李芹 張蕾 王亞坤 田利遠(yuǎn)

(河北醫(yī)科大學(xué)附屬河北省兒童醫(yī)院呼吸科，河北 石家莊 050031)

肺炎支原體肺炎(mycoplasmal pneumouniae pneumounia，MPP)是小兒常見(jiàn)的大葉性肺炎，可并發(fā)多系統(tǒng)、多器官功能損害。既往研究，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，但近年來(lái)免疫機(jī)制成為目前醫(yī)學(xué)界廣泛關(guān)注的熱門(mén)課題。國(guó)內(nèi)、國(guó)外學(xué)者均提出可能由于CD4+T輔助細(xì)胞或CD8+T抑制細(xì)胞之間的紊亂引起了機(jī)體的免疫抑制[1-2]。本實(shí)驗(yàn)就CD4+T輔助細(xì)胞及其細(xì)胞因子進(jìn)一步探討MPP的免疫機(jī)制，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年4月至2017年10月在我院呼吸科住院期間確診為MPP患兒30例為實(shí)驗(yàn)組，其中男17例，女13例，平均年齡(5.6±2.9)歲；細(xì)菌性肺炎患兒30例為普通組，男16例，女14例，平均年齡(6.1±3.5)歲；肺炎支原體肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)參照第8版《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》。選取同期我院健康體檢兒童30名為對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組、普通組與對(duì)照組患兒年齡及性別差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0．05)。

1.2 方法 所有患兒在治療前及治療后(加用甲潑尼龍靜滴5 d)取靜脈血2 mL；于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管，標(biāo)本靜置20 min后，以3 000 r/min離心5 min，取上清液均置-80 ℃冰箱保存待檢；采用梯度離心分離單個(gè)核細(xì)胞，采用貝克曼流式細(xì)胞儀及配套試劑盒檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群(CD4+、CD8+及CD4+/CD8+)；通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血清INF-γ/IL-4、INF-γ、IL-4、IgE含量。ELISA試劑盒購(gòu)自上海西唐生物科技有限公司。

2 結(jié) 果

2.1 T淋巴細(xì)胞亞群(CD4+、CD8+及CD4+/CD8+)水平 與治療前比較，實(shí)驗(yàn)組治療后血清CD4+/CD8+、CD4+水平均升高，CD8+水平下降，統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，差異顯著(P<0.05)；治療前，實(shí)驗(yàn)組CD4+/CD8+、CD4+水平均低于對(duì)照組及普通組，CD8+水平高于對(duì)照組及普通組，統(tǒng)計(jì)學(xué)比較差異顯著(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組患兒血清CD4+/CD8+、CD4+和CD8+水平比較

注：與治療前比較：*P<0.05；與對(duì)照組、普通組比較：△P<0.05；

2.2 血清INF-γ/IL-4、INF-γ、IL-4和IgE含量 治療前，實(shí)驗(yàn)組、普通組患兒血清INF-γ 、IL-4水平明顯增高，分別與對(duì)照組比較，差異顯著(P<0.05)，INF-γ/IL-4水平下降，與對(duì)照組比較差異顯著(P<0.05)；治療前，實(shí)驗(yàn)組INF-γ 、IL-4水平較普通組升高，INF-γ/IL-4水平下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；治療后實(shí)驗(yàn)組血清INF-γ 、IL-4水平較治療前均下降，INF-γ/IL-4水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。治療前，實(shí)驗(yàn)組血清IgE(380.5±40.6 u/mL)水平明顯升高，與對(duì)照組(75.8±18.3 u/mL)、普通組(76.5±19.8 u/mL)比較，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(P<0.05)，治療后降至正常水平，與對(duì)照組及普通組無(wú)差異(P>0.05)。

表2 各組患兒血清INF-γ/IL-4、INF-γ和IL-4水平比較

注：治療前，與對(duì)照組比較：aP<0.05，與普通組比較：bP<0.05；實(shí)驗(yàn)組治療后與治療前比較cP<0.05。

3 討 論

目前兒童肺炎支原體肺炎最熱議的發(fā)病機(jī)制是免疫機(jī)制，主要包括免疫抑制和自身免疫這兩種學(xué)說(shuō)。在MPP患兒的免疫反應(yīng)中，肺炎支原體侵入宿主后可誘導(dǎo)T、B淋巴細(xì)胞增殖，破壞二者亞群的比例，造成淋巴細(xì)胞的多克隆活化，引起Th2型細(xì)胞免疫占主要優(yōu)勢(shì)，而Th1型細(xì)胞免疫則會(huì)受抑制，機(jī)體無(wú)法發(fā)揮正常的免疫功能，進(jìn)一步引起機(jī)體免疫抑制[2]。臨床工作中發(fā)現(xiàn)，對(duì)于存在嚴(yán)重合并癥的MPP患兒，應(yīng)用糖皮質(zhì)激素對(duì)控制病情、縮短療程、改善預(yù)后有重要作用，說(shuō)明通過(guò)調(diào)節(jié)免疫可取得良好療效[3]。

