陳亮，官曉艷，龍俞宇，陳華友

兒童哮喘引起是呼吸困難的一種嚴(yán)重病癥，由于患兒本身免疫能力以及抵抗力較差，因此，假如控制不良則會(huì)迅速惡化且嚴(yán)重者危及生命[1-2]。巨噬細(xì)胞作為非特異性免疫細(xì)胞是機(jī)體抵御有害刺激的一道重要防線(xiàn)，它們的主要功能是以固定細(xì)胞或游離細(xì)胞的形式對(duì)細(xì)胞殘片及病原體進(jìn)行噬菌作用(即吞噬以及消化)，并激活淋巴細(xì)胞或其他免疫細(xì)胞，令其對(duì)病原體做出反應(yīng)[3-4]。而炎性反應(yīng)是機(jī)體對(duì)于刺激的一種防御反應(yīng)，巨噬細(xì)胞在多種急慢性炎性反應(yīng)性疾病中發(fā)揮多種免疫功能，巨噬細(xì)胞作為炎性反應(yīng)階段的主要吞噬細(xì)胞，負(fù)責(zé)清除機(jī)體損傷處組織和細(xì)胞的壞死碎片以及病原體等，這些物質(zhì)對(duì)創(chuàng)傷愈合過(guò)程都有重要的調(diào)控作用[5]。M1型巨噬細(xì)胞通過(guò)釋放抵抗素，促進(jìn)肝臟、骨骼肌和脂肪組織慢性炎性反應(yīng)的形成；M2型巨噬細(xì)胞與M1型巨噬細(xì)胞存在拮抗作用，在生理情況下，脂肪細(xì)胞和肝細(xì)胞能夠通過(guò)生成IL-4和IL-13誘導(dǎo)向M2型巨噬細(xì)胞分化，但在病理情況下，M1型和M2型巨噬細(xì)胞失衡引發(fā)組織炎性反應(yīng)和代謝功能障礙，從而促進(jìn)胰島素抵抗。而肺功能又是人體呼吸的重要功能之一，肺功能的正常與否顯著影響著人們的正常生活[6-8]。因此，本研究對(duì)經(jīng)檢查確診哮喘的兒童和同一時(shí)間有氣道炎性反應(yīng)但非哮喘的兒童通過(guò)肺功能儀和痰細(xì)胞學(xué)等方法對(duì)相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，研究哮喘兒童巨噬細(xì)胞吞噬功能和肺功能的關(guān)系，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2017年10月—2018年10月經(jīng)檢查確診的哮喘兒童25例作為試驗(yàn)組，同期收集有氣道炎性反應(yīng)但非哮喘兒童25例作為對(duì)照組。試驗(yàn)組男15例，10例，平均年齡(6.8±0.5)歲，體質(zhì)量(20.0±1.2)k；對(duì)照組男14例，11例，平均年齡(6.5±0.7)歲，體質(zhì)量(19.0±2.8)kg。2組兒童的性別、年齡、體質(zhì)量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患兒家屬均知情同意并簽署知情同意書(shū)。

1.2 觀測(cè)指標(biāo)及方法

1.2.1 肺功能指標(biāo)檢測(cè)：通過(guò)肺功能儀測(cè)定2組兒童1秒用力呼氣容積(FEV1)、FEV1占預(yù)計(jì)值百分率(FEV1%)、FEV1/用力肺活量(FVC)等指標(biāo)。

1.2.2 氣道炎性相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)：采集2組兒童的痰液標(biāo)本，通過(guò)痰細(xì)胞學(xué)方法測(cè)定嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等數(shù)量。

1.2.3 血漿細(xì)胞免疫功能指標(biāo)檢測(cè)：采集2組兒童空腹外周靜脈取血3 ml，肝素抗凝后，通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)定血漿T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+等。

1.2.4 血漿炎性因子mRNA的檢測(cè)：采集2組兒童空腹外周靜脈取血3 ml，肝素抗凝后，10 000 r/min離心20 min提取血漿，利用ELISA法測(cè)定白介素-12β(IL-12β)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的mRNA表達(dá)量。引物序列見(jiàn)表1。

2 結(jié) 果

2.1 肺功能指標(biāo)的比較 試驗(yàn)組患兒肺功能指標(biāo)FEV1、FEV1%、FVC均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見(jiàn)表2。

表2 2組受試者肺功能指標(biāo)的比較

2.2 痰液巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞比較 試驗(yàn)組患兒氣道痰液中的巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞高于對(duì)照組，嗜酸性粒細(xì)胞低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見(jiàn)表3。

表3 2組受試者氣道炎性反應(yīng)相關(guān)指標(biāo)的比較

表1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物序列

2.3 血漿T淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)比較 試驗(yàn)組血漿T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+值明顯低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見(jiàn)表4。

表4 2組受試者T淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)比較

2.4 血漿炎性因子mRNA表達(dá)的比較 試驗(yàn)組患兒血漿炎性因子IL-12β mRNA 和TNF-α mRNA 表達(dá)高于對(duì)照組，iNOS mRNA表達(dá)低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見(jiàn)表5，圖1。

