鄭榮先

通脈止渴膠囊是我院自制制劑，由葛根、天花粉、當(dāng)歸、川芎等14 味中藥組成，具有益氣養(yǎng)陰、活血通絡(luò)功效。方中以葛根、黃芪、麥冬、黃精、天花粉益氣養(yǎng)陰，扶正固本；配以當(dāng)歸、川芎、桃仁、紅花、地龍、蜈蚣等以活血通脈。葛根主要有效成分為葛根素，天花粉降血糖主要成分是天花粉凝集素蛋白[1]，當(dāng)歸、川芎的主要有效成分為揮發(fā)油類，幾味藥物均具有有效的薄層色譜法指標(biāo)控制成分及方法。為了更好地控制該制劑的質(zhì)量，保證臨床用藥安全有效，采用薄層色譜法對(duì)通脈止渴膠囊中葛根、天花粉、當(dāng)歸、川芎進(jìn)行定性鑒別，與《中華人民共和國(guó)藥典》（2015 版）及有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，對(duì)該制劑中4 味藥物質(zhì)量進(jìn)行控制，建立起更加科學(xué)、可行的多指標(biāo)成分質(zhì)量控制方法，通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究，用薄層層析法確定通脈止渴膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，操作方法簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。

1 儀器與試藥

ZF-2 型三用紫外分析儀；PQ3120 超聲波清理器；102 型電熱恒溫干燥箱；328A 分析天平；硅膠G 板；葛根素對(duì)照品、天花粉、當(dāng)歸、川芎對(duì)照藥材，葛根素對(duì)照品（110752-201313），川芎對(duì)照藥材（120918-200809）為中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，天花粉對(duì)照藥材（121361-201603），當(dāng)歸對(duì)照藥材（120927-201516）為中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；分別缺葛根，天花粉，當(dāng)歸、川芎陰性對(duì)照樣品；處方自制制劑供試品三批；其他試劑均為分析純，生產(chǎn)單位為天津市凱通化學(xué)試劑有限公司。

2 通脈止渴膠囊中部分藥物薄層色譜鑒別方法和結(jié)果

參照《中華人民共和國(guó)藥典》2015 版一部各味 中藥藥材的TLC 鑒別方法鑒別[2]，具體如下。

2.1 葛根的薄層色譜鑒別

供試品溶液的制備：取本品內(nèi)容物20 g，研細(xì)，加乙酸乙酯30 ml，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)? ml 甲醇使溶解，作為供試品溶液。點(diǎn)樣量：5 μl；對(duì)照品溶液的制備：取葛根素對(duì)照品，加甲醇制成每1 ml 含1 mg 的溶液，作為對(duì)照品溶液。點(diǎn)樣量：5 μl；陰性對(duì)照溶液的制備：取處方中除去葛根的其他藥味，按處方比例制成缺葛根的陰性對(duì)照樣品。取陰性對(duì)照樣品50 ml，同供試品溶液的制法，制成陰性對(duì)照溶液。點(diǎn)樣量：4 μl；展開(kāi)劑：三氯甲烷-甲醇-水（7：2.5：0.25）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，展距：上行展開(kāi)8 cm；顯色：取出，晾干，置氨蒸氣中熏15 min；檢視：置紫外光燈（365 nm）下檢視。見(jiàn)圖1。

圖1 葛根的薄層色譜鑒別

2.2 天花粉的TLC 鑒別

供試品溶液的制備：取本品15 g，研細(xì)，加稀乙醇40 ml，超聲處理30 min，濾過(guò)，取濾液作為供試品溶液。點(diǎn)樣量：4 μl；對(duì)照藥材溶液的制備：取天花粉對(duì)照藥材2 g，加稀乙醇20 ml，超聲處理30 min，濾過(guò)，取濾液作為對(duì)照藥材溶液。點(diǎn)樣量：2 μl；陰性對(duì)照溶液的制備：取處方中除去天花粉的其他藥味，按處方比例制成缺天花粉的陰性對(duì)照樣品。取陰性對(duì)照樣品50 ml，同供試品溶液的制法，制成陰性對(duì)照溶液。點(diǎn)樣量：4 μl；展開(kāi)劑：正丁醇-無(wú)水乙醇-冰醋酸-水（8：2：2：3），展距：上行展開(kāi)8 cm；顯色：取出，晾干，噴以茚三酮試液；檢視：在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色，缺天花粉陰性對(duì)照藥材在與對(duì)照藥材和三批供試品色譜相應(yīng)的位置上無(wú)相同顏色的熒光斑點(diǎn)顯示。見(jiàn)圖2。

