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        飼糧中添加乳酸菌對(duì)鵝肥肝的形成及補(bǔ)體基因表達(dá)的影響

        2019-07-08 03:52:45溫康劉龍
        農(nóng)家科技中旬版 2019年4期
        關(guān)鍵詞:乳酸菌

        溫康 劉龍

        摘 要:本試驗(yàn)主要是研究在飼糧中添加乳酸菌對(duì)朗德鵝產(chǎn)肝性能的影響。通過(guò)在飼糧中添加乳酸菌,對(duì)朗德鵝的體重、免疫器官、產(chǎn)肝性能以及腹脂等方面的測(cè)定,來(lái)闡明乳酸添加對(duì)于朗德鵝產(chǎn)肝性能的影響。乳酸菌作為有益菌種在食品、保健品等產(chǎn)品中的得到運(yùn)用,但其作為飼料添加劑在填飼鵝肝臟形成的作用還沒(méi)有過(guò)報(bào)道。因此,本試驗(yàn)在飼糧中添加乳酸菌,旨在活體水平研究乳酸菌對(duì)鵝肥肝形成和補(bǔ)體基因表達(dá)的影響,進(jìn)一步探索鵝肥肝形成機(jī)理。

        關(guān)鍵詞:鵝肥肝;乳酸菌;C3;C5

        鵝肥肝(鵝脂肪肝)是公認(rèn)的世界三大珍饈之一,一直備受人們的青睞。在肥肝生產(chǎn)過(guò)程中,鵝肝可增大8倍以上而不發(fā)生明顯的病理癥狀,表明鵝肝在脂肪變性過(guò)程中存在著某種保護(hù)機(jī)制。因此,鵝肥肝形成的生物學(xué)機(jī)制一直是人們的研究重點(diǎn)。肝臟是機(jī)體最大的器官,具有來(lái)自肝動(dòng)脈及門靜脈的雙重血液供應(yīng)。其中,肝門靜脈系統(tǒng)主要接收腸道血液并匯至肝臟,使得腸道與肝臟存在密切聯(lián)系,形成腸-肝軸。人和動(dòng)物腸道內(nèi)定植著大量的微生物,這些微生物統(tǒng)稱為腸道菌群。腸道菌群在與其宿主長(zhǎng)期的共生共代謝過(guò)程中不斷進(jìn)化,可消化各種植物多糖及其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),是一個(gè)巨大而復(fù)雜的生態(tài)系統(tǒng)。腸道來(lái)源的血液經(jīng)門靜脈回流進(jìn)入肝臟,伴隨進(jìn)入肝臟的還有來(lái)自腸道的食物抗原、細(xì)菌產(chǎn)物及環(huán)境毒素等,這些物質(zhì)的進(jìn)入可被肝臟徹底或部分清除;肝臟具有調(diào)節(jié)代謝、內(nèi)分泌和免疫應(yīng)答等功能,可分泌膽汁入腸道,并通過(guò)肝腸循環(huán)作用于腸道及腸道菌群。正常情況下,僅少量毒素穿過(guò)腸黏膜屏障經(jīng)門靜脈進(jìn)入肝臟,使肝臟網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)持續(xù)處于激活狀態(tài)。若腸黏膜屏障被破壞,大量細(xì)菌及毒素經(jīng)門靜脈移位至肝臟,破壞肝臟的保護(hù)機(jī)制使肝臟成為最先受累的器官。而肝臟分泌的炎癥因子通過(guò)膽汁的分泌進(jìn)入腸道,加重腸道損傷。 近年來(lái),由于對(duì)腸-肝軸認(rèn)識(shí)的逐步深入,腸道菌群在脂肪肝形成過(guò)程中的作用備受關(guān)注,越來(lái)越多的研究證實(shí),腸道菌群的改變與代謝紊亂、營(yíng)養(yǎng)因素和遺傳因素等相互作用,共同在脂肪肝發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。

