劉春苗，楊國帥，鐘偉，余丹

急性腦梗死是臨床常見的腦血管疾病，而H型高血壓即血同型半胱氨酸(Hcy)水平≥10 μmol/L的高血壓，是急性腦梗死發(fā)生的重要危險因素[1-2]，但關(guān)于H型高血壓合并急性腦梗死發(fā)生的調(diào)控機制仍未明確。乙醛脫氫酶2(ALDH2)是ALDH家族19個成員中催化活性最強的成員，能夠?qū)⒁掖即x產(chǎn)物乙醛脫氫氧化為乙酸，在乙醇的代謝過程中起到關(guān)鍵作用。近年來關(guān)于ALDH2的研究認為，該代謝酶不僅參與乙醇的代謝，還與體內(nèi)Hcy、膽固醇等多種物質(zhì)的代謝有關(guān)，其催化活性發(fā)生改變會增加代謝性疾病的發(fā)生風險[3-4]。ALDH2基因編碼第487位氨基酸的密碼子存在多態(tài)性，從鳥嘌呤(G)突變?yōu)橄汆堰?A)后會改變ALDH2的催化活性，國內(nèi)王洪巨等[5]報道，ALDH2基因G487A突變會增加冠心病合并糖尿病患者高血壓的發(fā)生風險，但關(guān)于ALDH2基因G487A突變與H型高血壓合并腦梗死的關(guān)系尚未明確?，F(xiàn)分析 H型高血壓合并腦梗死患者ALDH2基因多態(tài)性及其與Hcy代謝、炎性反應、氧化應激狀態(tài)的相關(guān)性，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2016年6月—2018年2月?？谑腥嗣襻t(yī)院神經(jīng)內(nèi)科診治高血壓合并急性腦梗死患者106例作為研究對象，根據(jù)入組時Hcy水平分為觀察A組(Hcy<10 μmol/L)42例、觀察B組(Hcy≥10 μmol/L)64例，另取同期于醫(yī)院體檢的健康者50例作為健康對照組。觀察A組42例，男24例，女18例，年齡44～65(54.48±7.63)歲；發(fā)病至入院時間3～12(5.51±0.83)h；高血壓病史1～8(4.23±0.73)年；合并糖尿病17例，高脂血癥23例；既往接受阿司匹林治療26例、他汀類藥物治療21例。觀察B組64例，男35例，女29例，年齡42～67(55.12±8.61)歲；發(fā)病至入院時間4～13(5.83±0.91)h；高血壓病史1～11(4.42±0.72)年；合并糖尿病24例，高脂血癥29例；既往接受阿司匹林治療38例，他汀類藥物治療32例。健康對照組50例，男28例，女22例，年齡40～65(53.94±8.42)歲。3組性別、年齡比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準，入選者和/或家屬同意并簽署知情同意書。

1.2 選擇標準 (1)納入標準：①經(jīng)頭顱磁共振及彌散加權(quán)像診斷為急性腦梗死；②既往有高血壓病史；(2)排除標準：①既往有腦梗死、腦出血等病史的患者；②合并冠心病、自身免疫性疾病、惡性腫瘤的患者；③正在服用葉酸、維生素B12等影響Hcy代謝的藥物的患者。

1.3 觀察指標與方法

1.3.1 ALDH2基因多態(tài)性檢測：入院次日或體檢當日清晨取受試者靜脈血2 ml枸椽酸鈉抗凝，F(xiàn)icoll淋巴細胞分離液分離白細胞，使用基因組DNA提取試劑盒提取DNA。目的DNA片斷擴增引物：上游引物5' -GTCAACTGCTATGATGTGTTTGG-3'，下游引5' -CCACCAGCAGACCCTCAAG-3'。反應體系50 μl：模板DNA 2 μg、2XMaster Mix 25 μl、引物各2 μl、雙蒸水補足至50 μl。反應條件：94℃預變性3 min后進入循環(huán) 94℃變性45 s，60℃退火30 s,72℃延伸45 s，共35個循環(huán)，最后72℃延伸5 min，4℃保存。PCR擴增產(chǎn)物為200 bp。擴增產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠中進行電泳，溴乙啶染色，紫外線分析凝膠成像系統(tǒng)下觀察電泳結(jié)果。將目標條帶切下，使用瓊脂糖凝膠回收試劑盒將PCR產(chǎn)物純化，由濟南博亞生物技術(shù)有限公司提供目的基因片段測序，判斷ALDH2的多態(tài)性。

