金 瑞，程開生2，李志云2，李春妮2，陳登俊2，臧洪梅

(1. 安徽醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，安徽合肥230032； 2. 合肥合源藥業(yè)有限公司, 安徽合肥230031)

纈沙坦氨氯地平片為纈沙坦和苯磺酸氨氯地平的復(fù)方制劑，由諾華公司研發(fā)，于2007年在歐美上市，商品名為Exforge，2009年在中國上市，商品名為倍博特，適應(yīng)癥為原發(fā)性高血壓。

氨氯地平是廣泛使用的長效鈣拮抗劑(calcium channel blockers，CCB)，纈沙坦為血管緊張素受體拮抗劑(angiotensin receptor blocker，ARB)，CCB聯(lián)合ARB具有良好的協(xié)同降壓作用[1-2]，也是最常見的二聯(lián)用藥組合[3-7]。纈沙坦氨氯地平片治療原發(fā)性高血壓的Meta分析結(jié)果表明，其治療高血壓的效果優(yōu)于其他藥物[8]。

纈沙坦在水中幾乎不溶，其原料粒度直接影響片劑的溶出速度，從而影響片劑的療效；纈沙坦原料的靜電吸附作用強(qiáng)，在過篩時(shí)存在明顯的糊篩現(xiàn)象，無法通過篩分法進(jìn)行粒度控制，需采用激光散射法(濕法)測(cè)定[9]。纈沙坦原料具有多晶型現(xiàn)象，報(bào)道有無定型和20余種晶型[10-11]。參比制劑原研纈沙坦氨氯地平片在多種溶出介質(zhì)中的溶出速度不同[12]。由于纈沙坦的低溶解度、低堆密度、強(qiáng)靜電等特殊理化性質(zhì)，濕法制粒制備的纈沙坦氨氯地平片不崩解，需采用與參比制劑原研纈沙坦氨氯地平片相同的干法制粒制備工藝才能達(dá)到與原研制劑相近的體外溶出度[12-13]。

前期試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)更換同一廠家不同批次的纈沙坦原料制備的纈沙坦氨氯地平片溶出存在顯著差異，導(dǎo)致與原研藥溶出不相似，影響了制劑開發(fā)的進(jìn)度，故此擬對(duì)其原因進(jìn)行研究，并提出解決方案。

1 儀器與試藥

G10高效濕法混合制粒機(jī)，DP-5干法制粒機(jī)，Labcoat Ⅱ高效包衣機(jī)(深圳信宜特科技有限公司)，ZPW-23旋轉(zhuǎn)式壓片機(jī)(上海天祺制藥機(jī)械有限公司)。LC-20AD高效液相色譜儀及Labsolutions CS工作站(日本島津公司)，ZRS-8G溶出儀(天津天大天發(fā)公司)，XS-105型電子分析天平(梅特勒托利多公司)，BT9300激光粒度分析儀(丹東百特儀器有限公司)，DX-27mini X射線衍射儀(丹東浩元儀器有限公司)，YPD-300D片劑硬度儀(上海黃海藥檢儀器有限公司)，JX-2000A型顆粒圖像分析儀(成都精新粉體測(cè)試設(shè)備有限公司)。

纈沙坦原料(批1，批2，H公司)，苯磺酸氨氯地平(C公司)。磷酸二氫鉀、氫氧化鈉均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，乙腈甲醇均為色譜純，水為純化水或超純水。微晶纖維素、交聯(lián)聚維酮、二氧化硅、硬脂酸鎂(安徽山河藥用輔料有限公司)，歐巴代包衣粉(上?？房蛋录夹g(shù)有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 纈沙坦氨氯地平片制備

采用2種混合方式對(duì)原輔料進(jìn)行預(yù)混，考察預(yù)混方式對(duì)溶出的影響。

1)篩分混合：取纈沙坦80 g、苯磺酸氨氯地平6.94 g、微晶纖維素54.06 g、交聯(lián)聚維酮20 g、膠態(tài)二氧化硅15 g、硬脂酸鎂30 g預(yù)混，然后過篩，再繼續(xù)混合得預(yù)混料[13]。

