許文愷　翁偉妍　張宏濤

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纈霉威高效液相色譜分析方法試驗(yàn)

許文愷翁偉妍張宏濤

（廣東中科英海科技有限公司 廣東佛山 528000）

文章針對(duì)環(huán)境水體中纈霉威，采用高效液相色譜對(duì)其進(jìn)行定性定量分析。以0.01%磷酸溶液+乙腈為流動(dòng)相，使用4.6 mm×150 mm、粒徑為5μm的依利特HypersilODS2色譜柱，以及二極管陣列檢測(cè)器（PDA檢測(cè)器），在215nm波長(zhǎng)下對(duì)纈霉威進(jìn)行分離和定量分析。結(jié)果表明：該分析方法的線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)為0.9999；標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.224~1.58 %；平均回收率為99.9~106 %。

纈霉威；高效液相色譜；分析

纈霉威中文別名：異丙菌胺、丙森辛、丙森鋅，英文名稱(chēng)：Iprovalicarb，CAS號(hào)：140923 -17 -7，分子式：C18H28N2O3。由拜耳公司最先研發(fā)的一種氨基酸酯類(lèi)衍生物，具有獨(dú)特的全新仿生結(jié)構(gòu)，其作用機(jī)理不同于其他防治卵菌綱的殺菌劑。作用機(jī)理：作用于真菌細(xì)胞壁與蛋白質(zhì)的合成，從而抑制孢子的侵染和萌發(fā)，同時(shí)抑制菌絲體的生長(zhǎng)，致其變形、死亡。此外，作為一種具有生物活性的殺菌劑，不僅在霜霉科、疫霉屬真菌導(dǎo)致的病害上有突出的治療及鏟除效果，而且對(duì)促進(jìn)植株生長(zhǎng)也有良好的作用。

隨著新型農(nóng)藥的發(fā)展和使用，對(duì)環(huán)境毒理分析的要求也越來(lái)越嚴(yán)格了，特別是對(duì)水生生物的影響，除了在試驗(yàn)周期內(nèi)觀察其生理死亡狀態(tài)，還需要測(cè)定其水體中農(nóng)藥的含量。故而需要便捷、高效的分析方法對(duì)農(nóng)藥成分進(jìn)行定性定量分析。目前，針對(duì)水體中纈霉威的定性定量分析的文獻(xiàn)中，還沒(méi)有單獨(dú)使用高效液相色譜進(jìn)行測(cè)定，因此有需要介紹此方法，以供檢測(cè)參考。

1 試驗(yàn)部分

1.1 試劑及設(shè)備

1.1.1 試劑和溶液

標(biāo)準(zhǔn)品：纈霉威（標(biāo)準(zhǔn)值：98 %固體粉末，常溫保存）。

供試品：95 %纈霉威原藥（白色固體粉末，常溫貯存）。

溶劑溶液：乙腈（HPLC），乙腈水溶液（V乙腈∶V超純水=1∶1），0.01 %磷酸溶液，曝氣自來(lái)水。

1.1.2 儀器設(shè)備

Alliancee2695 型高效液相色譜儀。

檢測(cè)器：PDA檢測(cè)器（二極管陣列檢測(cè)器）。

色譜柱：依利特HypersilODS2 （4.6 mm×150 mm），粒徑：5 μm。

1.2 色譜條件

柱溫箱溫度：35.0 ℃，流速：1.000 mL/min，進(jìn)樣量：20.0 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)：215 nm。

流動(dòng)相：0.01 %磷酸溶液：乙腈，梯度見(jiàn)表1。

表1 　梯度洗脫

1.3 工作溶液設(shè)計(jì)及配制

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)液相分析方法的預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，將測(cè)定纈霉威的線(xiàn)性范圍設(shè)計(jì)為：0.0500 mg/L，0.100 mg/L，0.200 mg/L，0.500 mg /L，1.00 mg/L，2.00 mg/L，5.00 mg/L和10.0 mg/L。每個(gè)濃度采集3個(gè)針。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液

標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液配制：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.01546 g標(biāo)準(zhǔn)品（純度98 %）于10 mL容量瓶中，加入少量乙腈溶解，最后用乙腈定容至標(biāo)線(xiàn)，搖勻得到標(biāo)準(zhǔn)貯備液，其濃度為1.52 ×103mg/L。[濃度C1（mg/L）=標(biāo)準(zhǔn)品實(shí)際質(zhì)量(g)×純度×100000 ]。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

用乙腈水溶液（V乙腈∶V超純水=1∶1）配制濃度分別為0.0500 mg/L，0.100 mg/L，0.200 mg/L，0.500 mg /L，1.00 mg/L，2.00 mg/L，5.00 mg/L和10.0 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)溶液。

1.3.4 供試品試驗(yàn)溶液

供試品溶液配制：稱(chēng)0.01012 g供試品于10 mL容量瓶中，準(zhǔn)確記錄實(shí)際稱(chēng)樣量，加入2.00 mL超純水分散后，冷卻至室溫后，用乙腈定容至標(biāo)線(xiàn)，搖勻得到供試品貯備液，其濃度為961 mg/L。取0.1042 mL供試品貯備液于10 mL容量瓶中，用乙腈水溶液（V乙腈∶V超純水=1∶1）定容至標(biāo)線(xiàn)，搖勻得到供試品試驗(yàn)溶液，濃度為10.0 mg/L。[C2（mg/L）=供試品實(shí)際質(zhì)量(g)×待測(cè)成分含量×100000 ]。