1.3.2 Hcy代謝、炎性反應及氧化應激血清指標檢測：觀察A組、觀察B組患者于入院后采集肘靜脈血，健康對照組于體檢時采集肘靜脈血，離心分離血清，-80℃?zhèn)溆谩?1)Hcy代謝指標：采用酶循環(huán)法試劑盒(北京世紀沃德生物公司)測定Hcy含量，采用酶聯(lián)免疫吸附試劑盒(上海西唐生物公司)測定葉酸(FA)及VitB12含量。(2)炎性反應指標：采用酶聯(lián)免疫吸附試劑盒(上海西唐生物公司)測定白介素-6(IL-6)、IL-8含量。(3)氧化應激指標：采用硫代巴比妥酸法試劑盒(南京建成生物研究所)測定丙二醛(MDA)含量，采用比色法試劑盒(南京建成生物研究所)測定總抗氧化能力(T-AOC)含量。操作步驟均嚴格按照試劑盒說明書進行。

2 結(jié) 果

2.1 ALDH2基因G487A多態(tài)性比較 健康對照組ALDH2基因野生型GG的構(gòu)成比為84.0%(42/50)、突變型GA+AA基因型的構(gòu)成比為16.0%(8/50)；觀察A組分別為61.9%(26/42)、38.1%(16/42)；觀察B組分別為37.5%(24/64)、62.5%(40/64)。與健康對照組比較，觀察A組和觀察B組患者ALDH2基因GG的構(gòu)成比明顯較低、GA+AA構(gòu)成比明顯較高(χ2/P=5.779/0.016、24.899/0.000)；與觀察A組比較，觀察B組患者ALDH2基因野生型GG的構(gòu)成比明顯較低、突變型GA+AA的構(gòu)成比明顯較高(χ2/P=6.061/0.014)。

2.2 血清Hcy、FA、VitB12含量比較 與健康對照組比較，觀察A組和觀察B組患者血清Hcy含量均明顯升高，F(xiàn)A、VitB12含量均明顯降低(P<0.01)；與觀察A組比較，觀察B組患者的血清Hcy含量明顯升高，F(xiàn)A、VitB12含量均明顯降低(P<0.01)，見表1。

2.3 血清炎性反應及氧化應激指標比較 與健康對照組比較，觀察A組和觀察B組患者的血清IL-6、IL-8、MDA含量均明顯升高，T-AOC含量均明顯降低(P<0.01)；與觀察A組比較，觀察B組患者的血清IL-6、IL-8、MDA含量明顯升高，T-AOC含量明顯降低(P<0.01)，見表2。

2.4 觀察B組不同ALDH2基因型患者血清Hcy代謝、炎性反應及氧化應激指標比較 與觀察B組ALDH2基因GG基因型比較，GA+AA基因型患者的血清Hcy、IL-6、IL-8、MDA含量均升高，F(xiàn)A、VitB12、T-AOC含量均降低。見表3、4。

3 討 論

H型高血壓是急性腦梗死發(fā)生的重要危險因素，Hcy含量的升高以及血壓的升高參與了顱內(nèi)動脈粥樣硬化的進程并增加了腦梗死的發(fā)生風險[6]。ALDH2是參與乙醇代謝的催化酶，近年來也發(fā)現(xiàn)該催化酶與膽固醇、Hcy等物質(zhì)的代謝有關(guān)。ALDH2基因在G487A位點的多態(tài)性會影響其催化活性，國內(nèi)學者的研究報道，ALDH2基因編碼第487位氨基酸的密碼子發(fā)生G向A的突變會使編碼產(chǎn)物的催化活化發(fā)生改變，進而參與多種代謝性疾病及心腦血管疾病的發(fā)生[7-8]。本研究首先分析了高血壓合并腦梗死患者體內(nèi)ALDH2基因G487A多態(tài)性的變化，觀察A組和B組患者的野生型GG的構(gòu)成比明顯降低、突變型GA+AA的構(gòu)成比明顯升高，這一結(jié)果與報道的在冠心病及心肌梗死患者中的研究結(jié)果一致，本研究結(jié)果表明ALDH2基因G487A突變的增多與高血壓合并腦梗死的發(fā)生有關(guān)。在此基礎上進一步分析H型高血壓合并腦梗死患者與普通高血壓合并腦梗死患者ALDH2基因G487A多態(tài)性的差異，合并H型高血壓的觀察B組患者野生型GG的構(gòu)成比明顯降低、突變型GA+AA的構(gòu)成比明顯升高，提示ALDH2基因G487A突變的增多可能影響Hcy代謝并參與H型高血壓合并腦梗死的發(fā)生。