2)剪切混合：取1)篩分混合相同原輔料置于高效濕法混合制粒機(jī)中，攪拌轉(zhuǎn)速為4 r/s，切刀轉(zhuǎn)速為30 r/s，分別混合3、 7、 10、 30 min。

預(yù)混后采用干法制粒方法將原輔料用干法制粒機(jī)碾壓成帶狀物，集成破碎、整粒。隨后另取硬脂酸鎂15 g與所制顆?；旌稀２捎弥睆?0 mm圓形沖頭壓片，控制片劑硬度為70～90 N。采用高效包衣機(jī)對(duì)素片以歐巴代為包衣材料包衣。

稅收策劃指的是是稅收和規(guī)則，是稅收減慢行為，條件是他們沒有違反現(xiàn)有的稅法，根據(jù)納稅義務(wù)，這樣他們就可以減少稅收的經(jīng)濟(jì)行為。在稅收策劃被安排后，他可以減少企業(yè)的稅收負(fù)擔(dān)，增加公司盈余。稅收策劃是一項(xiàng)新經(jīng)濟(jì)活動(dòng)。盡管政府要求企業(yè)整個(gè)經(jīng)濟(jì)活動(dòng)的開展和相關(guān)法令和法規(guī),這些原則方法,無疑使企業(yè)不斷完善；此外,國家提倡和鼓勵(lì)創(chuàng)業(yè),總是有一些稅收優(yōu)惠,這就給了企業(yè)稅務(wù)策劃的可能。

2.2 溶出測(cè)定

取原研制劑及自制的待測(cè)片劑，按照溶出度與釋放度測(cè)定法(中國藥典2015年版四部通則0931第二法)，以磷酸鹽緩沖液(pH=4.5)1 000 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50 r/min，經(jīng)過5、 10、 15、 30、 60、 120 min時(shí)，取溶液15 mL，并及時(shí)補(bǔ)充相同溫度和體積的溶出介質(zhì)，棄去初濾液10 mL，精密量取續(xù)濾液2 mL，精密加入2 mL體積分?jǐn)?shù)為50%(下同)的乙腈溶液，搖勻，作為供試品溶液； 另外取苯磺酸氨氯地平對(duì)照品和纈沙坦對(duì)照品適量，精密稱定，加入50%的乙腈溶液溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含氨氯地平0.1 mg、纈沙坦1.6 mg的混合溶液，作為對(duì)照樣品母液；精密量取對(duì)照品母液2 mL，精密加入2 mL溶出介質(zhì)，搖勻，作為對(duì)照品溶液。按照高效液相色譜法測(cè)定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水-三氟乙酸(體積比為500 ∶500 ∶2)為流動(dòng)相；流速為1.2 mL/min；檢測(cè)波長為237 nm；柱溫為40 ℃。精密量取上述2種溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按照外標(biāo)法以峰面積分別計(jì)算每片中氨氯地平和纈沙坦的溶出量。

測(cè)定2批纈沙坦及不同預(yù)混工藝制備的纈沙坦氨氯地平片的溶出，列出10、30、60 min溶出數(shù)據(jù)并以此計(jì)算相似因子f2，結(jié)果見表1和表2。

預(yù)混工藝采用篩分或剪切混合方式對(duì)纈沙坦和氨氯地平的溶出無明顯影響。批1纈沙坦原料制備的片劑中兩組分與原研制劑纈沙坦氨氯地平片溶出相似(f2>50)，而批2纈沙坦原料制備的片劑中兩組分溶出均高于原研制劑纈沙坦氨氯地平片。改變篩分1～8次數(shù)或剪切時(shí)間3～30 min，對(duì)兩組分的溶出均無明顯影響。

表1 預(yù)混工藝及原料批次對(duì)苯磺酸氨氯地平溶出的影響

表2 預(yù)混工藝及原料批次對(duì)纈沙坦溶出的影響

2.3 粒徑測(cè)定

稱取適量纈沙坦或苯磺酸氨氯地平原料，加入分散介質(zhì)，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%(下同)的十二烷基硫酸鈉(SDS)或液體石蠟，振搖并超聲15 s制得混懸溶液。儀器空白背景校正后測(cè)定樣品的粒徑分布。結(jié)果可見，在分散介質(zhì)1%的SDS和液體石蠟中纈沙坦2批原料所測(cè)粒徑均無明顯差異，即溶出差異無法用粒徑的不同來解釋。在液體石蠟中2批纈沙坦原料測(cè)得的粒徑大小分別為1%的SDS下所測(cè)D50值的12.9%和8.6%，具體數(shù)值見表3。

