1.大理大學(xué)，云南 大理 671000；2.昆藥集團(tuán)股份有限公司，云南 昆明 650100

杧果(MangiferaindicaL.)為漆樹科杧果屬熱帶常綠大喬木，種植區(qū)域主要分布在海南、廣西、廣東、云南、四川和福建等地[1]。杧果葉含有酚酸類、黃酮類、萜類、甾體皂苷類、揮發(fā)油類等。黃酮類如芒果苷、槲皮素、金絲桃苷等。杧果葉在傣醫(yī)臨床應(yīng)用已有悠久歷史，主要用于痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎等。杧果葉中主要活性成分為芒果苷[2]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明芒果苷對高尿酸血癥導(dǎo)致的痛風(fēng)有明顯療效[3-5]。

本實驗在前期實驗研究確定的杧果葉素(杧果葉提取物)制劑處方基礎(chǔ)上，擬將其研制成治療痛風(fēng)臨床新藥。以芒果苷溶出度、顆粒得率、含水量等為指標(biāo)，進(jìn)行制劑工藝關(guān)鍵參數(shù)研究，為杧果葉素制劑成型提供簡單、可行、穩(wěn)定的制備方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 JA51001電子天平(上海精密儀器廠)，XSE205DU電子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)，MQP01實驗室型超微氣流粉碎機(jī)(青島德瑞特粉體技術(shù)設(shè)備有限公司)，HLSHZ-6A高效濕法混合制粒機(jī)(北京航空制造工程研究院)，702-4電熱鼓風(fēng)箱(大連實驗設(shè)備廠)，WBF-2多功能流化床(重慶英格造粒包衣技術(shù)公司)，MA35水分測定儀(德國賽多利斯公司)，BT-1001智能粉體特性測定儀(丹東百特儀器有限公司)；PT WS1210智能溶出儀(德國PHARMATEST公司)，UV-2450紫外可見光分光光度計(日本島津公司)。

1.2 材料 芒果苷對照品(批號：111607-200402，中國食品藥品檢定院)，杧果葉素(批號：170301，昆藥集團(tuán)自制)，糊精(批號：160706，安徽山河藥用輔料股份有限公司)，羧甲基淀粉鈉(批號：161110，安徽山河藥用輔料有限公司)，硬脂酸鎂(批號：160317，安徽山河藥用輔料股份有限公司)，其它所用試劑均為分析純。

1.3 處方 杧果葉素110 g，羧甲基淀粉鈉19 g，糊精 60 g，硬脂酸鎂1 g ，50%乙醇適量，制成硬膠囊1000粒。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶出度方法的建立 依據(jù)《普通口服固體制劑溶出度試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》，選擇籃法，溶出介質(zhì)為900 mL pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液，轉(zhuǎn)速為100 r/min。

2.2 含量檢測方法的建立 參照紫外-可見分光光度法(2015年版《中國藥典》四部通則0401)與參考文獻(xiàn)[6]，建立紫外-可見分光光度法測定杧果葉素膠囊中芒果苷的方法。

2.2.1 對照品溶液的制備 取芒果苷對照品適量，精密稱定，加pH 6.8的磷酸鹽緩沖液制成每1 mL中含0.1 mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 稱取提取物適量，精密稱定，加pH 6.8的磷酸鹽緩沖液，超聲30 min，制成每1 mL中含0.1 mg的溶液，搖勻，即得。

2.2.3 檢測波長的確定 取對照品及供試品溶液，在200～900 nm進(jìn)行全波長掃描，確定紫外最大吸收波長為258 nm。

2.2.4 樣品酸濃度的考察 因為活性成分芒果苷顯弱酸性，在酸性條件下不易電離。所以加入少量酸抑制其電離。取配制好的對照品溶液0.5 mL，共18份，置5 mL量瓶中，加pH 6.8磷酸鹽緩沖液至刻度，分別加入0、10、20、40、60、80 μL 10%鹽酸，搖勻，即得。在258 nm處測定吸光度(A)。由表1可知，隨著酸用量增加其吸光度增加，當(dāng)加入60 μL時樣品吸光度基本保持不變，因此，溶出時考慮樣品中加入60 μL 10%鹽酸。

表1 酸濃度的考察結(jié)果

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性考察 取對照品溶液0.1、0.2、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，分別置于5 mL容量瓶，加pH 6.8緩沖液稀釋至刻度，加入60 μL 10%鹽酸，搖勻。以pH 6.8緩沖液(加入等量10%鹽酸)作為空白，在258 nm處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程：Y=56.02X+0.199(R2=0.9997)。表明樣品在0.002～0.024 mg/ mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2 精密度試驗 取對照品溶液0.5 mL，置于5 mL容量瓶，加pH 6.8緩沖液稀釋至刻度，加60 μL 10%鹽酸搖勻。在258 nm下測定吸光度，連續(xù)測定6次。6次測定的RSD為0.18%，表明儀器精密度良好。

