葉曉婭，李華麗，薛曉會

(平頂山市食品藥品檢驗所，河南 平頂山467000)

補腎強身[1]片收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十五冊，由淫羊藿、菟絲子、金櫻子、女貞子和狗脊(燙)5味中藥組成。2017年我單位中藥室承擔(dān)河南省此品種的藥品價格倒掛專項檢驗，涉及18個地市、36批樣品，基本上涵蓋了在河南市場上流通的廠家。在檢驗過程中發(fā)現(xiàn)的問題主要是有些廠家產(chǎn)品的性狀、鑒別與標(biāo)準(zhǔn)有一定差異，如產(chǎn)品性狀不僅含有標(biāo)準(zhǔn)上規(guī)定的灰至棕灰色，還有棕褐色、棕色等；針對金櫻子、女貞子的理化反應(yīng)鑒別和淫羊藿苷的薄層色譜鑒別，結(jié)果所顯示的顏色也有差異，這給結(jié)果判定帶來了一定的困擾。另外由于標(biāo)準(zhǔn)只能定性，不能定量，對制劑檢查有一定的制約，不能全面反映制劑的質(zhì)量?，F(xiàn)有的文獻報道多是關(guān)于淫羊藿苷[2]、金絲桃苷[3]、原兒茶酸[4]的單一成分的含量測定，但中藥復(fù)方制劑采用單一成分含量控制略顯不足，還有研究采用UPLC法同時測定6種成分[4]，UPLC是近年來發(fā)展起來的新型液相色譜儀，有出峰時間短、分離效果好的特點，但較一般的液相色譜儀價格更為昂貴，色譜柱填料粒徑要求比較微小，易堵、造價高，還有壓力高對儀器的有些部件易產(chǎn)生損壞，而常規(guī)液相色譜儀使用更加普遍、經(jīng)濟。因此，本研究采用HPLC法同時測定補腎強身片中5種藥材所含有的5個化學(xué)成分的含量，經(jīng)方法學(xué)考察均符合規(guī)定，為本研究制劑質(zhì)量分析建立了可行的控制方法，為進一步完善補腎強身片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

戴安U3000高效液相色譜儀；戴安VWD-3100紫外檢測器；Acclaim C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，柱溫為35℃；XS-105電子分析天平(METTLER TOLEDO，瑞士)。

1.2 對照品與藥品

待檢補腎強身片共涉及12個廠家，從每個廠家取樣一批，其中一個廠家有薄膜衣和糖衣片兩種制劑規(guī)格，共計13個樣品。因有的廠家樣品含量不佳，故對廠家名稱不予公布，僅以代號表示。對照品原兒茶酸(批號110809-201205)、綠原酸(批號110753-201817)、金絲桃苷(批號11121-201708)、特女貞苷(批號110126-201605)及淫羊藿苷(批號110737-200415)均購自中國食品藥品檢定研究院，含量分別為99.9%、96.8%、95.1%、93.3%和100%。

1.3 試劑

乙腈(Merck)為色譜純；水為哇哈哈純凈水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性實驗

采用Acclaim C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈(A)-0.1%磷酸(B)為流動相。線性梯度洗脫：95%B(0 min)，85%B(8 min)，85%B(18 min)，72%B(30 min)，65%B(38 min)，55%B(45 min)，95%B(45.1 min)，95%B(58 min)；檢測波長(0～11 min)260 nm、(11～16 min)330 nm、(16～28 min)360 nm、(28～34 min)224 nm、(34～58 min)270 nm；流速為1.0 mL·min-1，柱溫為35 ℃，進樣量為10 μL，HPLC色譜見圖1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取原兒茶酸、綠原酸、金絲桃苷、特女貞苷和淫羊藿苷，對照品質(zhì)量分別為15.82、11.22、10.84、11.74、10.87 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為混合對照品儲備液(分別含原兒茶酸0.1564 mg·mL-1、綠原酸0.108 6 mg·mL-1、金絲桃苷0.103 1 mg·mL-1、特女貞苷0.109 5 mg·mL-1、淫羊藿苷0.102 4 mg·mL-1)；取混合對照品儲備液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，作為混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取供試品內(nèi)容物1.0 g，精密稱定重量，置50 mL棕色量瓶中，加入70%乙醇水約40 mL，超聲處理30 min，放冷，用70%乙醇水定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，經(jīng)0.45 μm的微孔濾膜濾過，即得。

