張婉君,馮 彬,謝筆鈞,孫智達(dá)

(華中農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院,湖北武漢 430070)

番石榴(PsidiumguajavaL.),又稱為芭樂(lè),俗名雞矢果、撥子,是一種熱帶水果。原產(chǎn)于美洲熱帶,現(xiàn)在在全球廣泛分布,全球最大的生產(chǎn)國(guó)家是印度,其次是中國(guó)和泰國(guó)。根據(jù)果肉的顏色可以將其分為紅肉及白肉番石榴兩大類。紅肉番石榴多為野生,白肉番石榴為人工選育栽培的新品種。其中珍珠番石榴更是白肉番石榴中的優(yōu)等品種,是支持南方農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)的大宗水果之一[1]。根據(jù)我國(guó)藥典記載,番石榴葉、皮具有開(kāi)胃消食、止瀉通便、收斂、止癢、提高機(jī)體免疫力、消炎、治療糖尿病、保肝護(hù)肝等多重功效[2]。研究發(fā)現(xiàn)番石榴中含有維生素A、B、C以及鈣、磷、鉀、鐵等元素[3-5]。番石榴中還含有多種活性成分,主要有黃酮、類胡蘿卜素、揮發(fā)油、萜類和三萜等。其中黃酮是番石榴中重要的生物活性成分,具有良好的抑菌、抗氧化、抗腫瘤等功效。

目前對(duì)番石榴黃酮研究主要集中在紅肉品種的葉及全果上,關(guān)于白肉品種番石榴研究較少。且研究局限于番石榴的單一部位,對(duì)于番石榴不同部位的黃酮提取及抗氧化活性的比較幾乎為零,而使皮、果肉等其他部位黃酮物質(zhì)被忽略[6-8]。

因此,本研究將選用珍珠番石榴(白肉)為原料,而其中番石榴葉及番石榴皮為工業(yè)生產(chǎn)的副產(chǎn)物,并且黃酮含量較高,具有進(jìn)行提取工藝優(yōu)化的價(jià)值,則對(duì)番石榴葉、皮中的總黃酮進(jìn)行提取工藝優(yōu)化。再對(duì)番石榴果肉總黃酮進(jìn)行提取,探討番石榴葉、皮、果肉中黃酮的體外抗氧化活性差異,以增加番石榴不同組成部分的綜合利用價(jià)值,同時(shí)為開(kāi)發(fā)天然的抗氧化劑提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

珍珠番石榴(白肉) 購(gòu)自廣東珠海;2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)、水溶性維生素C Sigma公司;蘆丁等 國(guó)產(chǎn)分析純。

EL104電子天平 梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;UV2100紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)尤尼柯(上海)儀器有限公司;DK-98-ⅡA電熱恒溫水浴鍋 天津市泰斯特儀器有限公司;KX-100型高速多功能粉碎機(jī) 浙江武義鼎藏日用金屬制品廠;5084高速冷凍離心機(jī) 德國(guó)艾本德。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 番石榴總黃酮的提取 番石榴葉的預(yù)處理:將番石榴葉置于溫度為40 ℃的烘箱中烘干直至恒重,粉碎至60目于干燥器內(nèi)保存。番石榴果皮的預(yù)處理:將番石榴的果皮使用液氮低溫研磨成粉放置在-20 ℃下保存。分別準(zhǔn)確稱取1.0 g番石榴葉、皮粉末,按照一定的料液比加入一定濃度的乙醇溶液,在一定的設(shè)定溫度下水浴浸提一定的時(shí)間。常溫條件下以5000 r/min離心5 min,收集上清液,使用一定體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液定容至50 mL棕色容量瓶中。

1.2.2 單因素實(shí)驗(yàn)

1.2.2.1 乙醇濃度對(duì)總黃酮提取量的影響 設(shè)定料液比為1∶5 (g/mL),提取溫度為40 ℃,提取時(shí)間為60 min,考察乙醇濃度為20%、40%、60%、80%、100%時(shí)對(duì)番石榴葉、皮總黃酮提取量的影響。

1.2.2.2 提取溫度對(duì)總黃酮提取量的影響 設(shè)定乙醇濃度為60%,料液比為1∶5 (g/mL),提取時(shí)間為60 min,考察提取溫度為40、50、60、70、80 ℃時(shí)對(duì)番石榴葉、皮總黃酮提取量的影響。

