游雪云，劉艷秋，徐永華，張兆振，趙鳳

(江西省婦幼保健院產(chǎn)前診斷中心，江西 南昌 330006)

人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)為雙鏈DNA病毒，該病毒在人類(lèi)感染中很普遍，特別是在嬰幼兒、孕婦等免疫力低下的人群中感染更常見(jiàn)[1]，孕婦感染HCMV時(shí)，病原體可經(jīng)過(guò)胎盤(pán)引起母嬰垂直傳播，從而導(dǎo)致宮內(nèi)胎兒流產(chǎn)、死胎、早產(chǎn)、先天畸形及出生后嬰幼兒發(fā)育遲緩等病變[2]。本文對(duì)305例病例組及412例正常對(duì)照組孕婦進(jìn)行了外周血HCMV抗體、IgG親合力指數(shù)及HCMV-DNA的檢測(cè)。了解南昌地區(qū)孕婦HCMV的感染情況可阻止不良妊娠繼續(xù)，減少殘障兒出生，對(duì)優(yōu)生優(yōu)育、提高人口素質(zhì)具有重要意義，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象與樣本 2015年1月-2017年12月在江西省婦幼保健院門(mén)診就診的16551例年齡為22～40歲、 體重在 45～60kg、 孕周在 9～20周的孕婦。305例有不良妊娠結(jié)局的孕婦納入病例組，同時(shí)隨機(jī)選取412例正常妊娠結(jié)局的孕婦為正常對(duì)照組。抽取孕婦靜脈血2.5ml，分離血清；同時(shí)采集乙二胺四醋酸(EDTA)抗凝血2.5mL，分離血漿，均置冰箱儲(chǔ)存待檢[3]。

1.2 CMV IgG和IgM抗體檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)孕婦外周血CMV IgG和IgM抗體，CMV抗體試劑盒購(gòu)自北京貝爾生物技術(shù)有限公司，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行相關(guān)操作，每次檢測(cè)均設(shè)立陰、陽(yáng)性對(duì)照[4]。結(jié)果判讀：待測(cè)樣本OD值≥陰性對(duì)照孔OD值+0.1作為陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 HCMV-DNA檢測(cè) 采用熒光探針定量多聚酶鏈反應(yīng)技術(shù)檢測(cè)孕婦血中的CMV-DNA。使用中山醫(yī)科大學(xué)達(dá)安基因診斷公司HCMV-DNA熒光定量PCR試劑盒。HCMV-DNA拷貝數(shù)＞510×102基因拷貝/ml為陽(yáng)性。

1.4 CMV IgG親合力檢測(cè) 上述實(shí)驗(yàn)檢測(cè)判定為IgG陽(yáng)性的血清標(biāo)本再進(jìn)行親和力檢測(cè)，采用與CMV IgG定量檢測(cè)相同的ELISA試劑盒進(jìn)行。根據(jù)公司提供的軟件計(jì)算標(biāo)本的AI值，AI＜30%為低親和力抗體，表示為近期發(fā)生的原發(fā)感染，AI≥50%為高親和力抗體，提示既往感染。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行組間卡方檢驗(yàn)比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 孕婦CMV抗體陽(yáng)性率及親和力指數(shù)檢測(cè)結(jié)果根據(jù)CMV抗體實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的判讀[5]，717例孕婦中，16例（2.2%）CMV IgG和IgM均陰性，提示未感染CMV。8例孕婦表現(xiàn)為CMV IgG-/IgM+。孕婦總體CMV IgG陽(yáng)性率為96.6%，其中正常對(duì)照組陽(yáng)性率相對(duì)低于病例組孕婦（P=0.037），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。根據(jù)CMV感染狀態(tài)判讀標(biāo)準(zhǔn)，兩組孕婦潛在感染比例，即CMV IgG+/IgM-，分別為93.1%和95.2%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.425）。另外，病例組孕婦活動(dòng)性感染即（CMVIgG+/IgM+）比例為 3.9%（12/305）明顯高于正常對(duì)照組（1.2%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.023）。為了區(qū)分活動(dòng)性感染是原發(fā)感染還是既往感染，又檢測(cè)了孕婦血清CMV IgG AI。檢測(cè)結(jié)果顯示，病例組12例活動(dòng)性感染孕婦中8例AI≥50%，提示既往感染；剩余4例AI＜30%，提示原發(fā)感染。而正常對(duì)照組4例均為高親和力抗體，提示與繼發(fā)感染有關(guān)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示HCMV-IgG低親和力樣本病例組孕婦所占比例明顯高于對(duì)照組孕婦，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。值得注意得是，這4例低親和力樣本病例組孕婦的新生兒在出生后隨訪(fǎng)時(shí)均異常，包括2例生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、1例化膿性腦膜炎及1例頭顱畸形。見(jiàn)表1。

表1 病例組和正常對(duì)照組孕婦CMV血清學(xué)狀態(tài)比較

2.2 兩組孕婦血HCMV-DNA檢測(cè)結(jié)果的比較 對(duì)照組孕婦陽(yáng)性例數(shù)所占比例顯著低于病例組孕婦，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。正常妊娠組中有1例HCMVDNA陽(yáng)性，而病例組中有64例HCMVDNA陽(yáng)性，提示胎兒有感染風(fēng)險(xiǎn)。病例組中，1例IgM（-）/IgG（-）樣本 HCMV-DNA 檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，提示患者可能處于HCMV感染窗口期。另病例組12例IgM（+）/IgG（+）樣本親和力試驗(yàn)結(jié)果有4例為低親和力，而HCMV-DNA檢測(cè)結(jié)果有5例樣本陽(yáng)性，推測(cè)繼發(fā)感染中可能存在新毒株再次感染。見(jiàn)表2。