表1 3組受試者血清Hcy、FA、VitB12含量比較

表2 3組受試者血清炎性反應及氧化應激指標比較

表3 觀察B組中不同ALDH2基因型患者Hcy、FA、VitB12含量比較

表4 觀察B組中不同ALDH2基因型患者炎性反應及氧化應激指標的比較

Hcy是體內(nèi)甲硫氨酸代謝循環(huán)中的產(chǎn)物，F(xiàn)A和VitB12是Hcy代謝所需的輔因子[9-11]，H型高血壓以體內(nèi)Hcy的增多為特征，有研究表明，當患者體內(nèi)Hcy代謝所需的輔因子缺乏時，Hcy代謝受阻并在體內(nèi)蓄積，進而通過誘導炎性反應、氧化應激反應等造成動脈內(nèi)皮損傷、粥樣斑塊形成并參與腦梗死的發(fā)生[12-14]。本研究對H型高血壓合并腦梗死患者體內(nèi)Hcy代謝情況的分析發(fā)現(xiàn)：觀察B組患者的血清Hcy含量均明顯高于觀察A組和健康對照組，F(xiàn)A和VitB12含量均明顯低于觀察A組和健康對照組，這一結(jié)果與國內(nèi)相關(guān)報道一致，提示Hcy代謝所需輔因子的減少、Hcy在體內(nèi)的蓄積參與了H型高血壓合并腦梗死的發(fā)生[12-13]。在此基礎上，為了進一步明確ALDH2基因多態(tài)性在H型高血壓合并腦梗死患者體內(nèi)Hcy代謝過程中所起的作用，本研究分析了觀察B組中不同ALDH2基因型患者體內(nèi)Hcy代謝指標的差異，突變型GA+AA患者的血清Hcy含量明顯高于野生型GG患者，F(xiàn)A和VitB12含量均明顯低于野生型GG患者，提示ALDH2基因G487A突變的增多能夠影響Hcy的代謝，進而通過Hcy的生物學特性參與H型高血壓合并腦梗死的發(fā)生。

Hcy具有誘導炎性反應及氧化應激反應的作用，炎性反應激活過程中產(chǎn)生的炎性反應介質(zhì)以及氧化應激反應激活過程中產(chǎn)生的氧自由基能夠引起血管內(nèi)皮損傷、粥樣斑塊形成，與腦梗死的發(fā)生密切相關(guān)[15-18]。IL-6和IL-8是重要的炎性反應介質(zhì)，具有強大的促炎活性，能夠促進炎性反應細胞在血管內(nèi)膜浸潤并形成粥樣斑塊[19-21]；MDA是氧自由基與內(nèi)皮細胞膜中脂質(zhì)成分發(fā)生氧化反應的產(chǎn)物，T-AOC則是抗氧化的總能力，兩者共同反映了氧化應激的程度[22-23]。本研究對H型高血壓合并腦梗死患者體內(nèi)炎性反應及氧化應激反應指標的分析發(fā)現(xiàn)，觀察B組患者的血清IL-6、IL-8、MDA含量明顯高于觀察A組和健康對照組，T-AOC含量明顯低于觀察A組和健康對照組，提示炎性反應及氧化應激反應的過度激活參與了H型高血壓合并腦梗死的發(fā)生。在此基礎上，為了進一步明確ALDH2基因多態(tài)性在H型高血壓合并腦梗死患者體內(nèi)炎性反應及氧化應激反應激活中所起的作用，本研究分析了觀察B組中不同ALDH2基因型患者體內(nèi)炎性反應及氧化應激指標的差異，突變型GA+AA患者的血清IL-6、IL-8、MDA含量均明顯高于野生型GG患者，T-AOC含量均明顯低于野生型GG患者，提示ALDH2基因G487A突變的增多能夠造成炎性反應和氧化應激反應的過度激活。

綜上所述，ALDH2基因G487A突變與H型高血壓合并腦梗死的發(fā)生及Hcy代謝紊亂、炎性反應及氧化應激過度激活有關(guān)。

利益沖突：無

作者貢獻聲明

劉春苗：負責研究構(gòu)思，選擇課題，課題設計，論文撰寫；楊國帥、鐘偉：負責數(shù)據(jù)獲取，統(tǒng)計分析并參與撰寫；余丹：負責研究方案指導，論文修改