1.2.2.3 料液比對(duì)總黃酮提取量的影響 設(shè)定乙醇濃度為60%,提取溫度為60 ℃,提取時(shí)間為60 min,考察料液比1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25 (g/mL)對(duì)番石榴葉總黃酮提取量的影響。

設(shè)定乙醇濃度為60%,提取溫度為50 ℃,提取時(shí)間為60 min,考察料液比1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25 (g/mL)對(duì)番石榴皮總黃酮提取量的影響。

1.2.2.4 提取時(shí)間對(duì)總黃酮提取量的影響 設(shè)定乙醇濃度為60%,料液比為1∶20 (g/mL),提取溫度為60 ℃,考察提取時(shí)間為60、90、120、150、180 min對(duì)番石榴葉總黃酮提取量的影響。

設(shè)定乙醇濃度為60%,料液比為1∶10 (g/mL),提取溫度為50 ℃,考察提取時(shí)間為60、90、120、150、180 min對(duì)番石榴皮總黃酮提取量的影響。

1.2.3 正交實(shí)驗(yàn) 根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì),優(yōu)化番石榴葉、皮黃酮的提取工藝。

表1 番石榴葉總黃酮正交實(shí)驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)Table 1 Factors and levels of orthogonal test of total flavonoids from guava leaves

表2 番石榴皮黃酮正交實(shí)驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)Table 2 Factors and levels of orthogonal test of total flavonoids from guava peel

1.2.4 總黃酮含量的測(cè)定 采用硝酸鋁比色法測(cè)定總黃酮含量[9]。吸取0.8 mL番石榴葉、皮總黃酮提取液于10 mL具塞試管中,加入0.4 mL 5% NaNO2,混勻后常溫放置5 min,再加入0.4 mL 10%的Al(NO3)3,混勻常溫放置5 min,后加入2 mL 4%的NaOH,混勻常溫放置10 min后用70%乙醇溶液定容至5 mL。于510 nm處測(cè)定吸光值。另以0.2～0.8 mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液代替樣品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,線性回歸方程為:y=0.8126x-0.0037(R2=0.9998),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到番石榴葉、皮中總黃酮含量(mg/mL)。

1.2.5 黃酮提取量的計(jì)算 根據(jù)以下公式計(jì)算番石榴葉、皮總黃酮的提取量。

式中:C為根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出的黃酮的質(zhì)量濃度(mg/mL);V1為測(cè)定時(shí)的定容體積(mL);V2為提取液定容體積(mL);M為稱取的樣品質(zhì)量(g);V0為用于測(cè)定的提取液體積(mL)。

1.2.6 番石榴葉、皮、果肉總黃酮體外抗氧化活性測(cè)定 根據(jù)單因素正交結(jié)果得出的最優(yōu)總黃酮提取條件分別對(duì)番石榴葉、皮中的總黃酮進(jìn)行提取。參照番石榴皮的處理及總黃酮的提取方式對(duì)番石榴果肉進(jìn)行預(yù)處理并對(duì)總黃酮進(jìn)行提取。使用體積分?jǐn)?shù)為60%、50%、50%的乙醇溶液分別對(duì)番石榴葉、皮、果肉總黃酮溶液進(jìn)行稀釋,得到不同濃度的黃酮提取液。

1.2.6.1 清除ABTS自由基能力的測(cè)定 參照白海娜等的方法,并作部分修改[10]。ABTS原液可與過(guò)硫酸鉀溶液反應(yīng)生成ABTS+·,供氫抗氧化劑具有清除ABTS+·的作用。分別取0.2 mL不同濃度的番石榴葉、皮、果肉黃酮溶液與2.4 mL ABTS+·工作液混合避光反應(yīng)10 min,在734 nm處測(cè)定吸光度?？瞻捉M以樣品溶劑(70%乙醇)代替樣品液,對(duì)照組以蒸餾水代替ABTS+·工作液。并以VC作為參照比較效果。按以下公式計(jì)算ABTS+·清除率:

式中:A-樣品組吸光值;A0-空白組吸光值;A1-對(duì)照組吸光值。

ABTS+·工作液的獲取:將7 mmol/mL的ABTS原液與2.45 mmol/mL的過(guò)硫酸鉀溶液等體積混合,常溫避光反應(yīng)12～16 h。使用前用蒸餾水稀釋ABTS+·溶液使其在734 nm處的吸光值為0.70±0.02,得到ABTS+·工作液。

1.2.6.2 清除羥基自由基能力的測(cè)定 當(dāng)H2O2與FeSO4混合反應(yīng),會(huì)產(chǎn)生·OH。水楊酸的加入可結(jié)合·OH產(chǎn)生在510 nm處有特殊吸收的2,3-二羥基苯甲酸。若向以上反應(yīng)體系中加入具有清除羥基自由基的抗氧化劑,就會(huì)減少有色化合物的產(chǎn)生,降低體系吸光值[11]。本實(shí)驗(yàn)利用以上原理使用水楊酸法評(píng)估樣品清除羥基自由基的能力并與VC對(duì)比。在10 mL具塞試管中分別加入2 mL不同濃度的番石榴葉、皮、果肉黃酮溶液,然后加入2 mL 6 mmol/L的FeSO4溶液,再與2 mL 6 mmol/L的H2O2混合,搖勻常溫靜置10 min。之后加入6 mmol/L的水楊酸溶液2 mL,搖勻常溫靜置30 min。于510 nm處測(cè)定吸光值?？瞻捉M以樣品溶劑代替樣品溶液。對(duì)照組以蒸餾水代替H2O2。按以下公式計(jì)算羥基自由基清除率:

式中:A-樣品組吸光值;A0-空白組吸光值;A1-對(duì)照組吸光值。

1.2.6.3 鐵還原能力的測(cè)定 抗氧化劑可將鐵氰化鉀還原為亞鐵氰化鉀,亞鐵氰化鉀再與三氯化鐵反應(yīng)可產(chǎn)生普魯士藍(lán)(Fe4[Fe(CN)6]3),此物質(zhì)在700 nm處有最大吸收[12]。因此可通過(guò)以上反應(yīng)原理測(cè)定樣品的還原能力大小,并以VC為參照比較效果。分別取2.5 mL不同濃度的番石榴葉、皮、果肉黃酮溶液與2.5 mL的磷酸緩沖液(NaH2PO4與Na2HPO4,0.2 mol/L,pH=6.6)混合,并加入2.5 mL 1%的鐵氰化鉀溶液,充分混勻后在50 ℃條件下水浴20 min,快速冷卻后加入2.5 mL 10%三氯乙酸終止反應(yīng),常溫條件下以3000 r/min離心10 min,取1 mL上清液與0.5 mL 1%的三氯化鐵溶液混合,常溫靜置10 min后于700 nm處測(cè)定吸光值,吸光值越高樣品的還原能力越強(qiáng)。

1.2.6.4 總抗氧化能力的測(cè)定 本實(shí)驗(yàn)使用磷鉬絡(luò)合法測(cè)定樣品的總抗氧化能力[13]。Mo(VI)在抗氧化劑存在的情況上可將其還原為Mo(V)產(chǎn)生在695 nm處具有最大吸收的綠色化合物(磷鉬化合物)。因此可通對(duì)其吸光度的差異來(lái)對(duì)比樣品的抗氧化性強(qiáng)弱,并與VC作比較。向具塞試管中加入1.0 mL 3.0 mol/L的H2SO4溶液、1.0 mL的0.14 mol/L的Na3PO4溶液和1 mL 0.02 mol/L的鉬酸銨溶液,充分混勻后分別加入1 mL不同濃度的番石榴葉、皮、果肉黃酮溶液,用蒸餾水定容至5 mL。加塞后于90 ℃下水浴90 min。取出冷卻于695 nm處測(cè)定吸光度。

