吳 潔， 田亞麗， 伍宏宇， 張之

(新疆醫(yī)科大學(xué)1藥學(xué)院； 2臨床醫(yī)學(xué)16-4班, 烏魯木齊 830011)

酒精性肝病(alcoholic 1iver disease，ALD)是由于過量酒精攝入導(dǎo)致的肝臟損害及其一系列病變,初期表現(xiàn)為酒精性脂肪肝，后期可發(fā)展為酒精性肝炎、肝硬化甚至肝癌[1]。西藥治療酒精性肝病以對癥治療為主，療效甚微，不良反應(yīng)較多[2]，而中藥及中成藥類解酒藥一方面具有疏肝理氣、健脾消食、降低轉(zhuǎn)氨酶及加快乙醇代謝的功效，另一方面對酒精造成的肝細(xì)胞損傷還具有一定的修復(fù)作用，可有效減輕酒精代謝物對臟器的損害[3-4]。包葛顆粒劑由包爾胡特和葛根制成，包爾胡特(RhamnuscatharticaL.)為鼠李科鼠李屬植物新疆鼠李的果實，主要生長于新疆伊犁地區(qū)[5]。本課題組前期有研究表明[6-7]，包爾胡特提取物對高脂血癥大鼠具有降血脂作用，能夠增強(qiáng)機(jī)體自由基清除能力和抗脂質(zhì)過氧化能力，從而改善氧化應(yīng)激反應(yīng)對肝臟的損傷，保護(hù)肝細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能，發(fā)揮對急性酒精性肝損傷的治療作用。葛根(Puerarialobata)為豆科葛屬多年生的落葉藤本植物甘葛或野葛藤的干燥根，在我國大部地區(qū)均有生長，主產(chǎn)于河南、湖南、浙江、四川等地，具有一定的解酒護(hù)肝功效[8-10]。已有研究表明，葛根素可以預(yù)防大鼠急性酒精性肝損傷[11]，對肝臟具有保護(hù)作用[12]。本研究采用小鼠急性酒精性肝損傷模型，研究包葛顆粒劑對小鼠醉酒的預(yù)防作用和對急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 動物取雄性昆明種小鼠40 只，6～8周齡，清潔級，體質(zhì)量(20±2)g，購買于新疆醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心。飼養(yǎng)于溫度22～25℃、濕度50%～80%環(huán)境，自由進(jìn)食。

1.2 儀器CF-1型勻漿機(jī)(北京格瑞德曼儀器設(shè)備有限公司)，MULTIFUGE X3R型離心機(jī)(烏魯木齊鵬程達(dá)商貿(mào)有限公司)，1510型酶標(biāo)儀(賽默飛世爾上海儀器有限公司)。

1.3 試藥包葛顆粒劑自制，水飛薊賓膠囊(天津天士力圣特制藥有限公司，批號：600709125)，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine aminotransferase，ALT，南京建成生物工程研究所，批號：20180630),天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate aminotransferase，AST，南京建成生物工程研究所，批號：20180630)；紅星二鍋頭白酒(北京紅星二鍋頭股份有限公司，批號：02-2AQ8-75)。

1.4 分組和給藥方法[13]將40只小鼠隨機(jī)分為包葛顆粒劑低、高劑量組(2.4、4.8 g/kg體質(zhì)量)，陽性對照組(水飛薊賓47 mg/kg體質(zhì)量)，酒精肝損傷模型組(蒸餾水 0.1 mL/10 g體質(zhì)量)和空白對照組(蒸餾水 0.1 mL/10 g體質(zhì)量)，每組8只。各組小鼠均灌胃相應(yīng)藥物，給藥2 h后，除空白對照組灌胃蒸餾水，其他各組小鼠灌胃白酒(紅星二鍋頭12 mL/kg體質(zhì)量)，每天1次，連續(xù)7 d，制備急性酒精性肝損傷模型。

1.5 觀察指標(biāo)觀察各實驗組小鼠灌酒后從醉酒至醒酒的狀況，分為醉酒潛伏期、醉酒期和醉酒睡眠期。醉酒潛伏期：從灌酒后小鼠出現(xiàn)爬行不穩(wěn)至睡著的時間，小鼠翻正反射消失(以將小鼠背部朝下輕放在光滑的桌面上，保持背部向下的姿勢30 s以上)，翻正反射消失為醉酒期開始，以翻正反射出現(xiàn)為醉酒期結(jié)束(醒酒時間)。醉酒期：翻正反射消失和翻正反射出現(xiàn)之間的時間。醉酒睡眠期：從小鼠睡著到睜眼醒來的時間。

1.6 指標(biāo)測定

1.6.1 小鼠處理及肝指數(shù)計算 第7天禁食不禁水，稱取體質(zhì)量，給酒6 h后小鼠麻醉后頸椎脫臼處死，取肝臟，在生理鹽水中進(jìn)行洗滌并用濾紙吸干多余水分，稱取肝重，計算肝指數(shù)/%=肝質(zhì)量(g)/體質(zhì)量(g)×100%。

1.6.2 肝功指標(biāo)檢測 取小鼠肝組織，制成10%肝勻漿，3 000 r/min離心10 min后，取上清液，按試劑盒說明書方法測定小鼠肝組織ALT、AST含量。