表3 纈沙坦和苯磺酸氨氯地平在不同分散介質(zhì)中的粒徑分布

2.4 晶型

使用X射線粉末衍射(XRD)儀測(cè)定2批纈沙坦晶型，結(jié)果可見2批纈沙坦均為無定形，XRD圖譜(圖1)無明顯差異。

圖1 2批纈沙坦原料藥的XRD圖譜Fig.1 XRD diagram of two batches of valsartan

2.5 顆粒形貌光學(xué)觀察

2批纈沙坦粒徑、晶型無明顯差異，無法解釋其中纈沙坦與苯磺酸氨氯地平溶出加快的原因，因此嘗試觀察顆粒形貌(簡(jiǎn)稱粒形)。取適量纈沙坦、苯磺酸氨氯地平及預(yù)混粉末采用顆粒圖像分析儀分析，光學(xué)顯微鏡，放大100倍，外加LED光源拍攝反射光圖像，結(jié)果見圖2。 由圖可見，2批纈沙坦粒形有明顯差異，批1主要為樹枝狀，而批2主要為團(tuán)球狀。預(yù)混粉末的顯微圖顯示，批1制得混合粉均勻細(xì)膩，無明顯團(tuán)塊，氨氯地平柱狀晶型得到良好包覆；而批2制得混合粉有明顯纈沙坦團(tuán)球。

a 批1纈沙坦粉末b 批2纈沙坦粉末c 批1纈沙坦預(yù)混料d 批2纈沙坦預(yù)混料圖2 纈沙坦原料及預(yù)混料的光學(xué)顯微鏡圖像Fig.2 Microscopy morphology of valsartan and premixture

另取纈沙坦粒徑測(cè)定溶液置于載玻片上，同法測(cè)定，結(jié)果見圖3。由圖可見，在1%的SDS介質(zhì)中，批1原料在粉末狀態(tài)下的樹枝狀消失，批2原料粉末狀態(tài)下的團(tuán)球現(xiàn)象消失，均形成無序的粒子聚集，2批纈沙坦在1%的SDS中的粒形無明顯差異，與粒徑測(cè)定結(jié)果相一致。而在液體石蠟中，2批纈沙坦均形成極細(xì)顆粒，無明顯聚集，2批原料間無差異。 此結(jié)果驗(yàn)證了液體石蠟中所測(cè)粒徑約為1%SDS所測(cè)粒徑1/10的現(xiàn)象，分析原因可能在于液體石蠟對(duì)纈沙坦?jié)櫇褡饔幂^強(qiáng)，顆粒間無聚集現(xiàn)象，所測(cè)粒徑為一次顆粒的粒徑，而1%的SDS中纈沙坦并不能良好分散，所測(cè)粒徑為凝聚成團(tuán)的顆粒粒度。

3 討論

本研究中采用相同廠家的2批纈沙坦原料制備纈沙坦氨氯地平片，2批纈沙坦原料晶型均為無定型，與XRD圖譜結(jié)果一致； 紅外光譜、 熔點(diǎn)、 含量、 雜質(zhì)等化學(xué)指標(biāo)均一致； 激光粒度測(cè)定法測(cè)得粒徑分布一致。 然而采用相同處方工藝制備的片劑的溶出差異卻非常大，為該制劑開發(fā)工作帶來極大困擾。

纈沙坦顆粒表面帶有靜電，易聚集，易糊篩，其粒徑無法采用激光粒度測(cè)定法(干法)和篩分法測(cè)定，而應(yīng)采用激光粒度測(cè)定法(濕法)進(jìn)行控制[9]。 為了解決難溶性原料的疏水性問題，一般會(huì)采用加入表面活性劑和超聲的方法增加顆粒表面的潤濕性，使顆粒均勻分散在介質(zhì)中。 但是，表面活性劑或者超聲往往會(huì)使團(tuán)聚顆粒破裂，因此無法判定所測(cè)粒徑為原始單個(gè)顆粒粒度還是團(tuán)聚顆粒的粒度[14]。

