康俊輝

鉛是具有神經(jīng)毒素的重金屬元素，鉛中毒的危害主要表現(xiàn)在對神經(jīng)系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、骨骼系統(tǒng)等的終身性傷害上[1]，血鉛是當(dāng)前最可行的能靈敏反映鉛對人體危害的生物指標(biāo)，血鉛測定已成為眾多醫(yī)療機(jī)構(gòu)開展的常規(guī)項(xiàng)目[2]。由于血液機(jī)體成分較復(fù)雜，影響血鉛的檢測因素較多，其檢測過程中的質(zhì)量控制，對于保證測定結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性和可比性具有極其重要的作用[3-4]。有資料顯示[5]有些實(shí)驗(yàn)室該項(xiàng)目的精密度和準(zhǔn)確度不能滿足質(zhì)量要求，檢測結(jié)果也無可比性，不能為臨床提供有價(jià)值的數(shù)據(jù)，怎樣才能做出具有參考價(jià)值的實(shí)驗(yàn)結(jié)果呢？本實(shí)驗(yàn)室用鎢舟原子吸收光譜法進(jìn)行血鉛測定，經(jīng)過幾年實(shí)踐，掌握了一定的室內(nèi)質(zhì)量控制的方法和防止檢測結(jié)果偏倚的經(jīng)驗(yàn)，從而保證了血鉛測定結(jié)果的可靠性和穩(wěn)定性，現(xiàn)總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑及耗材 博輝公司提供的配套試劑及定值質(zhì)控品，采血所需的肝素管及0.5 MLEDTA-K2抗凝管，無鉛玻璃微量吸管。

1.1.2 儀器 BH-2101S鎢舟原子吸收光譜儀，鉛空心陰極燈。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 成人抽取靜脈血置于肝素管內(nèi)，兒童可取末梢血（采血前囑咐患者洗手，嚴(yán)禁污染，如血鉛＞100 μg/L，則重新抽取靜脈血復(fù)查），將標(biāo)本混勻，吸取40 UL加入專用試劑中，混勻待檢。

1.2.2 質(zhì)控品制備 定值質(zhì)控品由廠家提供，混勻后取40 UL加入專用試劑中，混勻后隨標(biāo)本待檢。其中中值鉛含量為100 μg/L，高值鉛含量為300 μg/L。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)方法 根據(jù)儀器操作規(guī)程及實(shí)驗(yàn)室操作要求進(jìn)行日常工作：開機(jī)預(yù)熱，能量調(diào)整，制定標(biāo)準(zhǔn)曲線（定標(biāo)），室內(nèi)質(zhì)量控制，標(biāo)本測定，儀器維護(hù)保養(yǎng)等。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線 按操作規(guī)程定標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，相關(guān)系數(shù)（r）≥0.99為可接受[6]。

1.2.5 精密度的驗(yàn)證 測定高（220 μg/L）、中（110 μg/L）、低（50 μg/L）值三個(gè)濃度水平，每天一次，連續(xù)20天，計(jì)算CV值。

1.2.6 室內(nèi)質(zhì)控 以博暉公司提供的血鉛質(zhì)控品為樣品，連續(xù)測定20天，計(jì)算出平均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)，設(shè)定上、下警告線和控制線，繪制質(zhì)控圖，用Westgard多規(guī)則進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。每天在測試標(biāo)本前先進(jìn)行中、高兩個(gè)質(zhì)控水品測試，結(jié)果應(yīng)在控制線以內(nèi)方可測試標(biāo)本，且每間隔10個(gè)標(biāo)本加測一次質(zhì)控品，監(jiān)視漂移情況，同時(shí)，放在最后結(jié)束樣品前，可檢出偏移[7-8]。

平行樣本的分析及重復(fù)測定：個(gè)別標(biāo)本測定須作平行雙樣的分析（對于血鉛含量大于400 μg/L的樣品也要進(jìn)行平行雙樣的分析）且兩次結(jié)果小于分析方法規(guī)定的批間精密度或平行樣測定允許的最大誤差（血鉛濃度≥100 μg/L時(shí)，允許最大誤差10%，血鉛濃度20～100μg/L時(shí)，允許最大誤差15%）[7]。

1.2.7 室間質(zhì)控 參加衛(wèi)生部的室間質(zhì)評，一年3次，一次5個(gè)水平。三年來，共45個(gè)質(zhì)控樣品，其中43個(gè)符合規(guī)定，2個(gè)發(fā)生偏倚，準(zhǔn)確率為97.9%。同時(shí)，將衛(wèi)生部公布樣品均值與本實(shí)驗(yàn)室所測定值進(jìn)行相關(guān)性分析，兩者呈顯著的線性正相關(guān)，r=0.994（P＜ 0.01）。