1.3 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差,使用SPASS 18.0軟件進(jìn)行顯著性分析,Origin 8.0軟件繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 乙醇濃度對(duì)番石榴葉、皮中總黃酮提取量的影響 由圖1可知,當(dāng)乙醇濃度逐漸升高時(shí),番石榴葉及番石榴皮中的總黃酮提取量逐漸升高。當(dāng)乙醇濃度到達(dá)60%時(shí),番石榴葉及番石榴皮中總黃酮的提取量達(dá)到最高,分別為(72.41±2.34)、(39.49±0.53) mg/g。隨后乙醇濃度繼續(xù)增加,番石榴葉及番石榴皮中總黃酮提取量反而降低。這可能是由于乙醇濃度影響了黃酮類及其他醇溶性物質(zhì)的溶解性,在乙醇濃度為60%時(shí),黃酮類物質(zhì)的溶出量達(dá)到最大并達(dá)到飽和,當(dāng)乙醇濃度再增大時(shí),會(huì)使得其他醇溶物的溶出量也增加[14]。因此,番石榴葉、皮總黃酮的提取中乙醇提取分?jǐn)?shù)選擇60%。

圖1 乙醇濃度對(duì)黃酮提取量的影響

2.1.2 提取溫度對(duì)總黃酮提取量的影響 由圖2可知,番石榴葉中總黃酮的提取量隨著提取溫度的升高而升高,在溫度達(dá)到60 ℃時(shí),總黃酮提取量達(dá)到最大(112.11±1.39) mg/g。當(dāng)提取溫度繼續(xù)升高,番石榴葉中總黃酮提取量反而降低。這可能是由于溫度過(guò)高時(shí)黃酮因氧化被破壞[15]。因此,番石榴葉中總黃酮的提取溫度選擇60 ℃。同理分析可知,在提取溫度為50 ℃,番石榴皮中總黃酮提取量達(dá)到最大(46.38±0.21) mg/g。番石榴皮總黃酮提取溫度應(yīng)選擇50 ℃。

圖2 提取溫度對(duì)總黃酮提取量的影響

2.1.3 料液比對(duì)總黃酮提取量的影響 由圖3可知,隨著提取料液比的增加,番石榴葉中總黃酮的提取量也增加,當(dāng)料液比為1∶20 (g/mL)時(shí),番石榴葉總黃酮提取量達(dá)到最大(166.96±4.40) mg/g。再繼續(xù)加大提取料液比,番石榴葉中總黃酮的提取量降低。在料液比為一個(gè)合適范圍時(shí),隨料液比的增加會(huì)促進(jìn)黃酮物質(zhì)的溶出,而料液比過(guò)高時(shí),會(huì)加大其他雜質(zhì)的溶出,使得黃酮提取量降低[14,16]。因此,番石榴葉中總黃酮提取的料液比選擇1∶20 (g/mL)。同理,當(dāng)提取料液比為1∶10 (g/mL)時(shí),番石榴皮中總黃酮提取量達(dá)到最大(53.46±1.11) mg/g,因此番石榴皮總黃酮提取料液比應(yīng)選擇1∶10 (g/mL)。

圖3 料液比對(duì)總黃酮提取量的影響

2.1.4 浸提時(shí)間對(duì)總黃酮提取量的影響 由圖4可知,隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng),番石榴葉中的總黃酮溶出量也逐漸加大,當(dāng)提取時(shí)間在150 min時(shí),番石榴葉總黃酮含量達(dá)到最大(181.43±0.75) mg/g。再延長(zhǎng)提取時(shí)間,總黃酮含量則呈下降趨勢(shì)。這可能是由于當(dāng)提取時(shí)間過(guò)長(zhǎng)時(shí)會(huì)使黃酮類物質(zhì)分解或者使得其他雜質(zhì)溶出增多[17]。因此,番石榴葉總黃酮提取的時(shí)間選擇150 min。同理,當(dāng)提取時(shí)間為90 min時(shí),番石榴皮中總黃酮提取量達(dá)到最大(49.97±1.14) mg/g。番石榴皮中總黃酮提取時(shí)間應(yīng)選擇90 min。

圖4 提取時(shí)間對(duì)總黃酮提取量的影響

2.2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)單因素的結(jié)果,設(shè)計(jì)四因素三水平正交試驗(yàn),番石榴葉試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3,由R值分析可知,四因素對(duì)番石榴葉總黃酮提取量的影響大小為A>C>B>D,即乙醇濃度>料液比>提取溫度>提取時(shí)間。根據(jù)k值分析可得番石榴葉總黃酮最優(yōu)提取工藝組合A1B3C2D1。即乙醇濃度為50%,提取溫度為65 ℃,料液比為1∶20 (g/mL),提取時(shí)間為135 min。按以上理論最優(yōu)工藝進(jìn)行提取,番石榴葉總黃酮提取量為(188.66±0.23) mg/g,顯著高于正交表中9個(gè)組合的番石榴葉總黃酮提取量(p<0.05)。