3 討論

HCMV是細(xì)胞內(nèi)寄生的病原體，在自然人群中感染較普遍，據(jù)報(bào)道發(fā)達(dá)國(guó)家人群感染率為30%～70%，而我國(guó)人群的感染率在80%以上[6]。若HCMV侵入人體，將長(zhǎng)期存在于體內(nèi)，并大部分免疫正常的個(gè)體將表現(xiàn)為無(wú)癥狀感染，若胎兒、幼小嬰兒及免疫抑制個(gè)體感染HCMV可出現(xiàn)明顯病癥[7]，而孕婦感染后將可能導(dǎo)致胎兒畸形、流產(chǎn)及早產(chǎn)等，感染嚴(yán)重者可致胎兒死亡[8]。

表2 兩組孕婦HCMV感染與HCMV-DNA檢測(cè)結(jié)果的比較

本研究中大部分孕婦（94.3%）為潛在感染，僅很小部分孕婦（2.4%）發(fā)生CMV活動(dòng)性感染，特別是原發(fā)感染，這與既往報(bào)道一致[9，10]。孕期CMV活動(dòng)性感染低可能是由于很多孕婦在妊娠前就已經(jīng)感染過(guò)CMV，妊娠前已存在的母體免疫力對(duì)胎兒或新生兒有一定的保護(hù)作用，可降低CMV感染的風(fēng)險(xiǎn)[11]。值得一提得是，病例組4例低親和力樣本孕婦的妊娠結(jié)局有2例表現(xiàn)為新生兒生長(zhǎng)發(fā)育遲緩，其余2例分別表現(xiàn)為頭顱畸形及化膿性腦膜炎。據(jù)報(bào)道胎兒顱面部畸形可能與先天性CMV感染有關(guān)[12，13]，也有研究報(bào)道CMV感染可能與HIV感染患者化膿性腦膜炎的不良預(yù)后有關(guān)[14]。由此可見(jiàn)，病例組HCMV陽(yáng)性率明顯高于正常妊娠結(jié)局者(P＜0.001)，說(shuō)明了孕期HCMV感染對(duì)胎兒的危害作用確實(shí)不容忽視。

在本研究中，我們還對(duì)HCMV的原發(fā)與繼發(fā)性感染進(jìn)行了評(píng)估。通過(guò)檢測(cè)HCMVIgM/IgG先篩選出 IgM（+）/IgG（+）孕婦，接著檢測(cè) IgG 抗體親和力指數(shù)，然后評(píng)估兩組孕婦HCMV的原發(fā)性感染與繼發(fā)性感染情況，同時(shí)對(duì)兩組孕婦的血樣進(jìn)行HCMV-DNA檢測(cè)，用以評(píng)估胎兒的感染風(fēng)險(xiǎn)。通過(guò)對(duì)兩組研究對(duì)象的HCMV-IgG陽(yáng)性樣本進(jìn)行親和力指數(shù)評(píng)估后發(fā)現(xiàn)，HCMV-IgG低親和力樣本病例組孕婦所占比例明顯高于對(duì)照組孕婦，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。另外，從兩組研究對(duì)象的HCMV-DNA檢測(cè)結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，病例組孕婦陽(yáng)性例數(shù)所占比例顯著高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 此外，本文病例組 IgM（+）/IgG（+）樣本中，親和力試驗(yàn)提示12例樣本中有4例為低親和力，即存在原發(fā)感染，而HCMV-DNA檢測(cè)中有5例樣本陽(yáng)性，推測(cè)繼發(fā)感染中可能存在新毒株再次感染HCMV-DNA而被檢出。另外病例組中，有 1 例 IgM（-）/IgG（-）樣本 HCMV-DNA 檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，提示患者可能處于HCMV感染窗口期，抗體還沒(méi)出現(xiàn)，但HCMV-DNA已經(jīng)可以檢測(cè)出，可見(jiàn)，采用HCMV-DNA檢測(cè)早期感染患者可以避免窗口期漏檢。鐘瑞芬等[15]認(rèn)為采用HCMVDNA檢測(cè)比采用CMV IgM抗體檢測(cè)來(lái)判斷是否感染HCMV更具有準(zhǔn)確、快速、可靠的優(yōu)點(diǎn)。綜上所述，HCMV-DNA結(jié)合HCMV-IgG親和力指數(shù)檢測(cè)，可以較好的反映孕婦是否存在原發(fā)感染或活動(dòng)性感染這些危險(xiǎn)因素，我們還應(yīng)對(duì)孕期CMV活動(dòng)性感染的孕婦進(jìn)行持續(xù)監(jiān)測(cè)并正確進(jìn)行胎兒風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，從而為臨床提供早期診斷和早期預(yù)防胎兒先天畸形的有力依據(jù)。

綜上所述，南昌地區(qū)CMV感染中CMV-IgG陽(yáng)性率較高，并且大部分為潛在感染，且僅很少部分孕婦在孕期發(fā)生活動(dòng)性感染。對(duì)于早孕期確診為HCMV感染者，我們應(yīng)該建議終止妊娠，而對(duì)于中晚期HCMV感染者，目前還沒(méi)有特別有效的治療方法。所以只有增強(qiáng)育齡婦女的身體素質(zhì)，提高孕前、孕早期的保健意識(shí)，自覺(jué)進(jìn)行孕前HCMV篩查，排除活動(dòng)性感染后再懷孕；同時(shí)在人群中普及對(duì)HCMV宮內(nèi)感染的宣傳力度，以提高其對(duì)HCMV危害的認(rèn)識(shí)。