2 結(jié)果

該實(shí)驗(yàn)方法精密度、平行樣本的分析及重復(fù)測定樣本的批間精密度實(shí)驗(yàn)血鉛濃度≥100μg/L時(shí)，誤差小于10%，血鉛濃度20～100 μg/L時(shí)，誤差小于15%，室間質(zhì)量控制準(zhǔn)確率97.9%，見表1。均在《血鉛臨床檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)范》[6]要求范圍內(nèi)。

表1 方法的精密度結(jié)果

3 討論

工業(yè)及現(xiàn)代化的飛速發(fā)展造成了環(huán)境污染，空氣中的鉛污染及作業(yè)場所鉛污染已受到人們的普遍關(guān)注，而血鉛含量的測定是判斷是否受到鉛中毒最有力的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)[9]，必須保證鉛測定的準(zhǔn)確性。任何檢測項(xiàng)目的質(zhì)量控制都包括分析前、分析中、分析后三部分，鉛的質(zhì)量控制也不例外，具體表現(xiàn)在以下方面。

鉛標(biāo)本的采集環(huán)節(jié)非常重要，首先采血場所必須遠(yuǎn)離鉛污染源，使用的所有試劑均應(yīng)采用最高的純度級別，所有器皿、用品必須是一次性使用，并需抽樣進(jìn)行空白檢驗(yàn)，必要時(shí)對所有器皿、用品應(yīng)先行無鉛化處理，分析者必須避免自身因素（化妝品、外敷藥物、乳膠手套等）對樣品的污染[10-12]。如今，標(biāo)本來源大部分為兒童，末梢血容易污染，一方面采集時(shí)要等到血液流到皮膚表面 ，再放入容器，比靜脈穿刺污染的機(jī)會大大增加。另一方面，由于毛細(xì)血管采血量少，極微量的污染可對血鉛水平產(chǎn)生顯著的影響，所以兒童手指采血前必須先用肥皂將手洗凈，再用EDTA溶液擦洗，最后用酒精棉球反復(fù)擦拭表面皮膚，如懷疑鉛高，必須采集靜脈血。

檢測過程中，必須做好標(biāo)準(zhǔn)曲線，質(zhì)控必須合格，如果失控必須查找原因直到質(zhì)控合格后方能進(jìn)行標(biāo)本檢測，同時(shí)做好記錄分析，批量測試時(shí)必須加測質(zhì)控，血鉛值≥400 μg/L時(shí)，要重新測定，兩次結(jié)果允許誤差要符合要求。兒童手指血檢測血鉛超過100 μg/L時(shí)，須抽靜脈血復(fù)檢，成人靜脈血超過300 μg/L時(shí)，本實(shí)驗(yàn)室建議重抽血復(fù)檢。BH-2101S鎢舟原子吸收光譜法測定血鉛時(shí)，鎢舟的使用次數(shù)會影響測定結(jié)果，一般使用300次左右，就須更換，或者質(zhì)控發(fā)生漂移時(shí)，重新定標(biāo)也無法糾正，也要更換，其他檢測血鉛方法[13-14]也有各自相關(guān)要求.

參加室間質(zhì)控是檢驗(yàn)結(jié)果的保證，本實(shí)驗(yàn)室三年來的正確率為準(zhǔn)確率為97.9%，有兩次檢測結(jié)果發(fā)生偏倚，可能原因：（1）質(zhì)控品未混勻或加樣不準(zhǔn)確；（2）未全程執(zhí)行質(zhì)控監(jiān)督，數(shù)據(jù)發(fā)生漂移未發(fā)現(xiàn)；（3）未對質(zhì)控品進(jìn)行平行測定取均值或兩次測試數(shù)據(jù)偏差大未處理；（4）室內(nèi)質(zhì)控品用完后未及時(shí)到位，未做室內(nèi)質(zhì)控。所以，室內(nèi)質(zhì)控是正確率的保證，一定要嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行質(zhì)控及失控處理，不能偷工減料，盲目自信。

綜上，血鉛測定屬于微量分析，樣品測定影響因素較多，任何細(xì)微的內(nèi)在、外在因素變化都可能影響其結(jié)果的可靠性，不是有儀器、會操作就能得到滿意結(jié)果[15]，從標(biāo)本采集、保存、到檢測全過程，每一個(gè)環(huán)節(jié)都必須嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程和采取質(zhì)控措施，才能保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。