蘇悅 于海玲 邵錦瑩 袁怡雯 粟敏

[摘要]目的：金銀花綠原酸提取物的抑菌作用研究。方法：取大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌新鮮培養(yǎng)物接種至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18-24h;分別接種至三個(gè)營(yíng)養(yǎng)肉湯瓊脂斜面固體培養(yǎng)基保藏，37℃培養(yǎng)18-24h;將這三種菌種接種到液體培養(yǎng)基中，進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，用移液槍移取100ul菌懸液用三角玻璃涂布棒均勻涂布于90mm的平板上，將含有28mg/ml綠原酸的濾紙片貼在已接種待檢茵的瓊脂平板上，在37℃培養(yǎng)3-5d，觀察菌種的生長(zhǎng)情況，記錄數(shù)據(jù)，測(cè)量抑菌圈直徑。結(jié)果：同時(shí)采用紙片法，測(cè)試了金銀花綠原酸提取物的抑茵活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其對(duì)大腸埃希茵、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌均有一定的抑菌作用，抑菌活性強(qiáng)弱為大腸埃希菌>金黃色葡萄球菌>枯草芽孢桿菌。結(jié)論：金銀花綠原酸提取物對(duì)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌均有一定的抑菌作用

[關(guān)鍵詞]金銀花綠原酸提取物 細(xì)菌 藥紙片 K-B法

綠原酸（Chlorogenic acid）是由咖啡酸（Caffeic acid）與奎尼酸（Quinic acid）組成的縮酚酸，異名咖啡單寧酸，化學(xué)名：3-0咖啡?？崴幔?-O-Caffeoyl quinic acid），分子式：C16H1809，分子量：354.30，是植物體在有氧呼吸過(guò)程中經(jīng)莽草酸途徑產(chǎn)生的一種苯丙素類化合物。綠原酸是一種重要的生物活性物質(zhì)，具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利膽、抗腫瘤、降血壓、降血脂、清除自由基和興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)等作用。中藥成分CRA/IRC廣泛存在于植物中，以金銀花，杜仲中的含量較高，具有廣泛的藥理作用，已有文獻(xiàn)報(bào)道其具有體外抗炎、抗菌及抗病毒作用：本研究通過(guò)提取金銀花有效成分綠原酸，檢驗(yàn)綠原酸對(duì)常見(jiàn)三種控制菌的抑菌作用，以了解金銀花提取物綠原酸的抗菌效果，為金銀花抗菌藥用價(jià)值的開(kāi)發(fā)奠定實(shí)驗(yàn)理論基礎(chǔ)。

一、對(duì)象與方法

（一）實(shí)驗(yàn)細(xì)菌

以大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，將細(xì)菌培養(yǎng)于長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院生命科技樓二樓實(shí)驗(yàn)房，培養(yǎng)箱中37℃恒溫培養(yǎng)。

（二）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

純度98%金銀花綠原酸提取物于冰箱（2℃）保存;取大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌新鮮培養(yǎng)物接種至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18～24h;分別接種至三個(gè)營(yíng)養(yǎng)肉湯瓊脂斜面固體培養(yǎng)基保藏，37℃培養(yǎng)18～24h;將這三種菌種接種到液體培養(yǎng)基中，進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，用移液槍移取100ul菌懸液用三角玻璃涂布棒均勻涂布于90mm的平板上，將含有28mg/ml綠原酸的濾紙片貼在已接種待檢菌的瓊脂平板上，在37℃培養(yǎng)1d，觀察菌種的生長(zhǎng)情況，記錄數(shù)據(jù)，測(cè)量抑菌圈直徑，同法平行操作3次。

（三）觀察指標(biāo)

將貼好藥紙片的平板置37℃培養(yǎng)3～5d后，用游標(biāo)卡尺取抑菌圈直徑

（四）統(tǒng)計(jì)分析

用十字交叉法測(cè)量抑菌圈直徑，并觀察抑菌圈透明程度和邊緣整齊程度。3～5d后測(cè)量抑菌圈的直徑。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)。

二、結(jié)果

同時(shí)采用紙片法，測(cè)試金銀花綠原酸提取物的抑菌活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其對(duì)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌均有一定的抑菌作用，抑菌活性強(qiáng)弱為大腸埃希菌>金黃色葡萄球菌>枯草芽孢桿菌。具體見(jiàn)表1。

三、討論

金銀花具有清熱解毒、涼風(fēng)散熱、抗病毒、保肝利膽等功能，是我國(guó)傳統(tǒng)的中藥植物。金銀花中的主要化學(xué)成分黃酮類、有機(jī)酸類、三萜皂苷類、揮發(fā)油等，其中主要活性成分有機(jī)酸中的綠原酸（Chlorogcnicacid）。綠原酸對(duì)大腸癌、肝癌和喉癌具有顯著的抑制作用，被認(rèn)為是癌癥的有效化學(xué)防護(hù)劑;真菌感染是一種機(jī)會(huì)性感染疾病，它攻擊免疫低下宿主：研究發(fā)現(xiàn)，金銀花中綠原酸對(duì)枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌效果與慶大霉素相似：慶大霉素雖對(duì)一些致病菌等具有強(qiáng)抑菌作用，但它對(duì)人體有腎毒性、耳毒性、過(guò)敏反應(yīng)等：因此，通過(guò)實(shí)驗(yàn)提取金銀花有效成分綠原酸，檢驗(yàn)綠原酸對(duì)常見(jiàn)五種控制菌的抑菌作用，以了解金銀花提取物綠原酸的抗菌效果，為金銀花抗菌藥用價(jià)值的開(kāi)發(fā)奠定實(shí)驗(yàn)理論基礎(chǔ)。