1.6.3 肝臟組織病理形態(tài)學(xué)觀察 取小鼠肝臟用4%多聚甲醛固定，石蠟包埋、切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察各組小鼠肝臟病理組織學(xué)變化并拍照。

2 結(jié)果

2.1 包葛顆粒劑對急性酒精性肝損傷小鼠醉酒指標(biāo)的影響與酒精肝損傷模型組比較，包葛顆粒劑低、高劑量組小鼠醉酒潛伏期延長，醉酒期和醉酒睡眠期縮短,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；陽性對照組小鼠醉酒睡眠期縮短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，醉酒潛伏期延長，醉酒期縮短，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。與陽性對照組比較，包葛顆粒劑低劑量組小鼠醉酒潛伏期延長，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，醉酒睡眠期和醉酒期縮短，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；包葛顆粒劑高劑量組小鼠醉酒潛伏期延長，醉酒睡眠期縮短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，醉酒期縮短，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 各組小鼠醉酒實驗結(jié)果比較

注：與酒精肝損傷模型組比較，*P<0.05，**P<0.01； 與陽性對照組比較，△P<0.05，△△P< 0.01。

2.2 包葛顆粒劑對急性酒精性肝損傷小鼠體質(zhì)量、肝重、肝指數(shù)的影響與空白對照組比較，酒精肝損傷模型組小鼠體質(zhì)量降低，肝指數(shù)升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。與酒精肝損傷模型組比較，包葛顆粒劑低、高劑量組小鼠體質(zhì)量升高，肝指數(shù)降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；陽性對照組小鼠肝指數(shù)降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，體質(zhì)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。與陽性對照組比較，包葛顆粒劑高劑量組肝指數(shù)下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 各組小鼠體質(zhì)量、肝重、肝指數(shù)比較

注：與空白對照組比較，#P<0.05，##P<0.01； 與酒精肝損傷模型組比較，*P<0.05，**P<0.01； 與陽性對照組比較，△P<0.05。

2.3 包葛顆粒劑對急性酒精性肝損傷小鼠肝組織ALT、AST水平的影響與空白對照組比較，酒精肝損傷模型組小鼠ALT、AST含量升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；與酒精肝損傷模型組比較，包葛顆粒劑低、高劑量組ALT、AST含量降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；陽性對照組ALT、AST含量降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。與陽性對照組比較，包葛顆粒劑高劑量組ALT含量降低，AST含量降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 各組小鼠肝組織ALT、AST水平比較

注：與空白對照組比較，##P<0.01； 與酒精肝損傷模型組比較，**P<0.01； 與陽性對照組比較，△P<0.05，△△P<0.01。

2.4 包葛顆粒劑對急性酒精性肝損傷小鼠肝臟病理組織學(xué)的影響空白對照組小鼠肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常；酒精肝損傷模型組小鼠肝組織有明顯變化：肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂，水腫，脂肪變性明顯，胞質(zhì)疏松不緊密，可見非常多大小不一的脂滴；包葛顆粒劑低劑量組肝組織結(jié)構(gòu)輕度紊亂，有少量小脂滴，包葛顆粒劑高劑量組肝組織結(jié)構(gòu)有一定紊亂，無脂滴出現(xiàn)；陽性對照組肝組織結(jié)構(gòu)紊亂明顯，有一定數(shù)量脂滴；與陽性對照組比較，包葛顆粒劑低、高劑量組肝組織結(jié)構(gòu)和脂肪病變有一定程度減輕，見圖1。

a空白對照組

b酒精肝損傷模型組

c陽性對照組

d 包葛顆粒劑低劑量組

e 包葛顆粒劑高劑量組

圖1 各組小鼠肝組織病理形態(tài)顯微圖(× 200倍)

3 討論

本實驗結(jié)果表明，包葛顆粒劑預(yù)防給藥對小鼠具有防醉作用，能夠有效延長小鼠醉酒潛伏期時間，縮短醉酒期和睡眠期時間，隨著包葛顆粒劑給藥濃度的升高，其醒酒功能也相對提高。ALT和AST是存在于肝臟中重要的轉(zhuǎn)氨酶，肝細(xì)胞無論損傷還是壞死，都會使這2種轉(zhuǎn)氨酶的活性升高，因此是臨床上顯示肝臟受損的指標(biāo)[14-15]。本實驗發(fā)現(xiàn)酒精肝損傷模型組小鼠肝指數(shù)增大，肝組織ALT和AST水平升高，表明小鼠肝細(xì)胞嚴(yán)重?fù)p傷，而包葛顆粒劑低、高劑量對急性酒精性肝損傷小鼠的肝損傷均有一定改善作用，使ALT、AST水平趨向正常。病理結(jié)果顯示，酒精肝損傷模型組小鼠肝細(xì)胞水腫，脂肪變性明顯，包葛顆粒劑低、高劑量組肝細(xì)胞腫脹和脂肪變性較酒精肝損傷模型組明顯改善。病理切片結(jié)果和各實驗指標(biāo)結(jié)果一致，表明包葛顆粒劑可以減輕肝細(xì)胞損傷，具有保護(hù)肝臟功能的作用。與陽性對照組飛薊賓比較，包葛顆粒劑改善小鼠肝細(xì)胞損傷、防醉醒酒作用更優(yōu)，但包葛顆粒劑對酒精性肝損傷的保護(hù)機(jī)制仍不清楚，對其藥效機(jī)制有待進(jìn)一步研究。