雷哲，高改云，倪猛，楊旭

(南陽市中心醫(yī)院，河南 南陽 473400)

隨著人們飲食習慣的改變，結(jié)直腸癌的發(fā)生率明顯的上調(diào)，流行病學研究證實，結(jié)直腸癌的發(fā)病率接近373～482/10萬人左右[1]。臨床上結(jié)直腸癌治療后的五年內(nèi)病死率仍然超過35%，治療后的無瘤生存時間仍然不足48個月[2]。

不同的腫瘤相關(guān)蛋白能夠影響結(jié)直腸上皮黏膜腺體細胞的異常病變，促進了消化系統(tǒng)惡性腫瘤的發(fā)生。Fascin-1蛋白是重要的肌動蛋白相關(guān)因子，其能夠提高癌細胞的變形能力，進而提高癌細胞對于臨近正常上皮組織的浸潤風險；HSPB1蛋白是熱休克蛋白家族成員，其表達濃度的改變能夠影響癌細胞的增殖和耐藥過程，提高癌細胞對于基底膜組織的浸潤風險。部分研究者報道了Fascin-1蛋白在卵巢癌或者食管癌患者病灶組織中的表達情況，認為高表達的Fascin-1蛋白能夠顯著促進卵巢癌患者臨床分期的進展，降低放化療的敏感性[3，4]，但對于 Fascin-1與 HSPB1蛋白與結(jié)直腸癌的關(guān)系研究不足。為了揭示Fascin-1與HSPB1蛋白與結(jié)直腸癌發(fā)病的關(guān)系，本次研究收集了相關(guān)結(jié)直腸癌病例，探討了Fascin-1與HSPB1蛋白的表達特點及與患者臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2015年3月-2017年5月收集的100例結(jié)直腸癌術(shù)后組織 （病灶組）、50例符合標準的為癌旁組織標本（癌旁組）。病灶組，年齡 39～79歲，平均為 56.5±12.8歲，男 60例、女40例，TNM分期：Ⅰ期18例、Ⅱ期30例、Ⅲ期38例、Ⅳ期14例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移63例；組織分化：高分化26例、中分化37例、低分化37例；結(jié)腸癌57例、直腸癌43例。癌旁組，年齡42～77歲，平均為57.8±13.0歲，男28例、女22例。兩組研究對象的年齡、性別比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。納入標準：⑴結(jié)腸癌、直腸癌的診斷以病理學檢查結(jié)果作為標準[5]；⑵結(jié)直腸癌患者獲取癌組織標本前未進行放化療、免疫治療；⑶本次研究獲得的病理學標本均來源于術(shù)后；⑷患者年齡＜80歲。排除標準⑴未經(jīng)病理學證實；⑵轉(zhuǎn)移性腫瘤；⑶既往伴有風濕免疫系統(tǒng)疾??；⑷既往具有開腹手術(shù)病史或長期炎癥病史。

1.2 免疫組化檢測方法 所有組織標本經(jīng)石蠟包埋后作連續(xù)切片，厚度約為4mm，采用免疫組化鏈霉卵白素一生物素復合體法 (strep avidin-biotin complex，SABC法)染色，二氨基聯(lián)苯胺(diamionben zidene，DAB)顯色。Fascin-1蛋白與HSPB1蛋白通用型二抗以及SP試劑盒和DAB顯色盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)開發(fā)公司。以陽性片及PBS代替一抗分別作為陽性及陰性對照，高倍顯微鏡下觀察Fascin-1蛋白與HSPB1蛋白的表達情況，具體染色步驟嚴格按照SP試劑盒說明書進行操作。

1.3 免疫組化判斷標準 免疫組化結(jié)果判定：Fascin-1蛋白陽性著色定位于細胞質(zhì)、HSPB1蛋白陽性著色定位于細胞質(zhì)及細胞膜，陽性著色呈黃色、棕黃色、褐色表達，⑴根據(jù)著色強度：0分為無色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；⑵根據(jù)陽性細胞比例：陽性細胞數(shù)目所占比例≤10%為1分、陽性細胞所占比例11%～50%為2分、陽性細胞數(shù)51%～75%為3分、陽性細胞數(shù)所占比例＞75%為4分，兩種積分相乘總分＜3分為陰性、≥3分為陽性。

2 結(jié)果

2.1 兩組標本中的Fascin-1蛋白與HSPB1蛋白檢測結(jié)果比較 病灶組中的Fascin-1蛋白與HSPB1蛋白陽性表達率56.00%、78.00%均顯著的高于癌旁組的5.00%、15.00%，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；見表 1。

表1 兩組標本中的Fascin-1蛋白與HSPB1蛋白檢測結(jié)果比較[n（%）]

2.2 結(jié)直腸癌組織中的Fascin-1蛋白與HSPB1蛋白相關(guān)關(guān)系 結(jié)直腸癌組織中的Fascin-1蛋白與HSPB1蛋白陽性表達呈顯著的正相關(guān)關(guān)系（Spearman R=0.502，P＜0.000）；見表 2。

表2 Spearman秩相關(guān)分析結(jié)果

2.3 結(jié)直腸癌組織中的Fascin-1蛋白與HSPB1蛋白表達與患者臨床病理學特征的關(guān)系 結(jié)直腸癌組織中的Fascin-1蛋白在不同TNM分期、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中陽性表達率差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；見表 3。

