術(shù)有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

ZQJ-254 型紫外強(qiáng)度計(jì)：上海顧村電光儀器廠產(chǎn)品；短波紫外線保鮮照射箱：國(guó)家農(nóng)產(chǎn)品保鮮中心（天津）產(chǎn)品；MDF-382E 超低溫冰箱：日本三洋電機(jī)公司；3K15 離心機(jī)：上海希格瑪高技術(shù)有限公司；5804 R 離心機(jī)：艾本德中國(guó)有限公司；ALD1244 PCR 擴(kuò)增儀、CFX96 定量PCR 儀：伯樂(lè)生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品（上海）有限公司；E 凝膠成像儀：美國(guó) UVP 公司；Miseq 高通量測(cè)序儀：美國(guó)Illumina 公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品處理

挑選新鮮、無(wú)病蟲害、成熟度和大小基本一致的香椿隨機(jī)分為5 組，每組重量為400 g，分別進(jìn)行如下處理：①CK 組（對(duì)照組），不做任何保鮮處理；②PVC組，選用0.01 mm 厚度的PVC 膜包裹；③PVC+ZW 組，在PVC 膜包裹的條件下，每隔10 d 紫外照射1 次，燈管功率為40 W，強(qiáng)度為 375 μW/cm2，時(shí)間為 10 min；④PVC+1-MCP 組，在PVC 膜包裹的條件下，加入1 包1-MCP；⑤PVC+EA 組，在 PVC 膜包裹的條件下，加入1 包EA。所有處理組均置于溫度為（1±0.5）℃，濕度為（90±5）%的冷庫(kù)中貯藏，設(shè)置3 次重復(fù)，取樣時(shí)間分別為 0、10、20 d 和 30 d，每次樣品置于-80 ℃超低溫冰箱中進(jìn)行冷凍保存，備用于微生物多樣性的檢測(cè)。

1.3.2 基因組DNA 的提取

按照福德安DNA 提取試劑盒的說(shuō)明提取香椿表面微生物總的DNA，然后利用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA 的純度和濃度。

1.3.3 PCR 擴(kuò)增及測(cè)序

對(duì)細(xì)菌16S rDNA 的V57 區(qū)域和真菌的ITS 1 區(qū)域進(jìn)行擴(kuò)增，根據(jù)測(cè)序區(qū)域的選擇，使用表1所示的特異引物。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）反應(yīng)體系（30 μL）：Phusion Master Mix（2×）15 μL，Primer（2 μmol/L）3 μL（6 μmol），gDNA（1 ng/μL）10 μL（5 ng～10 ng），H2O2μL。反應(yīng)程序：98 ℃預(yù)變性 1 min；30 個(gè)循環(huán)包括（98 ℃，10 s；50 ℃，30 s；72 ℃，30 s）；72 ℃，5 min。PCR 產(chǎn)物使用2%濃度的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測(cè)，根據(jù)PCR 產(chǎn)物濃度進(jìn)行等濃度混樣，充分混勻后使用1×TAE 濃度為2%的瓊脂糖膠電泳純化PCR 產(chǎn)物，然后割膠并使用GeneJET 膠回收試劑盒回收目標(biāo)條帶。使用New England Biolabs 公司的NEBUltraTMDNA Library Prep Kit for Illumina 建庫(kù)試劑盒進(jìn)行文庫(kù)的構(gòu)建，構(gòu)建好的文庫(kù)經(jīng)過(guò)Qubit 定量和文庫(kù)檢測(cè)，合格后，使用HiSeq 進(jìn)行上機(jī)測(cè)序。

表1 細(xì)菌、真菌的PCR 擴(kuò)增引物設(shè)計(jì)Table 1 Design of PCR amplification primers for bacterial and fungi

