史建華，劉瑞強(qiáng)，尹茂軒，楊幫東

(濮陽(yáng)市人民醫(yī)院泌尿外科，河南 濮陽(yáng)457000)

前列腺癌多發(fā)于45～89歲的中老年男性人群，屬于常見(jiàn)生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，流行病學(xué)研究[1]提示年齡超過(guò)50歲的人群前列腺癌的發(fā)病率和死亡率呈指數(shù)增長(zhǎng)，隨著疾病的進(jìn)展，多伴有尿路梗阻、血尿等并發(fā)癥，嚴(yán)重降低了患者的生活質(zhì)量，甚至威脅患者的生命安全。因而，探尋前列腺癌的有效診斷及病情評(píng)估方法以為制定有效的治療方案做參考已成為現(xiàn)臨床研究的重要方向。

前列腺特異性抗原 (Prostate specificantigen，PSA)是診斷前列腺疾病的重要指標(biāo)，但研究[2]提示單獨(dú)的PSA檢測(cè)缺乏足夠的特異性和敏感性。文獻(xiàn)[3]提示Bax、HIF-1α在多類腫瘤細(xì)胞中呈現(xiàn)高表達(dá)，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，但前列腺癌中上述Bax、HIF-1α的表達(dá)情況資料缺乏。故而，本研究深入觀察了 前列腺腫瘤患者的tPSA、Bax、HIF-1α表達(dá)水平，并分析其臨床意義，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 患者一般資料 選取2015年8月-2018年5月在我院接受治療前列腺腫瘤患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)[4]：⑴年齡≥50周歲；⑵經(jīng)病理診斷確診為前列腺腫瘤；⑶無(wú)其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾??；排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴臨床資料不全者；⑵合并其他原發(fā)腫瘤疾病者。根據(jù)納入排除標(biāo)準(zhǔn)共納入病例數(shù)80例，年齡55～82 歲，平均 63.85±4.11 歲；對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴年齡≥50周歲；⑵經(jīng)病理確診為前列腺增生；⑶無(wú)其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病者，共納入80例，年齡54～82歲，平均64.12±5.03歲。兩組患者年齡、性別等一般資料比較無(wú)差別，具有可比性。本項(xiàng)研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)評(píng)審?fù)ㄟ^(guò)，且患者均知情同意。

1.2 方法 取所有研究對(duì)象空腹靜脈血，離心后分離血清，化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清總前列腺癌特異性抗原（tPSA）水平；采用免疫組化染色法檢測(cè)Bax、HIF-1α蛋白表達(dá)表達(dá)水平；兔抗人蛋白多克隆抗體均購(gòu)于美國(guó)GE公司；DAB顯色盒、免疫組化試劑盒等相關(guān)試劑盒及染色液均購(gòu)于南京建成生物研究所。適量前列腺癌灶組織、增生組織標(biāo)本常規(guī)石蠟切片，梯度水化；熱抗原修復(fù)，10min過(guò)氧化物酶修復(fù)；山羊血清1h封閉；分別滴加Bax、HIF-1α蛋白抗體，孵育（4℃）過(guò)夜；PBS緩沖液3次沖洗；滴加二抗 （辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記）；1h室溫孵育，PBS3次沖洗；DAB顯色，蘇木素復(fù)染；自來(lái)水沖洗反藍(lán)后梯度脫水，中性膠封片，高倍顯微鏡下觀察。