番石榴皮總黃酮的提取結(jié)果見(jiàn)表4,四因素對(duì)番石榴皮總黃酮提取量影響大小為A>B>C>D。其最佳工藝組合為A2B1C1D3,即乙醇濃度為60%,提取溫度為45 ℃,料液比為1∶7 (g/mL),提取時(shí)間為105 min。按照以上理論最優(yōu)工藝進(jìn)行提取,番石榴皮總黃酮提取量為(48.03±0.16)mg/g,顯著高于正交表中9個(gè)組合的番石榴皮總黃酮提取量(p<0.05)。番石榴葉及番石榴皮總黃酮的提取工藝均得以驗(yàn)證。

表4 番石榴皮總黃酮正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 4 Orthogonal test design and result of total flavonoids from guava peel

因番石榴果肉與番石榴果皮連接較為緊密,且其生長(zhǎng)周期及所處環(huán)境等條件較番石榴葉來(lái)說(shuō)更為相近。所以在提取番石榴果肉黃酮時(shí)采用的是番石榴皮黃酮提取最佳工藝條件。其中番石榴果肉在此提取條件下的黃酮提取量10.65 mg/g,遠(yuǎn)低于番石榴葉及皮的黃酮提取量,因此本文對(duì)番石榴果肉黃酮的提取工藝不作探討。而用番石榴皮黃酮的最佳工藝條件進(jìn)行提取,目的是下一步探討番石榴葉、皮、果肉黃酮的體外抗氧化能力。

2.3 番石榴葉、皮、果肉中總黃酮的體外抗氧化活性評(píng)價(jià)

2.3.1 對(duì)ABTS+·的清除作用 番石榴葉、皮、果肉黃酮對(duì)ABTS+·的清除作用如圖5所示。隨著樣品濃度的增加,對(duì)ABTS+·清除率也隨之升高,在樣品濃度為0.05 mg/mL時(shí),番石榴葉、皮、果肉黃酮對(duì)ABTS+·清除率分別高達(dá)84.30%±0.12%、60.87%±0.26%、50.70%±0.12%。相同濃度下(0.02～0.05) mg/mL比較,三種黃酮樣品對(duì)ABTS+·清除能力均為番石榴葉黃酮>番石榴皮黃酮>番石榴果肉黃酮,并存在顯著性差異(p<0.05)。與陽(yáng)性對(duì)照VC相比,番石榴葉黃酮對(duì)ABTS+·的清除率顯著高于VC(p<0.05),而VC又顯著優(yōu)于番石榴皮及果肉黃酮。三種黃酮濃度與ABTS+·清除率呈現(xiàn)良好的劑量效應(yīng)關(guān)系。

圖5 番石榴葉、皮、果肉黃酮濃度對(duì)ABTS+·的清除作用

2.3.2 對(duì)·OH的清除作用 番石榴葉、皮、果肉黃酮對(duì)·OH的清除作用如圖6所示。在0.2～1.6 mg/mL范圍內(nèi),·OH清除率隨番石榴葉黃酮濃度的增加而增加,在其濃度為1.6 mg/mL時(shí),對(duì)·OH清除率為(76.55±0.05) mg/mL,隨濃度繼續(xù)增高,清除率未有顯著性增長(zhǎng)。當(dāng)番石榴皮、果肉黃酮濃度逐漸升高時(shí),·OH的清除率也隨之增高。且陽(yáng)性對(duì)照VC對(duì)·OH的清除能力顯著高于番石榴葉、皮、果肉黃酮(p<0.05)。四者間清除·OH能力排序?yàn)閂C>番石榴葉黃酮>番石榴皮黃酮>番石榴果肉黃酮。