1.3.4 數(shù)據(jù)處理

根據(jù)Barcode 序列和PCR 擴(kuò)增引物序列從下機(jī)數(shù)據(jù)中拆分出各樣品數(shù)據(jù)，截去Barcode 和引物序列后使用 FLASH（V1.2.7）[19]對(duì)每個(gè)樣品的 reads 進(jìn)行拼接，得到的拼接序列為原始數(shù)據(jù)（raw data）；測(cè)序得到的原始數(shù)據(jù)，存在一定比例的干擾數(shù)據(jù)（dirty data），為了使信息分析的結(jié)果更加準(zhǔn)確、可靠，首先對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行拼接、過(guò)濾，得到有效數(shù)據(jù)（clean data）?；谟行?shù)據(jù)，通過(guò) QIIME（V1.7.0）[20]的質(zhì)量控制流程，進(jìn)行如下操作：（1）Tags 截取：將原始 Tags 從連續(xù)低質(zhì)量值（默認(rèn)質(zhì)量閾值為≤19）堿基數(shù)達(dá)到設(shè)定長(zhǎng)度（默認(rèn)長(zhǎng)度值為3）的第一個(gè)低質(zhì)量堿基位點(diǎn)截?cái)?；?）Tags 長(zhǎng)度過(guò)濾：Tags 經(jīng)過(guò)截取后得到的Tags 數(shù)據(jù)集，進(jìn)一步過(guò)濾掉其中連續(xù)高質(zhì)量堿基長(zhǎng)度小于Tags 長(zhǎng)度75%的Tags。經(jīng)過(guò)以上處理后得到的Tags 需要進(jìn)行去除嵌合體序列的處理，Tags 序列通過(guò)與Gold database 數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)檢測(cè)嵌合體序列，并最終去除其中的嵌合體序列，得到最終的有效數(shù)據(jù)。

1.3.5 Operational Taxonomic Units（OTUs）聚類、物種注釋及多樣性分析

將所有樣品的全部最終有效數(shù)據(jù)利用Uparse 軟件（Uparse v7.0.1001）進(jìn)行聚類，默認(rèn)以97%的一致性將序列聚類成為OTUs，同時(shí)選取OTUs 的代表性序列，依據(jù)其算法原則，篩選的是OTUs 中出現(xiàn)頻數(shù)最高的序列作為OTUs 的代表序列。對(duì)OTUs 代表序列進(jìn)行物種注釋，用Mothur 方法與SILVA 的SSUrRNA 數(shù)據(jù)庫(kù)[21]進(jìn)行物種注釋分析（設(shè)定閾值為0.8～1），獲得分類學(xué)信息并分別在各個(gè)分類水平上統(tǒng)計(jì)各樣本的群落組成。利用Excel、SPSS、R 語(yǔ)言等軟件對(duì)OTUs 數(shù)據(jù)進(jìn)行α 多樣性指數(shù)進(jìn)行計(jì)算和對(duì)比分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品測(cè)序數(shù)據(jù)

采用下一代測(cè)序技術(shù)對(duì)3 種不同保鮮處理的香椿進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果見(jiàn)表2。

細(xì)菌16S 高通量測(cè)序結(jié)果顯示，5 組的有效數(shù)據(jù)的范圍為 165 690 bp ～ 305 049 bp（CK 組在第 10 天后已經(jīng)全部腐爛，因此未對(duì)其后續(xù)進(jìn)行取樣檢測(cè)），堿基平均長(zhǎng)度范圍為373 bp～376 bp，在97%相似水平下的OTUs 生物信息統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，各組樣品中總OTUs 數(shù)的范圍為 352～856，其中，PVC+ZW 組的 OTUs 數(shù)最低。真菌ITS 測(cè)序結(jié)果與細(xì)菌的結(jié)果相似，PVC+ZW 組的總OTUs 數(shù)最低為407。

表2 樣品中細(xì)菌和真菌有效序列與OTUs 數(shù)量統(tǒng)計(jì)Table 2 Observed valid sequences and OTUs of bacterial and fungi in different samples