表3 Fascin-1蛋白表達與結(jié)直腸癌患者臨床病理學特征的關(guān)系

結(jié)直腸癌組織中的HSPB1蛋白在不同TNM分期、不同分化程度、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中陽性表達率差異具有統(tǒng)計學意義 （P＜0.05）；見表4。

表4 HSPB1蛋白表達與結(jié)直腸癌患者臨床病理學特征的關(guān)系

3 討論

在持續(xù)性的病理性因素刺激下，結(jié)直腸腺體細胞的異常增殖風險可以顯著上升。特別是在合并有家族性腸道息肉的人群中，結(jié)直腸癌的發(fā)生風險更高，臨床病死率等生存預后指標更差[6]。長期的臨床隨訪觀察研究認為，結(jié)直腸癌的五年生存率不足35%[7]，手術(shù)、放化療等綜合性治療措施治療后的無瘤生存時間不足48個月[8]。免疫治療或者靶向治療近年來被認為能夠顯著改善惡性腫瘤患者的生存預后，改善結(jié)直腸癌患者的病情轉(zhuǎn)歸。而本次研究對于相關(guān)腫瘤相關(guān)蛋白的研究，能夠?qū)τ诮Y(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展的相關(guān)標記物的篩選提供一定的參考。

Fascin-1能夠通過提高肌動蛋白的活性，促進癌細胞的粘附和轉(zhuǎn)移過程。Fascin-1蛋白還能夠通過激活多種腫瘤相關(guān)生物學信號通路，提高癌細胞DNA上游的轉(zhuǎn)錄活性，增強癌細胞的浸潤能力。相關(guān)文獻研究者認為，F(xiàn)ascin-1能夠顯著提高結(jié)直腸癌患者的發(fā)病風險，導致腫瘤患者放化療治療敏感性的下降[9]，但對于其與患者臨床病理特征的關(guān)系研究不足；HSPB1是熱休克蛋白家族的重要成員，HSPB1的高表達能夠通過影響到癌細胞的周期調(diào)控，提高癌細胞G1/S期的細胞比例，進而影響到早期惡性腫瘤的發(fā)生過程。基礎(chǔ)方面的研究也認為，HSPB1的高表達能夠誘導癌細胞的分化成熟障礙，導致低分化或者中低分化的細胞比例的提高[10]。部分研究探討了HSPB1蛋白的表達與鼻咽癌的關(guān)系，認為HSPB1蛋白表達濃度的上升能夠顯著促進鼻咽癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或者臨床分期的進展[11]，但缺乏對于HSPB1與結(jié)直腸癌的關(guān)系研究。

免疫組化的結(jié)果分析可見，F(xiàn)ascin-1與HSPB1在結(jié)直腸癌患者病灶組織中的表達陽性率均明顯的上升，高于癌旁組織，差異較為明顯，提示了Fascin-1與HSPB1蛋白均可能參與到了結(jié)直腸癌的病情進展過程，通過回顧分析相關(guān)的臨床文獻，筆者認為Fascin-1與HSPB1的高表達對于結(jié)直腸癌的發(fā)生影響可能與下列幾個方面的因素有關(guān)[12-14]：⑴Fascin-1蛋白的上升能夠提高癌細胞的浸潤能力，導致癌細胞對于腸道黏膜基底膜組織的突破風險的上調(diào)；⑵HSPB1蛋白的高表達能夠提高癌細胞DNA的擴增速度，增加癌細胞的持續(xù)性異常核分裂的發(fā)生。戚峰等[15]研究者也認為，在結(jié)直腸癌患者中，F(xiàn)ascin-1基因表達水平可平均上升35%以上，特別是在短期內(nèi)腫瘤臨床分期進展較快或者病灶明顯增大的患者中，F(xiàn)ascin-1基因表達水平可進一步的上升。相關(guān)關(guān)系分析可見，F(xiàn)ascin-1與HSPB1的表達具有一定的相關(guān)關(guān)系，提示二者在促進結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中可能發(fā)揮了一定的協(xié)同作用，但具體的內(nèi)在機制仍然需要后續(xù)基礎(chǔ)研究的探索。臨床病理特征的分析研究可見，在發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或者臨床分期較晚的患者中，F(xiàn)ascin-1蛋白的表達陽性率可顯著的上升，提示了Fascin-1蛋白與結(jié)直腸癌患者的臨床病理特征密切相關(guān)，這主要由于Fascin-1蛋白的高表達能夠影響到癌細胞對于臨近正常組織的浸潤能力，提高癌細胞對于淋巴結(jié)內(nèi)皮細胞的粘附能力等有關(guān)。而在發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期較晚或者癌細胞分化程度較差的患者中，HSPB1的表達陽性率可進一步的上升，提示了HSPB1蛋白的表達與結(jié)直腸癌患者的臨床病理特征同樣具有密切的關(guān)系，這主要由于HSPB1蛋白的表達能夠影響到癌細胞生物學特征的改變，導致癌細胞的分化成熟異常等病理機制的進展。

綜上所述，F(xiàn)ascin-1與HSPB1在結(jié)直腸癌患者中表達明顯上升，同時二者的表達與腫瘤患者的臨床病理特征密切相關(guān)。