        根據(jù)聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織與世界衛(wèi)生組織定義,益生菌為“能達(dá)到足夠的數(shù)量并且對(duì)宿主產(chǎn)生一定的益生效應(yīng)的活的微生物”。尤其乳桿菌屬、乳酸球菌屬分別為腸道微生物中主要優(yōu)勢(shì)益生地位的組分。它們均與乳酸發(fā)酵密切相關(guān),對(duì)人畜機(jī)體保健有重要作用。此外,作為在自然發(fā)酵乳制品中的益生菌,這些菌屬在發(fā)酵乳制品工業(yè)中作為主要商業(yè)啟動(dòng)菌,有很高的應(yīng)用價(jià)值;由于其有益無(wú)害的生理特性,是一種基本的營(yíng)養(yǎng)源和胃腸調(diào)節(jié)劑,可以在臨床使用來(lái)治療由飲食、年齡等原因引起的菌群失調(diào),也是現(xiàn)在飼料工業(yè)中應(yīng)用的主要微生態(tài)制劑。有然而,有關(guān)乳酸菌與鵝肥肝的關(guān)系在國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中尚未見(jiàn)報(bào)道。本課題組在長(zhǎng)期的鵝肥肝形成機(jī)制研究中發(fā)現(xiàn),填飼鵝與對(duì)照組相比,其腸道生理指標(biāo)發(fā)生了明顯的變化,表明鵝腸道及其菌群可能參與鵝肥肝的形成。因此,本研究對(duì)鵝肥肝形成過(guò)程中在飼糧中添加乳酸菌,乳酸菌與鵝肥肝形成的關(guān)系,為深入研究鵝肥肝形成機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

        一、研究?jī)?nèi)容

        1.材料與方法

        (1)試驗(yàn)動(dòng)物及設(shè)計(jì)處理

        本實(shí)驗(yàn)選取70日齡體重相近的60只朗德鵝公鵝,隨機(jī)分成對(duì)照組、填飼組、加菌對(duì)照組和加菌填飼組,每組各15只。填飼組于71日齡開(kāi)始,在填飼第25天進(jìn)行。

        (2)乳酸菌劑的制備

        本實(shí)驗(yàn)乳酸菌存放于0-4℃冰箱中,每次填飼的時(shí)候按飼料比例添加1‰的乳酸菌?,F(xiàn)場(chǎng)配置。

        (3)基礎(chǔ)日糧

        對(duì)照組的飼料處理:稱適量玉米,入鍋煮沸3-5分鐘,取出瀝干,趁熱加入1%鵝油、0.8%-1%食鹽,充分?jǐn)嚢韬竺看挝?00g。對(duì)照組加菌的飼料處理:稱適量玉米,入鍋煮沸3-5分鐘,取出瀝干,趁熱加入1%鵝油、0.8%-1%食鹽,充分?jǐn)嚢韬竺看挝?00g加0.1g乳酸菌。填飼用的飼料處理:稱適量玉米,入鍋煮沸3-5分鐘,取出瀝干,趁熱加入1%鵝油、0.8%-1%食鹽,充分?jǐn)嚢韬蠹纯商铒?。填飼加菌用的飼料處理:稱適量玉米,入鍋煮沸3-5分鐘,取出瀝干,趁熱加入1%鵝油、0.8%-1%食鹽,充分?jǐn)嚢韬筇铒暭用看翁铒暳系?‰的比例添加乳酸菌。

        (4)飼養(yǎng)管理

        實(shí)驗(yàn)鵝填飼期間單籠飼養(yǎng),自由飲水,填飼方法及飼養(yǎng)管理按常規(guī)方法進(jìn)行。

        (5)樣品采集

        樣品采集分為四組,對(duì)照組、對(duì)照加菌、填飼和填飼加菌。每組15只鵝,稱完體重,采集腹脂、肝臟和脾臟稱重后放入凍存管中,將凍存管立即放入液氮中待測(cè)。

        (6)數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

        實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 結(jié)果采用 2-ΔΔCt進(jìn)行分析。圖中數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間比較采用SPSS 的 t 檢驗(yàn)進(jìn)行。

