文/錢娟娟

采用色譜法測定可溶性磷酸鹽含量 // 由聚苯乙烯二乙烯苯樹脂填裝而成的Aminex HPLC柱，通過離子調節(jié)分配層析技術，在特定的色譜條件下，將可溶性磷酸鹽以PO43-形式被檢測出來，并用外標法定量。

磷酸鹽常被作為重要的食品配料和功能添加劑，然而膳食中磷酸鹽食量過多，會降低人體對鈣的吸收，造成缺鈣。同時，磷酸鹽又是引起水體富營養(yǎng)化的關鍵因素之一，是評價水體水質的重要指標。所以對于可溶性磷酸鹽的測定顯得尤為重要。目前實驗室廣泛采用的測定磷酸鹽的方法——鉬銻抗分光光度法，雖然操作簡單，但其絡合物穩(wěn)定時間短，檢測限高，靈敏度低，不利于樣品中微量磷的測定。

為了提高檢測靈敏度，降低檢測限，本方法采用由聚苯乙烯二乙烯苯樹脂填裝而成的Aminex HPLC 柱，通過離子調節(jié)分配層析技術（包括離子排阻、離子交換、正相和反相分配、分子量排阻和配體交換），在特定的色譜條件下，將可溶性磷酸鹽（包括H2PO4-、HPO42-、PO43-）以 PO43-形式被檢測出來，并用外標法定量。

表1 儀器分析條件。

表2 標準曲線的七個梯度濃度配制方法。

實驗部分

儀器與試劑

1.儀器

高效液相色譜儀,分析條件，如表1所示。

2.試劑

磷酸二氫鉀：GB/T 1274-2011

高純水： MILLI-Q超純水器制備

實驗步驟

1.制作標準曲線

稱取0.0266g分析純磷酸二氫鉀（99%），用適量水溶解后轉移至100ml容量瓶中，定容后混勻，稱為磷酸二氫鉀標準母液。取7個1.5ml的離心管分別編號為 1、2、3、4、5、6、7，按表2所示，將磷酸二氫鉀標準母液稀釋成7個濃度梯度。

2.繪制標準曲線

將上述標準系列置于離心機中離心，從低至高濃度依次進樣，進樣體積為20ul，得到不同濃度磷酸鹽的色譜圖，如圖1所示。記錄7個梯度的磷酸鹽濃度（以PO43-計，g/L）對應的峰面積數(shù)值，如表3所示，以磷酸鹽的濃度（以PO43-計，g/L）為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，如圖2所示。

圖1 磷酸根的色譜出峰圖。

圖2 利用七個濃度梯度繪制成磷酸根含量的標準曲線。

表3 七個濃度梯度對應的色譜峰面積。

表4 10組加標回收率數(shù)據(jù)本實驗測定的加標回收率。

表5 6組相對標準偏差數(shù)據(jù)本實驗測定的相對標準偏差。

標準曲線的相關系數(shù)R2達到0.9994，符合線性要求，從而得到磷酸鹽濃度（以PO43-計，g/L）的計算公式如下：

Y = aX + b

式中：

Y —— 峰面積

X ——磷酸鹽的濃度（以PO43-計，g/L）

a —— 119426

b —— 0

3.樣品測定

稱量一定量的樣品，加高純水溶解，在100ml容量瓶中定容，混勻。（控制稀釋后樣品中的PO43-濃度不超過標準曲線的最大測量范圍）將稀釋后的樣品離心，取上清液，進色譜分析得到結果。

結果與討論

1.準確度驗證

向10個不同的樣品中添加一定量的標準樣品，色譜分析得到結果，計算加標回收率，回收率為96.67%～100.67%，平均值為98.67%，都在可接受的范圍內，證明該實驗方法符合要求的準確度，如表4所示。

2.精密度驗證

6個樣品分別重復進樣6次，色譜分析得到結果，計算相對標準偏差，六組相對標準偏差數(shù)據(jù)本實驗測定的相對標準偏差為0.1%～0.34%，平均值為0.19%，證明該實驗方法符合要求的精密度，如表5所示。

結論

本實驗利用色譜儀靈敏度高、檢測限低、精密度高的特點，建立了一種色譜法測定食品中可溶性磷酸鹽，操作簡單方便、用時短，并且通過準確度和精確度實驗，驗證了該方法的可行性。 ■