2.2 樣品多樣性指數(shù)分析

本文通過(guò)分析3 種不同保鮮處理后的香椿的OTUs 及 Simpson、Shannon 和 Chao 指數(shù)等多樣性指標(biāo)，對(duì)各個(gè)組樣品中的細(xì)菌和真菌的多樣性和豐富度進(jìn)行了評(píng)估，結(jié)果如圖1和圖2所示。

圖1 箱型圖繪制的各組樣品中觀察到的細(xì)菌OTUs 和多樣性指數(shù)Fig.1 Box-plot of observed OTUs and diversity of bacterial community in different group

圖2 箱型圖繪制的各組樣品中觀察到的真菌OTUs 和多樣性指數(shù)Fig.2 Box-plot of observed OTUs and diversity of fungi community in different group

箱型圖結(jié)果表明，PVC+ZW 組的細(xì)菌OTUs 數(shù)與PVC+1-MCP 組差異不顯著，但與PVC+EA 組差異顯著，與PVC 組和CK 組差異極顯著（圖1A）。PVC+ZW組的真菌OTUs 數(shù)與PVC+1-MCP 組和PVC+EA 組差異不顯著，但與PVC 組和CK 組差異顯著（圖2A）。經(jīng)過(guò)紫外照射的香椿表面的細(xì)菌和真菌的Simpson、Shannon 和Chao 指數(shù)都是最低的，其中，細(xì)菌的Simpson 和 Shannon 指數(shù)均與 CK 組和 PVC 組差異顯著，而真菌則差異極顯著。但是細(xì)菌的Chao 指數(shù)與CK 組和PVC 組差異不顯著，但真菌差異顯著。與加了1-MCP和EA 保鮮劑的處理組相比，PVC+ZW 組細(xì)菌的Simpson 和Shannon 指數(shù)與PVC+1-MCP 組差異不顯著，但Chao 指數(shù)差異顯著；與PVC+EA 組比，Simpson指數(shù)差異顯著，但Shannon 和Chao 指數(shù)差異不顯著。真菌方面的比較則顯示，PVC+ZW 組細(xì)菌的Simpson和Shannon 指數(shù)與PVC+1-MCP 組和PVC+EA 組差異顯著或者極顯著，但Chao 指數(shù)差異顯著。因此，紫外照射能夠降低菌群的多樣性。紫外照射主要通過(guò)消除食品表面的微生物或者食源性病原體來(lái)減少其腐敗的一種處理技術(shù)，它可以在DNA 中相鄰的嘧啶堿基之間產(chǎn)生交聯(lián)，誘導(dǎo)DNA 損傷和形成嘧啶二聚體，其光產(chǎn)物能夠阻礙DNA 復(fù)制和轉(zhuǎn)錄及改變了磷酸糖的骨架，從而導(dǎo)致微生物死亡[22]。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究表明紫外照射可以有效延緩果蔬腐爛，延長(zhǎng)其保質(zhì)期[23-24]。