表5 2組患兒血漿炎性因子mRNA比較

圖1 RT-PCR檢測(cè)炎性因子mRNA表達(dá)情況

3 討 論

兒童哮喘作為兒童呼吸道疾病常見(jiàn)病癥之一，近年來(lái)發(fā)病率不斷上升。其發(fā)病原因較多，主要包括遺傳、肥胖等因素。研究發(fā)現(xiàn)，兒童哮喘的發(fā)生主要是由于肺泡中細(xì)胞異常凋亡以及氣道炎性反應(yīng)的出現(xiàn)，因此，炎性反應(yīng)機(jī)制是發(fā)病的關(guān)鍵因素，近年來(lái)，巨噬細(xì)胞在兒童哮喘發(fā)病炎性反應(yīng)機(jī)制中作用的研究逐漸增多[9-11]。在該過(guò)程中，炎性反應(yīng)因子增加，抗炎性反應(yīng)因子減少[12-14]。吞噬細(xì)胞作為發(fā)病的重要研究目標(biāo)，該細(xì)胞既可清除異物，又可促進(jìn)病癥的恢復(fù)，巨噬細(xì)胞主要分為M1和M2型巨噬細(xì)胞。而巨噬細(xì)胞在某些刺激物如抗原等的刺激下，會(huì)出現(xiàn)巨噬細(xì)胞分化失調(diào)，從而導(dǎo)致傷口愈合緩慢[15-16]。因此，本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)哮喘患兒與非哮喘兒童的相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行比較，結(jié)果顯示，試驗(yàn)組患兒肺功能指標(biāo)FEV1、FEV1%、FVC均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；試驗(yàn)組患兒氣道痰液中的巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞高于對(duì)照組，嗜酸性粒細(xì)胞低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；試驗(yàn)組血漿T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+值明顯低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；試驗(yàn)組患兒血漿炎性因子IL-12β mRNA和TNF-α mRNA表達(dá)高于對(duì)照組，iNOS mRNA表達(dá)低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，哮喘兒童巨噬細(xì)胞吞噬功能和肺功能之間存在相關(guān)性。

研究發(fā)現(xiàn)，巨噬細(xì)胞與中性粒細(xì)胞相互作用后導(dǎo)致中粒細(xì)胞凋亡，巨噬細(xì)胞吞噬凋亡的中粒細(xì)胞后發(fā)生相應(yīng)的抗炎作用，促進(jìn)患者病癥恢復(fù)，一磷酸腺苷活化蛋白激酶 α1(AMPKα1)在該過(guò)程中發(fā)揮重要作用[17-19]。另外，吞噬細(xì)胞和炎性反應(yīng)因子的比例失調(diào)也會(huì)因?yàn)橥饨绛h(huán)境的刺激而發(fā)生變化，而促炎性反應(yīng)反應(yīng)介質(zhì)的釋放是吞噬細(xì)胞調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)反應(yīng)的關(guān)鍵[20]。巨噬細(xì)胞作為一種炎性反應(yīng)細(xì)胞，其能夠在病原細(xì)菌侵入后進(jìn)行識(shí)別及殺滅。該細(xì)胞在氣道以及肺部被其他因素激活后會(huì)釋放出炎性反應(yīng)介質(zhì)，包括IL-12β、iNOS和TNF-α。細(xì)胞的異常凋亡也在肺功能的損傷中起重要作用，而巨噬細(xì)胞在這種微環(huán)境下功能的發(fā)揮受到各種細(xì)胞凋亡的影響，部分情況下會(huì)導(dǎo)致巨噬細(xì)胞清除凋亡細(xì)胞的能力減弱，同時(shí)引發(fā)機(jī)體其他功能的減弱，導(dǎo)致并發(fā)癥的發(fā)生[21]。哮喘兒童的病癥由于受到病理影響而導(dǎo)致恢復(fù)過(guò)程減緩甚至停滯，通常表現(xiàn)為炎性反應(yīng)的發(fā)生而導(dǎo)致細(xì)胞增殖發(fā)生異常，吞噬細(xì)胞作為主要防線(xiàn)，吞噬細(xì)胞在外界因素的的誘導(dǎo)下發(fā)生細(xì)胞M1和M2分化失調(diào)，引起AMPKα1分泌發(fā)生異常，更加大了哮喘兒童恢復(fù)的難度[22]。

綜上所述，對(duì)哮喘兒童通過(guò)進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)測(cè)定，能夠?yàn)橄瓋和贫ㄖ委煼桨柑峁┛茖W(xué)的理論依據(jù)，促進(jìn)快速恢復(fù)，這也為該病后續(xù)臨床試驗(yàn)的進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。

利益沖突：無(wú)

作者貢獻(xiàn)聲明

陳亮，官曉艷：設(shè)計(jì)研究方案，實(shí)施研究過(guò)程，資料搜集整理，論文撰寫(xiě)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；龍俞宇，陳華友：提出研究思路，分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)，論文審核