圖2 天花粉的薄層色譜鑒別

2.3 當(dāng)歸、川芎的TLC 鑒別

供試品溶液的制備：取本品15 g，研細(xì)，加乙酸乙酯30 ml，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? ml 使溶解，作為供試品溶液。點(diǎn)樣量：5 μl；對(duì)照藥材溶液的制備：取當(dāng)歸、川芎對(duì)照藥材各1 g，加乙酸乙酯30 ml，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? ml 使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。點(diǎn)樣量：5 μl；陰性對(duì)照溶液的制備：取處方中除去當(dāng)歸、川芎的其他藥味，按處方比例制成缺當(dāng)歸、川芎的陰性對(duì)照樣品。取陰性對(duì)照樣品30 ml，同供試品溶液的制法，制成陰性對(duì)照溶液。點(diǎn)樣量：5 μl；展開(kāi)劑：環(huán)己烷-乙酸乙酯（9：1），展距：上行展開(kāi)8 cm；顯色：取出，晾干；檢視：置紫外光燈（365 nm）下檢視。見(jiàn)圖3。

2.4 4味藥物TLC 鑒別結(jié)果

供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照在相應(yīng)位置無(wú)斑點(diǎn)，表明陰性對(duì)照無(wú)干擾。比較不同廠家的薄層板及不同的溫濕度條件，結(jié)果色譜圖中均斑點(diǎn)清晰、分離效果較好。故列入該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制。

3 薄層色譜法鑒別中需要注意問(wèn)題

3.1 薄層色譜法在2015年版國(guó)家藥典委員會(huì)單獨(dú)納入四部通則色譜法項(xiàng)下薄層色譜法（0502），用于 鑒別、檢查、或含量測(cè)定[3]。操作中仍需要加強(qiáng)規(guī)范，樣品溶液制備、展開(kāi)劑、點(diǎn)樣、展開(kāi)（預(yù)飽和、溫濕度控制、Rf 值展距）、顯色、攝像與記錄及圖譜分析與評(píng)價(jià)等，每一個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)薄層色譜鑒別均具有重要影響。

圖3 當(dāng)歸、川芎的薄層色譜鑒別

3.2 醫(yī)院處方制劑共14 味中藥組成，成分復(fù)雜，待測(cè)定成分受其他因素干擾較大，易影響分離效果，影響定性定量的分析。幾組藥物溶液制備采取溶劑提取法，根據(jù)該中藥飲片含有各種有效成分在溶劑中的溶解性，分別選取對(duì)活性成分溶解度大，對(duì)其他成分溶解性小的溶劑而達(dá)到該成分的提取，進(jìn)行薄層鑒別。

3.3 采用微升毛細(xì)管手動(dòng)點(diǎn)樣，注意控制點(diǎn)樣量，點(diǎn)樣量大斑點(diǎn)分離度差，點(diǎn)樣量小斑點(diǎn)顯示清晰度不夠，根據(jù)情況選用圓點(diǎn)狀或窄細(xì)的條帶狀進(jìn)行點(diǎn)樣。

3.4 按照《中華人民共和國(guó)藥典》，主要考慮溶劑的極性和溶劑的選擇性，控制基線至展開(kāi)斑點(diǎn)中心的距離與基線至展開(kāi)劑前沿的距離的比值（Rf）在0.2～0.8，達(dá)到最佳的分離效果。

3.5 選用的是煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所生產(chǎn)的硅膠G板，根據(jù)展開(kāi)的效果選用適當(dāng)?shù)恼归_(kāi)方法。將點(diǎn)好樣的供試品、對(duì)照藥材、陰性對(duì)照藥材的薄層板放入預(yù)飽和完展開(kāi)缸中，浸入展開(kāi)劑的深度為距原點(diǎn)5 mm，密閉。均上行展開(kāi)8 cm，取出薄層板，晾干，置紫外燈下（365 nm）檢測(cè)。

3.6 比較不同廠家的薄層板及不同的溫濕度條件，結(jié)果溫度控制在25 ℃，相對(duì)濕度70%時(shí)，色譜圖中均斑點(diǎn)清晰、分離效果較好。

3.7 處方中葛根薄層色譜展開(kāi)后取出，晾干，置氨蒸氣中熏15 min，置紫外光燈（365 nm）下檢視熒光斑點(diǎn)。天花粉薄層色譜展開(kāi)后取出，晾干，噴以茚三酮試液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色。當(dāng)歸、川芎薄層色譜展開(kāi)后取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視熒光斑點(diǎn)，

4 討論

以硅膠G 板作為吸附劑，分析速度快，在365 nm紫外燈下檢視，斑點(diǎn)熒光靈敏度高，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，便于觀察。溫度在室溫進(jìn)行色譜分析，色譜效果較好，溫度過(guò)低，展開(kāi)劑易分層。