2.3 香椿貯藏過(guò)程中菌落組成的變化

2.3.1 細(xì)菌門和目分類水平的變化

3 種不同保鮮方法處理的香椿在貯藏過(guò)程中細(xì)菌在門和目分類水平上的相對(duì)豐度如圖3所示。

由圖3可知，通過(guò)下一代測(cè)序，一共發(fā)現(xiàn)了6 個(gè)門，分別為放線菌門（Actinobacteria）、擬桿菌門（Bacteroidetes）、藍(lán)菌門（Cyanobacteria）、厚壁菌門（Firmicutes）、變形菌門（Proteobacteria），還有一個(gè)門未確定。其中，由圖3A 可知，Cyanobacteria 是香椿貯藏期間的優(yōu)勢(shì)門，它們通過(guò)光合作用獲得能量，具有固氮能力和對(duì)不良環(huán)境的抵抗能力[25]。PVC+ZW 處理的香椿在貯藏期間，Cyanobacteria 占有絕對(duì)的優(yōu)勢(shì)，這表明紫外照射對(duì)其他門類的細(xì)菌具有較高的殺滅作用。其他4個(gè)處理組隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，Proteobacteria 的相對(duì)豐度逐漸增加并成為了第二優(yōu)勢(shì)門（圖3B），但其對(duì)人類健康具有潛在的威脅[26]，通過(guò)進(jìn)一步對(duì)目水平進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，假單胞菌目（Pseudomonadales）在貯藏后期逐漸成為優(yōu)勢(shì)目，其含有一些可能引起肺炎的條件性病原菌，如假單胞菌（Pseudomonas）、莫拉菌（Moraxella）和不動(dòng)桿菌（Acinetobacter）等。

圖3 門和目水平下細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)分布圖Fig.3 Distributions of bacterial communities at phylum and order level

2.3.2 真菌門和目分類水平的變化

3 種不同保鮮方法處理的香椿在貯藏過(guò)程中真菌在門和目分類水平上的相對(duì)豐度如圖4所示。

由圖4可知，通過(guò)測(cè)序發(fā)現(xiàn)，香椿在貯藏期間有3個(gè)門，包括子囊菌門（Ascomycota）、擔(dān)子菌門（Basidiomycota）和接合菌門（Zygomycota），其中，Ascomycota和Basidiomycota 是優(yōu)勢(shì)門，它們腐生的方式可以導(dǎo)致香椿霉?fàn)€及殘?bào)w的分解。從圖4A 可以看出，PVC+ZW處理組中Ascomycota 是絕對(duì)優(yōu)勢(shì)門，但Basidiomycota的相對(duì)豐度也隨時(shí)間的延長(zhǎng)而增加。其他4 個(gè)處理組中，Basidiomycota 逐漸成為第一優(yōu)勢(shì)門。通過(guò)目水平進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，PVC+ZW 處理組中座囊菌目（Ascomycota）是優(yōu)勢(shì)目，說(shuō)明其對(duì)紫外照射的抗性較高。但其他目的豐度也逐漸增加，這可能與間歇式紫外照射有關(guān)，當(dāng)真菌暴露在紫外照射時(shí)，它們會(huì)被殺死，產(chǎn)生的孢子也會(huì)減少，但不再紫外照射時(shí)，這些殘存的孢子又會(huì)恢復(fù)，而且隨著真菌年齡的增長(zhǎng)，它們的抵抗力也會(huì)進(jìn)一步上升[27]。在其他處理組中，多孔菌目（Polyporales）成為了優(yōu)勢(shì)菌目，含有1 800 種真菌，而且絕大多數(shù)種類都是以腐生為主，通常出現(xiàn)在死的或者垂死的植物上。部分種類能夠降解影響蔬菜品質(zhì)的木質(zhì)素、纖維素和半纖維素，因此是導(dǎo)致蔬菜的軟腐病的重要致病菌[28]。

2.3.3 主成分和共現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)分析

主成分分析（principal components analysis，PCA）可以在二維坐標(biāo)圖的角度上清晰地比較不同處理間微生物群落組成結(jié)構(gòu)的特征和差異。點(diǎn)與點(diǎn)之間的距離遠(yuǎn)近表示菌落組成差異性的大小。本研究采用主成分分析對(duì)3 種不同處理的香椿在貯藏期間的微生物群落的特征和差異進(jìn)行比較，結(jié)果如圖5所示。

圖4 門和目水平下真菌群落結(jié)構(gòu)分布圖Fig.4 Distributions of fungal communities at phylum and order level

圖5 各組樣品中微生物群落主成分分析圖Fig.5 The principal coordinate analysis of microbial communities in different group