本試驗(yàn)中纈沙坦粒徑采用1%的SDS作為分散介質(zhì)超聲后測(cè)定，光學(xué)顯微圖像證實(shí)該方法主要解決了纈沙坦疏水問題，未能使顆粒均勻分散，所測(cè)粒徑為團(tuán)聚粒度；而采用液體石蠟作為分散介質(zhì)則解決了分散問題，所測(cè)粒徑為原始單個(gè)顆粒粒度。但是本研究中不論是團(tuán)聚粒徑還是原始粒徑，2批原料粒徑均未見明顯差異，粒徑大小無法與溶出度建立相關(guān)性，因此還需要結(jié)合制劑工藝來研究兩者的溶出度差異。

a 批1纈沙坦分散在1%SDS中b 批2纈沙坦分散在1%SDS中c 批1纈沙坦分散在液體石蠟中d 批2纈沙坦分散在液體石蠟中圖3 纈沙坦分散在不同介質(zhì)里的光學(xué)顯微鏡圖像Fig.3 Microscopy morphoLogy of valsartan dispersed in different media

原料以固體狀態(tài)與其他原料的混合包括對(duì)流混合、剪切混合、擴(kuò)散混合3種，本研究采用了2種預(yù)混合工藝。擴(kuò)散混合為粉體顆粒之間相互滲透、摻和，而剪切混合使顆粒斷裂產(chǎn)生新的接觸面，篩分相對(duì)于剪切混合和擴(kuò)散混合作用力更弱。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，采用2種預(yù)混方法后2批纈沙坦制備的片劑溶出未見差異。剪切混合切刀轉(zhuǎn)速為300～3 000 r/s，制得顆粒粒徑為0.17～0.83 mm(20～80目)，在工藝要求的制粒成品粒度范圍內(nèi)[15]，對(duì)于粒徑D50小于0.1 mm的纈沙坦原料已無明顯剪切粉碎作用，因此與篩分混合的工藝溶出效果一致。

采用光學(xué)顯微鏡進(jìn)一步觀察纈沙坦的粘結(jié)現(xiàn)象。由于纈沙坦及其他輔料均不透明，因此主要采用反射光觀察。光學(xué)顯微圖像發(fā)現(xiàn)2批纈沙坦原料粒形存在明顯差異，批1為樹枝狀，而批2為團(tuán)球狀。樹枝狀原料有較大的表面積，粒子相互間粘結(jié)力強(qiáng)，其余輔料難以完全阻斷其粘結(jié)，崩解時(shí)易形成團(tuán)塊，溶出較慢。團(tuán)球狀顆粒比表面積小，易被其余輔料阻斷粘結(jié)，無法形成團(tuán)塊，整體溶出偏快。

由此可見，2批纈沙坦原料雖然激光粒度測(cè)定法顯示兩者具有相同的粒徑，但是具有不同的粒型，導(dǎo)致制劑中顆粒形態(tài)及纈沙坦原料的分散程度不同，最后導(dǎo)致制劑溶出速度差異。粒型為樹枝狀的原料制粒時(shí)團(tuán)聚粘結(jié)，崩散后成大顆粒，接觸溶出介質(zhì)的面積小，溶出速度降低；反之粒型為團(tuán)球狀的原料制粒時(shí)無團(tuán)聚粘結(jié)，崩散后無大顆粒，接觸溶出介質(zhì)的面積大，溶出速度快。

綜上所述，對(duì)于難溶性藥物來說，僅僅通過晶型、粒徑的控制往往無法精準(zhǔn)地控制原料質(zhì)量，有必要增加粒形控制項(xiàng)。然而粒形控制目前尚無法量化，這是限制其廣泛應(yīng)用的主要缺陷。原料質(zhì)量可以通過其他的方法進(jìn)行控制，一是改進(jìn)的粒度測(cè)定法，使得所測(cè)粒徑 與制劑溶出有明確相關(guān)性；二是采用比表面積測(cè)定，建立比表面積與制劑溶出的相關(guān)性；同時(shí)也需要考慮制劑過程對(duì)粒子形態(tài)以及表面積的影響。