注：1. 原兒茶酸；2. 綠原酸；3. 金絲桃苷；4.特女貞苷；5.淫羊藿苷

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密吸取混合對照品溶液0.5、1、5、10 μL及混合對照品儲備液5、8、10 μL，分別注入液相色譜儀，測定峰面積，并以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，進樣量(X)為橫坐標(biāo)進行回歸計算，結(jié)果表明各化學(xué)成分在相應(yīng)濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，見表1。

表1 五種化學(xué)成分線性關(guān)系和線性范圍

2.4 精密度實驗

取補腎強身片(批號：15121821)，按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，連續(xù)進樣6次，測定，以相應(yīng)色譜峰的峰面積計算RSD，結(jié)果原兒茶酸、綠原酸、金絲桃苷、特女貞苷和淫羊藿苷的RSD(n=6)分別為0.72%、0.42%、0.51%、0.21%、0.29%，表明所用方法的精密度良好。

2.5 重復(fù)性實驗

取補腎強身片(批號：15121821)，按照2.2.2”項下方法制備供試品溶液，各6份，進樣測定，結(jié)果原兒茶酸、綠原酸、金絲桃苷、特女貞苷和淫羊藿苷平均含量(n=6)分別為0.332 mg·g-1、0.561 mg·g-1、0.733 mg·g-1、1.29 mg·g-1、1.20 mg·g-1，RSD分別為0.32%、0.94%、0.51%、0.28%、 0.37%，表明所用方法的重復(fù)性良好。

2.6 加樣回收率實驗

取同一批號(15121821)樣品適量，研細(xì)，取1.0g，共6份，精密稱定。分別精密加入混合對照品溶液3 mL，按照“2.2.1”項下方法制備所需溶液，在上述色譜條件下測定，計算回收率。結(jié)果原兒茶酸、綠原酸、金絲桃苷、特女貞苷和淫羊藿苷的平均回收率(n=6)分別為103.1%、96.7%、97.0%、101.9%、98.2%，RSD分別為1.3%、2.5%、0.8%、1.0%、1.6%。

2.7 樣品的測定

取13個樣品，按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定，記錄峰面積，按外標(biāo)法計算。結(jié)果見表2。

表2 12個廠家13批樣品中原兒茶酸、綠原酸、金絲桃苷、特女貞苷和淫羊藿苷的含量 (mg·g-1)

注：當(dāng)S/N≤3時，結(jié)果為“未檢出”。

3 結(jié)論

本研究用HPLC法同時測定補腎強身片中原兒茶酸、綠原酸、金絲桃苷、特女貞苷和淫羊藿苷的含量，可基本全面反映制劑質(zhì)量，方法簡單，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于本研究制劑的質(zhì)量控制。

4 討論

本次試驗樣本有限，結(jié)果差異較大，這與藥材的產(chǎn)地、品種、等級或制劑工藝和輔料的不同等各方面因素有關(guān)，亦可能因為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中缺少量的控制，企業(yè)未按規(guī)定的處方量投料，僅僅按照部頒標(biāo)準(zhǔn)的檢驗項目有區(qū)別投料，或?qū)ν读系乃幉奈催M行有效控制，例如在2015年我所檢驗的紅花注射液專項，這個標(biāo)準(zhǔn)未更新前沒有“羥基紅花黃色素A”的含量測定，我們按照新標(biāo)準(zhǔn)測定了在標(biāo)準(zhǔn)更新前生產(chǎn)的這個成分的含量，有少部分是不達標(biāo)的，但是執(zhí)行新標(biāo)準(zhǔn)后，這個成分的含量測定全部測定達標(biāo)(僅針對我所樣品)，因此中藥制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高對藥品質(zhì)量的監(jiān)控是一項非常重要的任務(wù)，另外結(jié)合中藥材原料的監(jiān)管和中藥生產(chǎn)廠家的飛行檢查，可從根本上保障中藥制劑的質(zhì)量。