由圖5可知，PC-1 和PC-2 分別解釋了各個(gè)處理組中微生物群落76.40 %和13.16 %的信息，共計(jì)89.56%，因此，這兩個(gè)成分能夠代表樣品中的微生物群落信息。PVC+ZW 處理組的距離較近，說(shuō)明它們的微生物群落相似性高，群落的穩(wěn)定性較高，說(shuō)明在貯存過(guò)程中，菌群變化不大，這種處理方法較好的抑制了微生物的生長(zhǎng)，從而保證了香椿的貯藏品質(zhì)。而其他4 個(gè)處理組的微生物群落的距離隨時(shí)貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)而變得離散，說(shuō)明各個(gè)處理組間及每個(gè)處理組內(nèi)的微生物群落差異性較大。

基于強(qiáng)相關(guān)性的網(wǎng)絡(luò)圖，能夠可視化地研究不同微生物群落之間的共現(xiàn)模式[29]。本研究采用共現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)法對(duì)3 種不同處理的香椿在貯藏期間的微生物群落之間相關(guān)性進(jìn)行分析，結(jié)果如圖6所示。

在本研究中，細(xì)菌組標(biāo)為淺灰色的圓圈（節(jié)點(diǎn)），真菌組標(biāo)為深灰色的圓圈，圓圈之間的連線（邊）代表了它們之間具有較強(qiáng)的相關(guān)性（皮爾遜相關(guān)系數(shù)r ＞0.7或者r ＜-0.7），深灰色邊代表正相關(guān)，淺灰色邊代表負(fù)相關(guān)，節(jié)點(diǎn)的大?。ǘ龋┡c其連接的邊的數(shù)量成正比。PVC 處理的網(wǎng)絡(luò)圖有234 條邊，包括70 條負(fù)相關(guān)的邊，占29.91%（圖6A）；PVC+ZW 處理的網(wǎng)絡(luò)圖有170條邊，包括65 條負(fù)相關(guān)的邊，占38.24 %（圖6B）；PVC+1-MCP 處理的網(wǎng)絡(luò)圖有188 條邊，包括68 條負(fù)相關(guān)的邊，占36.17%（圖6C）；PVC+EA 處理的網(wǎng)絡(luò)圖有203 條邊，包括63 條負(fù)相關(guān)的邊，占31.03%（圖6D）。因此，紫外照射提高了菌群之間的負(fù)相關(guān)性，這也意味著在有紫外線照射的環(huán)境中菌群的拮抗關(guān)系得到加強(qiáng)。

圖6 各組樣品中微生物群落共現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)圖Fig.6 Co-occurrence Network of microbial communities in different group

3 結(jié)論

本研究采用下一代測(cè)序技術(shù)，對(duì)不同保鮮處理的香椿在貯藏期間微生物多樣性進(jìn)行分析。結(jié)果表明，PVC+ZW 處理的香椿在貯藏過(guò)程中，觀察到的OTUs以及多樣性指數(shù)（Simpson、Shannon 和 Chao 指數(shù)）均有所下降。一直保持優(yōu)勢(shì)的細(xì)菌門為藍(lán)菌門（Cyanobacteria），優(yōu)勢(shì)的真菌門為子囊菌門（Ascomycota），但擔(dān)子菌門（Basidiomycota）的相對(duì)豐度也在不斷地增加。主成分分析表明，PVC+ZW 處理組的各個(gè)樣品距離較近，微生物群落相似性較高，群落的穩(wěn)定性較高。共現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)分析發(fā)現(xiàn)，紫外照射提高了不同菌群之間的負(fù)相關(guān)性。本試驗(yàn)從細(xì)菌和真菌的多樣性角度進(jìn)一步解釋了PVC+ZW 處理的香椿在貯藏期間能夠較好地保持品質(zhì)的原因。因此，PVC+ZW 處理可以更好地延緩香椿的腐爛變質(zhì)并且有效地抑制致病細(xì)菌的生長(zhǎng)，從而延長(zhǎng)其貨架期，保證其貯藏品質(zhì)與安全。