2.3.3 重復(fù)性試驗 取供試品溶液1 mL，置于5 mL容量瓶，加pH 6.8緩沖液稀釋至刻度，加60 μL 10%鹽酸，搖勻。平行制備6份，測定吸光度，計算含量，測得含量RSD為1.09%，表明方法重復(fù)性良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液0.5 mL，置于5 mL容量瓶，加pH 6.8緩沖液稀釋至刻度，加60 μL 10%鹽酸，搖勻。分別在于0、30、60、120、180、240 min測定吸光度。6次測定吸光度的RSD為0.54%，說明供試品溶液在pH 6.8緩沖液240 min內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5 加樣回收率試驗 取杧果葉素樣品6份，置100 mL量瓶中，分別加入芒果苷對照品溶液20 mL，加pH 6.8緩沖液按樣品制備方法超聲溶解后定容至刻度，備用。取上述溶液各0.5 mL，置于5 mL容量瓶中，加pH 6.8緩沖液稀釋至刻度，加60 μL 10%鹽酸，搖勻，即得。分別測定吸光度，計算回收率。平均回收率為99.07%，RSD為0.96%，說明該方法回收率良好。

2.4 制備工藝選擇 硬膠囊目前常用的制備方式有粉末直接混合填充和濕法制粒填充等。杧果葉提取物水溶性差，流動性差，粉末直接混合填充裝量差異大，含量均勻度差。因此選擇濕法制粒填充。

2.5 粉碎工藝考察 根據(jù)現(xiàn)有設(shè)備和后續(xù)工業(yè)化生產(chǎn)可行性，采用氣流式粉碎機(jī)對杧果葉素進(jìn)行粉碎。根據(jù)氣流式粉碎機(jī)的影響因素，對振動進(jìn)料壓力、進(jìn)料壓力與粉碎壓力的參數(shù)進(jìn)行考察，研究不同條件對杧果葉提取物得率和粒徑大小的影響，由表2可知，杧果葉素粉碎前D90約為103 μm，經(jīng)氣流式粉碎后其粒徑D90約為5 μm，說明杧果葉素容易粉碎。當(dāng)工藝參數(shù)振動進(jìn)料壓力為0.2 MPa，進(jìn)料壓力為0.5 MPa，粉碎壓力為0.4 MPa時粉碎粒徑滿足要求且得率最高。

表2 杧果葉提取物粉碎工藝的研究

2.3 制粒工藝參數(shù)研究 根據(jù)制備工藝選擇高速剪切濕法制粒的方式進(jìn)行制粒，因此主要對高剪切制粒影響因素進(jìn)行考察。按處方比例稱取杧果葉提取物、糊精和羧甲基淀粉鈉，總重189 g，共3份，置于濕法制粒機(jī)，混合均勻(混合3 min)，以50%乙醇為粘合劑(加量為100 g)，考察不同攪拌速度、切碎速度、制粒時間對制粒的影響，置烘箱干燥(60 ℃)，控制顆粒水分小于9%，整粒(20目篩網(wǎng))。取部分顆粒加入適量硬酯酸鎂，混勻，裝入2號膠囊中，測定藥物的溶出。從表3和圖1可知，加入同樣量的粘合劑，不同的攪拌速度、切碎速度以及制粒時間對顆粒得率沒有顯著性影響。但是對顆粒松散程度有影響，顆粒松散程度影響了藥物的溶出。為了確保藥物的溶出效果，確定制粒工藝為攪拌速度700 r/min、切碎速度1000 r/min、制粒時間5 min。

表3 制粒工藝參數(shù)考察

2.4 干燥工藝考察 藥物的含水量對產(chǎn)品的穩(wěn)定性會產(chǎn)生一定影響，所以對顆粒干燥方式進(jìn)行考察。按處方比例稱取杧果葉提取物、糊精和羧甲基淀粉鈉，總重378 g，置濕法制粒機(jī)中，混合均勻(混合3 min)，加入200 g 50%乙醇為粘合劑，設(shè)定上述制粒工藝參數(shù)，濕顆粒分成兩份，分別采用不同干燥方式，控制顆粒水分小于9%，整粒(20目篩網(wǎng))。取部分顆粒加入適量硬酯酸鎂，混勻，裝入2號膠囊中，測定藥物的溶出。由表4可知不同干燥方式均可以使顆粒含水量控制在5%左右，且不同干燥方式對藥物的溶出不會產(chǎn)生較大的影響。

綜上所述，制備工藝如下：按處方比例稱取杧果葉提取物、糊精和羧甲基淀粉鈉，置濕法制粒機(jī)中，混合均勻(混合3 min)，加入50%乙醇，設(shè)定制粒工藝參數(shù)(攪拌速度為700 r/min、切碎速度1000為r/min、制粒時間5 min)，干燥，控制顆粒水分在5%左右，整粒(20目篩網(wǎng))，取顆粒加入適量硬酯酸鎂，混勻，裝入膠囊，即得。

2.5 制備工藝驗證 按上述確定的工藝參數(shù)按表5進(jìn)行3批小試，從表5可知不同小試批量工藝較穩(wěn)定。

表4 干燥工藝的考察

表5 不同批量小試工藝考察

3 討論

目前，杧果葉有效部位及其制劑并未在國內(nèi)上市，實驗對杧果葉提取物膠囊劑的制備工藝進(jìn)行研究，通過對物制備工藝、粉碎工藝、制粒工藝及干燥工藝的考察，選定最佳制備工藝并使其滿足《中國藥典》膠囊劑要求，為以后杧果葉提取物膠囊劑的進(jìn)一步研究及工業(yè)化生產(chǎn)提供了有力的實驗依據(jù)。