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        利用色譜法測定食品中可溶性磷酸鹽含量

        2019-06-21 01:27:50錢娟娟
        實驗與分析 2019年1期
        關鍵詞:磷酸二氫鉀標準偏差磷酸鹽

        文/錢娟娟

        采用色譜法測定可溶性磷酸鹽含量 // 由聚苯乙烯二乙烯苯樹脂填裝而成的Aminex HPLC柱,通過離子調節(jié)分配層析技術,在特定的色譜條件下,將可溶性磷酸鹽以PO43-形式被檢測出來,并用外標法定量。

        磷酸鹽常被作為重要的食品配料和功能添加劑,然而膳食中磷酸鹽食量過多,會降低人體對鈣的吸收,造成缺鈣。同時,磷酸鹽又是引起水體富營養(yǎng)化的關鍵因素之一,是評價水體水質的重要指標。所以對于可溶性磷酸鹽的測定顯得尤為重要。目前實驗室廣泛采用的測定磷酸鹽的方法——鉬銻抗分光光度法,雖然操作簡單,但其絡合物穩(wěn)定時間短,檢測限高,靈敏度低,不利于樣品中微量磷的測定。

        為了提高檢測靈敏度,降低檢測限,本方法采用由聚苯乙烯二乙烯苯樹脂填裝而成的Aminex HPLC 柱,通過離子調節(jié)分配層析技術(包括離子排阻、離子交換、正相和反相分配、分子量排阻和配體交換),在特定的色譜條件下,將可溶性磷酸鹽(包括H2PO4-、HPO42-、PO43-)以 PO43-形式被檢測出來,并用外標法定量。

        表1 儀器分析條件。

        表2 標準曲線的七個梯度濃度配制方法。

        實驗部分

        儀器與試劑

        1.儀器

        高效液相色譜儀,分析條件,如表1所示。

        2.試劑

        磷酸二氫鉀:GB/T 1274-2011

        高純水: MILLI-Q超純水器制備

        實驗步驟

        1.制作標準曲線

        稱取0.0266g分析純磷酸二氫鉀(99%),用適量水溶解后轉移至100ml容量瓶中,定容后混勻,稱為磷酸二氫鉀標準母液。取7個1.5ml的離心管分別編號為 1、2、3、4、5、6、7,按表2所示,將磷酸二氫鉀標準母液稀釋成7個濃度梯度。

        2.繪制標準曲線

        將上述標準系列置于離心機中離心,從低至高濃度依次進樣,進樣體積為20ul,得到不同濃度磷酸鹽的色譜圖,如圖1所示。記錄7個梯度的磷酸鹽濃度(以PO43-計,g/L)對應的峰面積數(shù)值,如表3所示,以磷酸鹽的濃度(以PO43-計,g/L)為橫坐標,峰面積為縱坐標,繪制標準曲線,如圖2所示。

        圖1 磷酸根的色譜出峰圖。

        圖2 利用七個濃度梯度繪制成磷酸根含量的標準曲線。

        表3 七個濃度梯度對應的色譜峰面積。

        表4 10組加標回收率數(shù)據(jù)本實驗測定的加標回收率。

        表5 6組相對標準偏差數(shù)據(jù)本實驗測定的相對標準偏差。

        標準曲線的相關系數(shù)R2達到0.9994,符合線性要求,從而得到磷酸鹽濃度(以PO43-計,g/L)的計算公式如下:

        Y = aX + b

        式中:

        Y —— 峰面積

        X ——磷酸鹽的濃度(以PO43-計,g/L)

        a —— 119426

        b —— 0

        3.樣品測定

        稱量一定量的樣品,加高純水溶解,在100ml容量瓶中定容,混勻。(控制稀釋后樣品中的PO43-濃度不超過標準曲線的最大測量范圍)將稀釋后的樣品離心,取上清液,進色譜分析得到結果。

        結果與討論

        1.準確度驗證

        向10個不同的樣品中添加一定量的標準樣品,色譜分析得到結果,計算加標回收率,回收率為96.67%~100.67%,平均值為98.67%,都在可接受的范圍內,證明該實驗方法符合要求的準確度,如表4所示。

        2.精密度驗證

        6個樣品分別重復進樣6次,色譜分析得到結果,計算相對標準偏差,六組相對標準偏差數(shù)據(jù)本實驗測定的相對標準偏差為0.1%~0.34%,平均值為0.19%,證明該實驗方法符合要求的精密度,如表5所示。

        結論

        本實驗利用色譜儀靈敏度高、檢測限低、精密度高的特點,建立了一種色譜法測定食品中可溶性磷酸鹽,操作簡單方便、用時短,并且通過準確度和精確度實驗,驗證了該方法的可行性。 ■

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