結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：每張切片隨機(jī)取5個(gè)高倍鏡視野，對(duì)陽(yáng)性細(xì)胞所占百分率進(jìn)行計(jì)數(shù)；陽(yáng)性細(xì)胞細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性，10%～25%輕度陽(yáng)性，26%～50%中度陽(yáng)性，超過(guò)50%強(qiáng)陽(yáng)性；若陽(yáng)性細(xì)胞≥10%均可判定為陽(yáng)性表達(dá)[5]。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo) 觀察兩組患者 tPSA、Bax、HIF-1α表達(dá)的差異，比較不同臨床病理特征前列腺腫瘤患者tPSA、Bax、HIF-1α表達(dá)情況，分析影響前列腺腫瘤患者的 tPSA、Bax、HIF-1α表達(dá)水平的因素。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)錄入后，采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)和計(jì)量資料分別采用例和均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。兩組患者、不同臨床病理特征前列腺癌患者tPSA、Bax、HIF-1α表達(dá)情況的比較采用卡方檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，采用回歸分析法分析影響前列腺腫瘤患者的tPSA、Bax、HIF-1α表達(dá)水平的因素。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者tPSA、Bax、HIF-1α表達(dá)情況的比較前列腺癌患者的tPSA水平和HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)率高于前列腺增生組，兩組患者的Bax陽(yáng)性表達(dá)率無(wú)差別。見(jiàn)表1。

表1 兩組患者tPSA、Bax、HIF-1α表達(dá)情況的比較

2.2 不同臨床病理特征前列腺癌患者tPSA、Bax、HIF-1α表達(dá)情況的比較 中低分化、有轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ、有神經(jīng)浸潤(rùn)的前列腺癌患者的tPSA水平和HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)率較高，Bax陽(yáng)性表達(dá)率較低，不同年齡患者間無(wú)差別。見(jiàn)表2。

表2 不同臨床病理特征前列腺癌患者tPSA、Bax、HIF-1α表達(dá)情況的比較

2.3 影響前列腺腫瘤患者的tPSA、Bax、HIF-1α表達(dá)水平的因素分析 將單因素分析有意義的分化程度、轉(zhuǎn)移情況、TNM分期、有無(wú)神經(jīng)浸潤(rùn)作為自變量，將前列腺癌患者的tPSA、Bax、HIF-1α表達(dá)水平作為因變量進(jìn)行回歸分析，結(jié)果顯示分化程度和有無(wú)轉(zhuǎn)移是影響tPSA、Bax、HIF-1α表達(dá)的因素。見(jiàn)表3。

2.4 tPSA、HIF-1α對(duì)前列腺癌診斷價(jià)值分析 tPSA對(duì)前列腺癌診斷的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、靈敏度高于HIF-1α，特異度低于HIF-1α。見(jiàn)表4。

表3 -1影響前列腺腫瘤患者的tPSA表達(dá)水平的因素分析

表3 -2影響前列腺癌患者Bax表達(dá)的因素分析

表3 -3影響前列腺腫瘤患者的HIF-1α表達(dá)水平的因素分析

表4 tPSA、HIF-1α對(duì)前列腺癌診斷價(jià)值分析

3 討論

全球范圍內(nèi)前列腺癌一般多發(fā)于歐美國(guó)家，已成為男性第二大惡性腫瘤，但近年來(lái)我國(guó)前列腺癌發(fā)病率也呈現(xiàn)顯著上升趨勢(shì)[6]。早期前列腺癌由于腫瘤細(xì)胞逐漸侵犯前列腺周圍組織并不會(huì)表現(xiàn)出明顯癥狀，隨著病情的進(jìn)行還可能表現(xiàn)為尿流緩慢、尿流中斷、排尿不盡、尿頻、尿急等癥狀，嚴(yán)重患者還可出現(xiàn)尿潴留、尿路梗阻及尿失禁等癥狀，嚴(yán)重降低了患者的生活質(zhì)量[7，8]。因而，前列腺癌的早期準(zhǔn)確診斷和病情評(píng)估具有重要意義。

tPSA是現(xiàn)臨床泌尿科腫瘤中最靈敏的腫瘤標(biāo)志物，其不是腫瘤的特異感應(yīng)，而是器官的特異感應(yīng)，正常男性的TPSA值是4ng/L以下，若超過(guò)4ng/L，也不能完全確定患者患有前列腺癌，要根據(jù)其超過(guò)的范圍多少而定提示患者需要做進(jìn)一步檢查確診[9，10]。BAX是與BCL-2同源的水溶性相關(guān)蛋白，是BCL-2基因家族中細(xì)胞凋亡促進(jìn)基因，BAX的過(guò)度表達(dá)可拮抗BCL-2的保護(hù)效應(yīng)而使細(xì)胞趨于死亡，對(duì) Bcl-2 產(chǎn)生阻抑作用[11，12]。 HIF-1α 可調(diào)控多種信號(hào)途徑并對(duì)細(xì)胞凋亡、血管新生及糖酵解均具有良好的調(diào)控作用[13-15]。上述因子均為腫瘤特異性標(biāo)志物，本研究以此為研究點(diǎn)探討相關(guān)因子與前列腺癌病情的相關(guān)性。

