季福慶 張明坤 李夢(mèng)斐

(西安市第三醫(yī)院甲乳外科，陜西 西安 710018)

乳腺癌為女性群體中發(fā)病率較高的一種惡性腫瘤，屬于全身性疾病，其腫瘤發(fā)展早期便可出現(xiàn)遠(yuǎn)處播散轉(zhuǎn)移情況，而復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移為致使該疾病患者死亡的重要原因[1]。有文獻(xiàn)[2]指出，機(jī)體外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTCs)與該疾病的轉(zhuǎn)移以及復(fù)發(fā)具有相關(guān)性，而分析與檢測(cè)CTCs對(duì)該疾病患者早期微轉(zhuǎn)移、治療方案選擇、預(yù)后評(píng)估等方面均具有重要價(jià)值?；诖耍疚闹荚谔接慍TCs與患者免疫組織化學(xué)指標(biāo)、臨床特征、不同分子類型的關(guān)聯(lián)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2016年4月至2018年3月在我院治療的78例乳腺癌患者的臨床資料組成觀察組，同時(shí)，將同期于我院接受健康體檢的30例健康志愿者的資料組成對(duì)照組，入選者均為女性。觀察組年齡24～75歲，平均(49.81±3.27)歲；絕經(jīng)前46例，絕經(jīng)后32例。對(duì)照組年齡25～75歲，平均(50.07±3.29)歲；絕經(jīng)前17例，絕經(jīng)后13例。觀察組納入標(biāo)準(zhǔn)：通過術(shù)后病理證實(shí)或乳腺腫塊空芯針穿刺活檢病理檢查證實(shí)為浸潤性乳腺癌者；影像學(xué)資料以及臨床資料完整者；將上腹部與胸部CT檢查顯示無肝、肺轉(zhuǎn)移。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其它惡性腫瘤病史者；凝血功能障礙者；先天性心臟病者；肝腎功能衰竭者；近期接受內(nèi)分泌外相關(guān)治療者；表達(dá)障礙或精神疾病者。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法 (1)采集兩組7.5 mL肘靜脈血，加入肝素進(jìn)行抗凝操作，冷卻10 min，加入5 mL磷酸緩沖鹽溶液(PBS)稀釋，再將3 mL淋巴細(xì)胞分離液(FICOLL配制)加入，離心，將血漿去除，加入PBS液2 mL，混勻并離心，將上清液去除，將BD公司(美國)提供的波形蛋白抗體、CD45、細(xì)胞角蛋白抗體以上皮細(xì)胞黏附分子抗體加入，各0.5 μL，混勻，避光，時(shí)長約30 min，而后離心進(jìn)行檢測(cè)。經(jīng)流失細(xì)胞分析術(shù)分析，通過側(cè)向反散射對(duì)前向散射作二維散射點(diǎn)，而后設(shè)R1門，選取R1門細(xì)胞，以向反散射對(duì)CD45-PE作為二維散射點(diǎn)，并選取CD45(-)細(xì)胞，以側(cè)向反散射對(duì)細(xì)胞角蛋白作二維散射點(diǎn)，并選取細(xì)胞角蛋白(+)細(xì)胞，設(shè)置為R2門。而后取R2門細(xì)胞，以波形蛋白對(duì)上皮細(xì)胞黏附分子作二維散射點(diǎn)，取波形蛋白(+)與上皮細(xì)胞黏附分子(+)作為R3門，生成散點(diǎn)圖，分析數(shù)據(jù)。將波形蛋白(+)、上皮細(xì)胞黏附分子(+)、CD45(-)、細(xì)胞角蛋白(+)定義為陽性，將CTCs≥5/7.5 mL視作外周血為轉(zhuǎn)移陽性。(2)通過免疫組織化學(xué)法測(cè)定孕激素受體(PR)、雌激素受體(ER)、P53、人表皮生長因子受體-2(HER-2)、Ki-67表達(dá)。當(dāng)原發(fā)腫瘤細(xì)胞核染色不低于1%時(shí)，認(rèn)為PR或ER視作陽性；HER-2(3+)視作陽性，HER-2(+或0)視作陰性，而HER-2(2+)應(yīng)進(jìn)行熒光原位雜交。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料用百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1兩組CTCs陽性表達(dá)情況 觀察組中檢出CTCs陽性30例，陽性率為38.46%(30/78)，對(duì)照組未發(fā)現(xiàn)CTCs陽性表達(dá)，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=15.976，P=0.000)。