各藥物選擇溶媒合理，超聲震蕩法，提取完全，效果好。對(duì)缺相應(yīng)藥物陰性對(duì)照溶液，結(jié)果在相應(yīng)位置無(wú)斑點(diǎn)，表明陰性對(duì)照無(wú)干擾。

通脈止渴膠囊以糖尿病患者為適用對(duì)象，在臨床實(shí)踐治療中以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，糖尿病仍以消渴之“陰虛”為根本病機(jī)，治療應(yīng)以益氣養(yǎng)陰，活血通脈為法。方中以葛根、黃芪、麥冬、黃精、天花粉益氣養(yǎng)陰，扶正固本；配以當(dāng)歸、川芎、桃仁、紅花、地龍、蜈蚣等以活血通脈以治標(biāo)，諸藥合用，共奏益氣養(yǎng)陰、活血通脈功效。薄層色譜鑒別中選取方中均具有有效治療成分藥材，建立起多指標(biāo)成分控制制劑質(zhì)量的薄層色譜鑒別方法。

葛根具有解肌退熱、生津止渴、透疹、升陽(yáng)止瀉、通筋活絡(luò)、解酒毒功效，主要含葛根素，是其特有的有效成分，在心腦血管系統(tǒng)、糖尿病、腸道系統(tǒng)等組方配伍中應(yīng)用廣泛。葛根素能降低血糖、血液黏度，具有降低改善脂肪細(xì)胞的胰島素抵抗，增強(qiáng)脂肪細(xì)胞對(duì)葡萄糖提取和利用的能力[4]，因此葛根素能控制血糖濃度，抑制糖蛋白基化的進(jìn)程，能有效降低血糖，預(yù)防和治療糖尿病并發(fā)癥。該制劑中選用成分確定，專屬性強(qiáng)的中藥飲片，能有效控制質(zhì)量。按照《中華人民共和國(guó)藥典》及有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道采用薄層色譜法對(duì)葛根進(jìn)行鑒別，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，選擇的展開(kāi)劑分離效果顯著，斑點(diǎn)清晰，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

天花粉功效清熱瀉火，生津止渴，消腫排膿，文獻(xiàn)中報(bào)道，天花粉發(fā)揮其藥理活性的主要成分包括天花粉蛋白（Trichosanthin,TCS）、天花粉凝集素（Trichosanthes kirilowii lection,TKL）、天花粉多糖、瓜氨酸，此外還包括皂苷類和黃酮類成分等[5]；天花粉復(fù)方制劑有降血糖作用，降血糖活性化合物是植物凝集素類化合物，具有抗脂肪分解和及促進(jìn)脂肪合成等胰島素樣作用[6]；天花粉中分離得到5 種降血糖有效成分，TrichosanA、B、C、D、E 具有降低正常小鼠的血糖作用[7]；天花粉為“消渴圣藥”，在治療糖尿病及終止妊娠方面具有極高的新藥開(kāi)發(fā)利用價(jià)值[8]。

當(dāng)歸有補(bǔ)血活血，調(diào)經(jīng)止痛，潤(rùn)腸通便等功效，當(dāng)歸含有揮發(fā)油、有機(jī)酸、多糖和黃酮等成分，藥理作用廣泛，當(dāng)歸“補(bǔ)血”對(duì)機(jī)體造血作用明顯，通過(guò)刺激與造血相關(guān)細(xì)胞、分子等對(duì)造血系統(tǒng)產(chǎn)生影響，達(dá)到“補(bǔ)血”作用?！盎钛睂?duì)循環(huán)系統(tǒng)作用明顯，通過(guò)抑制血小板凝聚達(dá)到治療效果，對(duì)糖尿病、銀屑病等治療效果明顯[9]；川芎有活血行氣，祛風(fēng)止痛的功效。川芎揮發(fā)油中含有苯酞、烯萜醇、脂肪酸類化合物。藁本內(nèi)酯、丁基苯酞（3）、丁烯基酞內(nèi)酯（4）等苯酞類化合物和α-蒎烯（15）、胡蘿卜烯醇（17）等烯萜、烯醇類化合物在川芎揮發(fā)油中含量相對(duì)較高且穩(wěn)定，可作為川芎揮發(fā)油指紋圖譜的指標(biāo)成分[10]。兩味藥物均含有揮發(fā)油類有效成分，可用水蒸氣蒸餾法提取，方法簡(jiǎn)單易行，經(jīng)濟(jì)實(shí)用。

4 味藥物均為方中重要藥物，治療作用明顯，成分確定，作為方劑質(zhì)量控制品種，色譜識(shí)別度高，斑 點(diǎn)清晰，結(jié)果可靠，因此，可作為通脈止渴膠囊質(zhì)量控制的依據(jù)。