        2.結(jié)果與分析

        (1)乳酸菌對(duì)填飼朗德鵝生長(zhǎng)性能的影響

        由圖1可知,與對(duì)照組相比,填飼組體重增加,差異極顯著(p<0.01);與對(duì)照組相比,對(duì)照加菌體重增加,差異顯著(p<0.05);與填飼組相比,填飼加菌組體重減小,差異不顯著(p>0.05);

        (2)乳酸菌對(duì)填飼朗德鵝免疫器官的影響

        由圖2可知,與對(duì)照組相比,填飼組脾臟重量增加,差異不顯著(p>0.05);與對(duì)照組相比,對(duì)照加菌組脾臟增加且差異顯著(p<0.05);與填飼組相比,填飼加菌脾臟重量減少差異不顯著(p>0.05).

        (3)乳酸菌對(duì)填飼朗德鵝肝臟的影響

        由圖3可知,相比于對(duì)照組,填飼組肝重增加且差異極顯著(p<0.01);相比于對(duì)照組,對(duì)照加菌組肝重增加差異不顯著(p>0.05);相比于填飼組,填飼加菌組肝重降低且差異顯著(p<0.05)。

        (4)乳酸菌對(duì)填飼朗德鵝脂肪代謝的影響

        由圖4可知,相比于對(duì)照組,填飼組腹脂重增加且差異極顯著(p<0.01);相比于對(duì)照組,對(duì)照加菌組腹脂重增加差異極顯著(p<0.01);相比于填飼組,填飼加菌組腹脂重降低且差異極顯著(p<0.01)。

        (5)補(bǔ)體C3、C5在朗德鵝肝臟中的表達(dá)

        定量結(jié)果顯示,加菌對(duì)照組中C3和C5的表達(dá)水平相對(duì)于對(duì)照組有上調(diào)趨勢(shì),但差異不顯著;與對(duì)照組相比,填飼組和加菌填飼組C3的表達(dá)水平顯著降低(P<0.05),C5的表達(dá)水平呈下調(diào)趨勢(shì),但沒(méi)有達(dá)到顯著水平,而加菌填飼組C3和C5的表達(dá)水平均顯著高于填飼組。

        二、討論

        由研究結(jié)果可知,加菌對(duì)照組體重、肝重等指標(biāo)均高于對(duì)照組,表明在正常飼養(yǎng)條件下,飼糧中添加乳酸菌可以促進(jìn)鵝的生長(zhǎng)。而填飼組添加乳酸菌后,肝臟重量相對(duì)減小,這與前人研究結(jié)果一致,因?yàn)槿樗峋梢栽谝欢ǔ潭壬暇徑庵靖蔚男纬伞6怪康脑黾觿t說(shuō)明乳酸菌的添加可能改變了體內(nèi)脂肪的沉積路徑,從而延緩了肝臟中脂肪的沉積。

        本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),填飼組肝臟中C3和C5的表達(dá)顯著低于對(duì)照組。從本試驗(yàn)的研究結(jié)果來(lái)看,各組肝臟中C3和C5的表達(dá)量似乎與各組別肝臟重量情況相對(duì)應(yīng),即肝重較大的組C3和C5水平也相對(duì)較高。有研究證實(shí),補(bǔ)體系統(tǒng)在人和嚙齒動(dòng)物的肝臟脂肪變性和炎癥反應(yīng)的發(fā)生中起促進(jìn)作用。本課題組在前期的研究結(jié)果中發(fā)現(xiàn),補(bǔ)體系統(tǒng)在鵝脂肪肝形成過(guò)程中存在與人和嚙齒動(dòng)物相反的表達(dá)模式,提示其與鵝肝對(duì)脂肪變性的耐受機(jī)制相關(guān)。填飼組加菌后C3、C5表達(dá)量上升的原因及其作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

        三、結(jié)語(yǔ)

        乳酸菌可以在一定程度上緩解脂肪肝的形成。

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        基金項(xiàng)目:江蘇省指導(dǎo)科創(chuàng)項(xiàng)目(X20170706);國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31672405)

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