本研究多兩組患者tPSA、Bax、HIF-1α表達(dá)情況比較發(fā)現(xiàn)前列腺癌患者的tPSA水平和HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)率高于前列腺增生組，兩組患者的Bax陽(yáng)性表達(dá)率無(wú)差別。上述結(jié)果提示前列腺腫瘤患者的tPSA、HIF-1α存在高表達(dá)，具有成為診斷前列腺癌重要指標(biāo)的潛力。正常情況下PSA分布于前列腺導(dǎo)管內(nèi)，組織表達(dá)水平較低，前列腺癌導(dǎo)管屏障遭到破壞，PSA快速釋放入血，因此前列腺癌患者血清tPSA水平較高[16]。HIF-1α與缺氧環(huán)境關(guān)系密切，提示前列腺癌在發(fā)生、發(fā)展過(guò)程可能造成了缺氧環(huán)境。

進(jìn)一步對(duì)不同臨床病理特征前列腺癌患者tPSA、Bax、HIF-1α表達(dá)情況的比較發(fā)現(xiàn)中低分化、有轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ、有神經(jīng)浸潤(rùn)的前列腺癌患者的tPSA水平及HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)率較高，Bax陽(yáng)性表達(dá)率較低，不同年齡患者間無(wú)差別。上述結(jié)果說(shuō)明高分化、高病理分期及存在神經(jīng)浸潤(rùn)的前列腺癌患者的tPSA水平及HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)率較高，Bax低陽(yáng)性表達(dá)，提示在前列腺癌的發(fā)展中，Bax蛋白的水平下降在腫瘤形成過(guò)程中抑制了細(xì)胞凋亡，前列腺癌HIF-1α蛋白可能通過(guò)調(diào)控Baxx蛋白的表達(dá)而抑制腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。

本研究將單因素分析有意義的分化程度、轉(zhuǎn)移情況、TNM分期、有無(wú)神經(jīng)浸潤(rùn)作為自變量，將前列腺癌患者的tPSA、Bax、HIF-1α表達(dá)水平作為因變量進(jìn)行回歸分析，結(jié)果顯示分化程度和有無(wú)轉(zhuǎn)移是影響tPSA、Bax、HIF-1α表達(dá)的因素。該結(jié)果說(shuō)明前列腺腫瘤患者的tPSA、HIF-1α、Bax水平均受分化程度和轉(zhuǎn)移情況的影響。tPSA對(duì)前列腺癌診斷的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、靈敏度高于HIF-1α，特異度低于HIF-1α。tPS屬激肽酶家族蛋白，存在于前列腺組織和精液中，正常人血清中含量極微，其水平的異常變化可提示前列腺癌的可能性；正常條件下HIF-1α可與基因產(chǎn)物pYHL結(jié)合并被降解，半衰期僅有數(shù)分鐘，但在pVHL和缺氧環(huán)境下HIF-1α可快速升高，因此tPSA、HIF-1α均對(duì)前列腺癌的診斷具有重要價(jià)值。

本研究證實(shí)前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展與多種信號(hào)通路、多種因子有關(guān)，為前列腺癌的診斷、病情程度及預(yù)后判斷提供一定的基礎(chǔ)，但具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究探討。

綜上所述，前列腺腫瘤患者的tPSA、HIF-1α表達(dá)水平較高，Bax水平與非前列腺癌患者相當(dāng)，但上述指標(biāo)均受分化程度和轉(zhuǎn)移情況的影響。