2.2不同特征患者CTCs陽性表達(dá)情況 不同年齡及不同病理類型乳腺癌患者間CTCs陽性表達(dá)對(duì)比無明顯差異(P>0.05)；不同TNM分期乳腺癌患者中CTCs陽性表達(dá)對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者(M1期)CTCs陽性表達(dá)顯著高于非轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者(M0期)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 不同特征患者CTCs陽性表達(dá)對(duì)比[n(%)]

2.3不同分子類型、免疫組織化學(xué)指標(biāo)患者的CTCs陽性表達(dá)情況 不同PR、ER、P53、HER-2以及Ki-67表達(dá)的乳腺癌患者的CTCs陽性表達(dá)對(duì)比無明顯差異(P>0.05)；并且不同分子分型的乳腺癌患者的CTCs陽性表達(dá)對(duì)比也無差異(P>0.05)。見表2。

表2 不同分子類型、免疫組織化學(xué)指標(biāo)患者的CTCs陽性表達(dá)對(duì)比[n(%)]

續(xù)表 表2

3 討 論

與傳統(tǒng)影像學(xué)檢查以及組織學(xué)檢查比較，CTCs檢測(cè)具有較高的敏感性以及可重復(fù)性，可作為臨床實(shí)時(shí)液體活檢檢測(cè)的重要標(biāo)志物，利于及早提供有效的評(píng)估信息[3]。CTCs在檢測(cè)過程中，基本包括細(xì)胞的檢測(cè)以及富集，其中，檢測(cè)方法包括細(xì)胞檢測(cè)、核酸檢測(cè)技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)以及免疫細(xì)胞化學(xué)法；富集方法則包括密度梯度離心法、黏附分離法以及免疫磁珠分離法等[4]。本文結(jié)果顯示，乳腺癌患者CTCs陽性率為38.46%，明顯高于健康體檢者。

有文獻(xiàn)[5]指出，30.00%左右的早期乳腺癌患者術(shù)后很可能于輔助治療中受益，而在晚期轉(zhuǎn)移乳腺癌患者的外周血中可檢測(cè)到CTCs，認(rèn)為其在臨床分期方面具有一定指導(dǎo)意義，利于臨床TNM分期。本文結(jié)果顯示， M1期CTCs陽性表達(dá)顯著高于M0期，且不同TNM分期乳腺癌患者中CTCs陽性表達(dá)均存在差異性，與上述研究結(jié)果相符。雌激素以及孕激素的表達(dá)為該疾病重要的預(yù)后因素，同時(shí)也是預(yù)測(cè)激素治療效果的有效指標(biāo)[6]。P53基因?yàn)榕袛嗷颊哳A(yù)后的重要指標(biāo)之一；Ki-67屬于核抗原，與增殖細(xì)胞相關(guān)，其功能同有絲分裂存在密切關(guān)聯(lián)，而Ki-67標(biāo)記為處于人體增殖周期中的一種細(xì)胞，其標(biāo)記陽性率越高，提示組織分化越差，腫瘤生長越快，其對(duì)化療也愈加敏感，故預(yù)后較差[7]。除此之外，乳腺癌內(nèi)分泌治療主要根據(jù)PR與ER表達(dá)水平，靶向治療則多依據(jù)HER-2表達(dá)水平，乳腺癌分子亞型將影響患者的預(yù)后以及生存情況[8]。有研究表明，CTCs陽性率與分子分型、HER-2、PR、ER、病理分級(jí)以及腫瘤大小均無明顯相關(guān)性，但也有研究認(rèn)為CTCs計(jì)數(shù)與分子分型、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及腫瘤分期有關(guān)，但與HER-2、PR、ER、Ki-67無相關(guān)性[9-10]。而本文結(jié)果顯示，不同PR、ER、P53、HER-2以及Ki-67表達(dá)患者以及不同分子分型患者間CTCs陽性表達(dá)均無明顯差異。

綜上所述，CTCs與乳腺癌患者腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移以及TNM分期存在關(guān)聯(lián)，利于指導(dǎo)臨床對(duì)該疾病進(jìn)行診斷，并可依據(jù)檢測(cè)結(jié)果評(píng)估治療效果與預(yù)后。