圖6 番石榴葉、皮、果肉黃酮濃度對(duì)·OH清除作用的影響

2.3.3 鐵還原力分析 番石榴葉、皮、果肉黃酮的鐵還原力如圖7所示。在鐵還原力測(cè)定實(shí)驗(yàn)中,吸光值越大,代表鐵還原力越強(qiáng)[18-19]。隨著樣品濃度的增加,三種黃酮還原力逐漸提高,并呈現(xiàn)明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系。當(dāng)樣品濃度為0.06 mg/mL時(shí),番石榴葉、皮、果肉黃酮及VC樣品對(duì)應(yīng)的吸光值為1.33±0.01、0.86±0.02、0.79±0.03、1.69±0.03。三種黃酮樣品及VC還原力強(qiáng)弱排序?yàn)閂C>番石榴葉黃酮>番石榴皮黃酮>番石榴果肉黃酮,并且樣品間還原力強(qiáng)弱具有顯著性差異(p<0.05)。

圖7 番石榴葉、皮、果肉黃酮濃度對(duì)鐵還原力的影響

2.3.4 總抗氧化能力分析 番石榴葉、皮、果肉黃酮的總抗氧化能力如圖8所示。在總抗氧化能力測(cè)定實(shí)驗(yàn)中,吸光值越高,抗氧化力越強(qiáng)[20-21]。番石榴葉、皮、果肉黃酮隨濃度的增加抗氧化能力也逐漸增加。比較相同樣品濃度作用下的吸光值,可知三種黃酮的總抗氧化能力強(qiáng)弱順序?yàn)榉袢~黃酮>番石榴皮黃酮>番石榴果肉黃酮,且這三種黃酮的濃度均與抗氧化能力間存在良好的劑量效應(yīng)關(guān)系。在樣品濃度范圍為0.02～0.05 mg/mL時(shí),番石榴葉、皮黃酮的總抗氧化能力均優(yōu)于VC,番石榴果肉黃酮總抗氧化力略低于VC。當(dāng)樣品的濃度為0.06 mg/mL時(shí),VC組對(duì)應(yīng)吸光值高于番石榴皮黃酮組,與低濃度范圍(0.02～0.05) mg/mL所得規(guī)律不同,這可能與樣品濃度有關(guān),還需進(jìn)一步探究。

圖8 番石榴葉、皮、果肉黃酮濃度對(duì)總抗氧化能力對(duì)影響

番石榴葉、皮、果肉黃酮對(duì)ABTS+·及·OH均具有良好的清除作用,也具有較好的鐵還原能力及總抗氧化能力。綜合以上抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果,可知三種黃酮的體外抗氧化能力強(qiáng)弱為番石榴葉黃酮>番石榴皮黃酮>番石榴果肉黃酮?？赡苁怯捎诜袢~與番石榴果皮、果肉中黃酮組分及含量存在差異,從而影響了其抗氧化活性。而對(duì)于番石榴皮黃酮與番石榴果肉黃酮來(lái)說(shuō),盡管兩者采用相同的提取工藝,但原料本身黃酮組分可能存在不同,所以產(chǎn)生了抗氧化活性的差別。

3 結(jié)論

番石榴葉葉、皮為番石榴工業(yè)應(yīng)用中的副產(chǎn)物,具有對(duì)其總黃酮提取工藝優(yōu)化價(jià)值。因此本實(shí)驗(yàn)采用有機(jī)溶劑浸提法對(duì)珍珠番石榴(白肉)葉、皮黃酮的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化對(duì)比。番石榴葉黃酮最佳提取工藝為:乙醇濃度50%、提取溫度為65 ℃,料液比為1∶20 (g/mL),提取時(shí)間為135 min。番石榴皮黃酮最佳提取工藝為乙醇濃度60%、提取溫度為45 ℃,料液比為1∶7 (g/mL),提取時(shí)間為105 min。在最優(yōu)工藝條件下,番石榴葉、皮黃酮的提取量分別為(188.66±0.23)、(48.03±0.16) mg/g。通過(guò)ABTS+·清除實(shí)驗(yàn)、·OH基清除實(shí)驗(yàn)、鐵還原力的測(cè)定及總抗氧化能力的測(cè)定,發(fā)現(xiàn)三種黃酮樣品的體外抗氧化能力大小為番石榴葉黃酮>番石榴皮黃酮>番石榴果肉黃酮。且番石榴葉黃酮在ABTS+·清除能力及總抗氧化能力上顯著優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照VC。由此可見(jiàn),白肉番石榴黃酮可作為良好的抗氧化劑的天然來(lái)源。