T細(xì)胞作為機(jī)體細(xì)胞免疫的主要參與者，在機(jī)體感染后可成熟分化為不同亞群，繼而分泌細(xì)胞因子來(lái)影響疾病發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后[4]。根據(jù)表面標(biāo)志可將成熟T淋巴細(xì)胞分為CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞2個(gè)主要亞群，分別行使不同的功能。CD4+T細(xì)胞主要為調(diào)節(jié)T細(xì)胞，包括Th1、Th2等，能促進(jìn)其他免疫細(xì)胞包括B細(xì)胞、T細(xì)胞等增殖分化，活化后的T細(xì)胞還可分泌多種細(xì)胞因子參與調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。CD8+T細(xì)胞主要為殺傷性T細(xì)胞，可直接通過(guò)識(shí)別細(xì)胞表面MHC-I類(lèi)分子直接殺傷靶細(xì)胞，發(fā)揮其免疫效應(yīng)。研究顯示，難治性肺炎支原體肺炎患兒普遍存在機(jī)體免疫功能的紊亂，表現(xiàn)為細(xì)胞免疫功能下降，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平明顯降低，CD8+水平升高[5]。國(guó)外研究也表明，MPP患兒外周血中CD4+T和CD8+T比例失衡，機(jī)體細(xì)胞免疫功能失調(diào)，可能與肺炎支原體感染相關(guān)[6]。本實(shí)驗(yàn)得到相同的結(jié)果，治療前實(shí)驗(yàn)組CD4+/CD8+、CD4+水平明顯下降，CD8+水平上升，給予甲潑尼龍治療后血清CD4+/CD8+、CD4+水平升高，CD8+水平下降至正常，進(jìn)一步提示肺炎支原體感染后存在CD4+/CD8+比值失衡，而糖皮質(zhì)激素可能發(fā)揮了免疫抑制作用。據(jù)報(bào)道指出，糖皮質(zhì)激素可以通過(guò)細(xì)胞膜，與細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的糖皮質(zhì)激素受體結(jié)合，形成激素-激素受體復(fù)合體，進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，通過(guò)抑制趨化因子、細(xì)胞因子、細(xì)胞黏附因子及其這些因子受體表達(dá)等多種途徑，進(jìn)一步調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞功能而起到治療作用[7]。

CD4+T細(xì)胞根據(jù)其產(chǎn)生的細(xì)胞因子和生物學(xué)效應(yīng)分為兩種，即Th1型與Th2 型。研究發(fā)現(xiàn)，MPP患兒存在Th1/Th2比例失衡，其中以Th2細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)的免疫失衡在MPP致病過(guò)程中起主要作用，而Th1細(xì)胞則是在抵抗MP感染和抑制炎癥反應(yīng)中發(fā)揮作用[8-10]。Th1細(xì)胞分泌INF-γ、IL-2、IL-12、TNF-β等促炎因子，介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答，增強(qiáng)殺傷炎癥細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用。Th2細(xì)胞產(chǎn)生IL-4、IL-5、IL-6、IL-10等細(xì)胞因子，促進(jìn)抗體的產(chǎn)生，介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答。目前，一般用INF-γ活性反映Th1細(xì)胞功能，IL-4活性則代表Th2功能，通過(guò)測(cè)定細(xì)胞因子變化，間接反映機(jī)體的免疫狀態(tài)。國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)，在MP肺炎患者的肺泡灌洗液中IL-4明顯上升，而INF-γ/IL-4明顯下降，提示MP感染后主要為T(mén)h2 樣細(xì)胞因子反應(yīng)[11]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：治療前，實(shí)驗(yàn)組患兒血清INF-γ 、IL-4水平較普通組升高，INF-γ/IL-4水平下降，而治療后IL-4水平明顯下降，INF-γ/IL-4水平升至正常水平；提示肺炎支原體感染后，存在以Th2細(xì)胞占主導(dǎo)優(yōu)勢(shì)的免疫失衡，而應(yīng)用糖皮質(zhì)激素治療后，IL-4水平迅速降至正常，恢復(fù)Th1/Th2平衡狀態(tài)；與上述國(guó)外報(bào)道一致。

另外，Th2細(xì)胞分泌的IL-4、IL-5、IL-6、IL-10等細(xì)胞因子，能夠增強(qiáng)B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答，從而產(chǎn)生大量的IgE，并刺激嗜酸細(xì)胞、肥大細(xì)胞等產(chǎn)生一系列炎性介質(zhì)，激發(fā)變態(tài)反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，肺炎支原體肺炎患兒血清總IgE水平異常升高，應(yīng)用糖皮質(zhì)激素抑制免疫反應(yīng)后迅速降至正常，從而再次證明了肺炎支原體感染后存在T淋巴細(xì)胞免疫失衡。國(guó)內(nèi)研究指出，肺炎支原體誘導(dǎo)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)越強(qiáng)及細(xì)胞因子產(chǎn)生的越多，導(dǎo)致的臨床癥狀及肺損害也就越重[12-13]。

綜上所述，肺炎支原體肺炎發(fā)病機(jī)制與CD4+T輔助細(xì)胞水平下降以及Th2細(xì)胞占主導(dǎo)優(yōu)勢(shì)的免疫失衡有顯著相關(guān)性，但細(xì)胞因子INF-γ、IL-4是如何調(diào)控的，需要我們進(jìn)一步從基因水平探討、研究，從而更好地指導(dǎo)臨床診治，阻止疾病進(jìn)展，避免發(fā)生嚴(yán)重并發(fā)癥及遺留后遺癥。