1.4 定性定量及添加回收測(cè)定

1.4.1 專(zhuān)屬性試驗(yàn)

取空白溶劑（乙腈水溶液（V乙腈∶V超純水=1∶1））、標(biāo)準(zhǔn)溶液（10.0mg/L）和供試品試驗(yàn)溶液（10.0 mg/L）經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾后進(jìn)樣測(cè)試，各采集1針。

1.4.2 添加回收與重復(fù)性試驗(yàn)、檢出限試驗(yàn)、定量限（靈敏度）試驗(yàn)設(shè)計(jì)

曝氣自來(lái)水添加回收與重復(fù)性試驗(yàn)：設(shè)計(jì)1個(gè)空白對(duì)照組和2檔添加濃度。每檔濃度5個(gè)重復(fù)，基質(zhì)為曝氣自來(lái)水，詳見(jiàn)表2。對(duì)空白對(duì)照組與2檔試驗(yàn)濃度組一共11 個(gè)前處理后得到的樣品各采集1針。

表2　 添加回收試驗(yàn)分組及濃度

注：加入體積（mL）=理論添加濃度×基質(zhì)體積/標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，添加量（μg）=標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度×加入體積。

前處理：取5.00 mL試驗(yàn)溶液于10 mL容量瓶中，用乙腈定容至標(biāo)線(xiàn)，搖勻后過(guò)0.22 μm濾膜過(guò)濾，上機(jī)待測(cè)。

檢出限：用濃度為0.0500 mg/L（線(xiàn)性下限濃度）的標(biāo)準(zhǔn)溶液圖譜信噪比（S/N）和LOQ水平的平均回收率（AR）計(jì)算檢出限LOD。(LOD=0.0500 ×3/S/N/AR)

定量限（在曝氣自來(lái)水添加基質(zhì)中）：以添加回收試驗(yàn)中，待測(cè)物在基質(zhì)中濃度的最低水平為定量限。

2 分析結(jié)果

2.1 專(zhuān)屬性

空白溶劑沒(méi)有色譜峰出現(xiàn)，標(biāo)準(zhǔn)溶液與供試品試驗(yàn)溶液有相同的色譜峰出現(xiàn)。在供試品試驗(yàn)溶液的色譜圖中，主峰與最相鄰的雜峰之間的分離度R為4.26。

圖1 　纈霉威專(zhuān)屬性圖譜

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)1

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)1：0.0500 mg/L～1.00 mg/L，Y=3.314 ×104X+1.678 ×102，r=0.9999 。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)2

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)2：0.500 mg/L～10.0 mg/L，Y=3.356 ×104X+1.729 ×102，r=0.9999 。

2.3 添加回收與重復(fù)性（曝氣自來(lái)水中添加回收試驗(yàn)）

添加濃度0.200 mg/L回收率范圍：105 ~109 %，平均回收率：106 %，RSD為1.58 %；

添加濃度19.0 mg/L回收率范圍：99.5 ~100 %，平均回收率：99.9%，RSD為0.224 %。

2.4 檢出限（LOD）

根據(jù)以上高效液相色譜分析方法測(cè)得，0.0500 mg/L（線(xiàn)性下限濃度）的標(biāo)準(zhǔn)溶液圖譜信噪比（S/N）為10.3；

根據(jù)公式計(jì)算：LOD=0.0500×3/S/N/AR=0.0500×3/10.3/ 106%=0.0137，即該添加回收方法的檢出限（LOD）為0.0137。

2.5 定量限（LOQ）

根據(jù)添加回收試驗(yàn)得，該前處理方法的定量限（LOQ）為0.200 mg/L。

3 小結(jié)

針對(duì)水中纈霉威的測(cè)定，該高效液相色譜分析方法，對(duì)比氣相-質(zhì)譜聯(lián)用儀、液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀均有更優(yōu)異的檢測(cè)優(yōu)勢(shì)。首先使用的試劑常見(jiàn)、廉價(jià)，前處理操作簡(jiǎn)單，分離效果好、測(cè)定簡(jiǎn)便快速、準(zhǔn)確度高、相關(guān)性良好，分析測(cè)定方法的檢出限及定量限符合環(huán)境毒理（水生生物）分析范圍；其次高效液相色譜儀的使用維護(hù)成本較低，普通實(shí)驗(yàn)室均可具備檢測(cè)條件，適用性高，可以作為檢測(cè)機(jī)構(gòu)以及藥企自檢的參考方法。

[1]土壤和水中農(nóng)藥分析建立和驗(yàn)證指南.(征求意見(jiàn)稿)?

[2]農(nóng)藥分析手冊(cè)[M].化學(xué)工業(yè)出版社,2012.

[3]李振.纈霉威在葡萄和土壤中的液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法及其在葡萄上的安全合理使用準(zhǔn)則研究[D].浙江大學(xué),2010.

[4]姜宜飛,于榮,孫占岳.纈霉威原藥毛細(xì)管氣相色譜分析方法研究[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理,2013,34(10).

[5]劉壘.纈霉威的合成工藝研究[D].南京師范大學(xué),2014.

10.3969/j.issn.2095-1205.2019.04.31

許文愷(1991- )女，廣東佛山人，助理工程師，主要從事環(huán)境毒理檢測(cè)及化學(xué)分析工作；張宏濤(1978- )，男，吉林雙遼人，工程師，研究方向：毒理學(xué)。

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2095-1205(2019)04-55-02