戴黎黎， 李苗

(武漢藥品醫(yī)療器械檢驗(yàn)所，武漢 430075)

魚(yú)肝油酸鈉注射液(sodium morrhuate injection)為魚(yú)肝油中各種脂肪酸鈉鹽的滅菌水溶液[1]。本品經(jīng)局部注射后，刺激血管內(nèi)膜促進(jìn)其增生，逐漸閉塞血管使之硬化，作為血管硬化劑用于血管瘤、靜脈曲張、內(nèi)痔、顳合關(guān)節(jié)病(脫位或半脫位者)，也用于婦科、外科等創(chuàng)面滲血和出血[1]。魚(yú)肝油酸鈉以鱈魚(yú)肝油為原料，經(jīng)過(guò)皂化、酸化、提取，最后成鹽制得魚(yú)肝油酸鈉。在生產(chǎn)過(guò)程中引入了乙醇、乙醚等有機(jī)溶劑，但魚(yú)肝油酸鈉注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中未控制有機(jī)溶劑殘留量[2]。為控制藥品的質(zhì)量與療效，建立一個(gè)良好的注射液殘留溶劑檢查方法非常有必要，筆者參照文獻(xiàn)[3-8]，采用頂空氣相色譜法測(cè)定魚(yú)肝油酸鈉注射液中乙醇及乙醚殘留量，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilent 7890氣相色譜儀(美國(guó)AGILENT公司)，G1888頂空進(jìn)樣器(美國(guó)AGILENT公司)，F(xiàn)ID檢測(cè)器，Agilent DB-624毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.32 mm，0.18 μm)；XP105電子天平(瑞士梅特勒-托利多一期公司，感量：0.01 mg)。

1.2試藥 乙醇(Fisher-Chemical)、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(Fisher-Chemical)為色譜純，乙醚(國(guó)藥集團(tuán))為分析純。魚(yú)肝油酸鈉注射液(規(guī)格為2 mL：0.1 g，批號(hào)：1510601，1510602，1610601，1610602)均由市場(chǎng)上抽樣得到。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 Agilent DB-624毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.32 mm，0.18 μm)；進(jìn)樣口溫度：200 ℃；檢測(cè)器(FID)溫度：250 ℃；載氣：氮?dú)?，流速?.0 mL·min-1；頂空氣化室平衡溫度：80 ℃，平衡時(shí)間：20 min；進(jìn)樣體積：1 mL；柱溫：40 ℃保持8 min，然后以7 ℃·min-1升溫至70 ℃，保持4 min，最后以50 ℃·min-1升溫至230 ℃，保持5 min。

2.2溶液的配制

2.2.1對(duì)照品溶液 精密稱取乙醇、乙醚各100 mg，分別置于25 mL量瓶中，用50%DMF溶液稀釋至刻度，搖勻。再各精密量取5 mL，置于同一100 mL量瓶中，加50% DMF溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取5 mL，置20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封，即得對(duì)照品溶液。

2.2.2供試品溶液 精密量取魚(yú)肝油酸鈉注射液樣品2 mL，置于50 mL量瓶中，加50%DMF溶液釋至刻度，搖勻。精密量取5 mL，置20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封。即得供試品溶液。

2.3系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 按“2.2.1”項(xiàng)下配制對(duì)照品溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果顯示乙醇與乙醚兩色譜峰的分離為2.0，理論板數(shù)以乙醚計(jì)為37 175，且DMF峰與兩待測(cè)成分峰完全分離。

2.4空白溶劑考察 精密量取50%DMF溶液5 mL，置20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封，進(jìn)樣。溶劑中未檢出乙醇與乙醚峰，證明溶劑對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)干擾。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.5線性關(guān)系考察 取對(duì)照品儲(chǔ)備液，以50%DMF溶液為溶劑，分別配制成含乙醇1004，401.6，200.8，100.4，20.08 μg·mL-1和含乙醚999.2，399.68，199.84，99.92，19.98，4.996，2.498，0.999 μg·mL-1的系列溶液。分別精密量取5 mL，置20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封。依次進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，濃度(C，μg·mL-1)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，分別得乙醇線性方程：A=0.289 7C-0.757 4(r=0.999 8)，線性范圍為：20.08～1004 μg·mL-1；乙醚線性方程：A=6.039 1C-15.277 9(r=0.999 7)，線性范圍為：0.999～999.2 μg·mL-1。

2.6加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密量取樣品4 mL置100 mL量瓶中，分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液2.5，5，7.5 mL各3份置于上述量瓶中，用50%DMF溶液定容至刻度，搖勻，作為回收率實(shí)驗(yàn)測(cè)試液。分別精密量取回收率實(shí)驗(yàn)測(cè)試液和“2.2.1”項(xiàng)對(duì)照品溶液各5 mL，置20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封。依次進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。按峰面積以外標(biāo)法計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1，2。

2.7檢測(cè)限 取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液，適當(dāng)稀釋，進(jìn)樣測(cè)定。當(dāng)信噪比(S/N)為3時(shí)，測(cè)得乙醇和乙醚的檢測(cè)限分別為71 ng·mL-1與3 ng·mL-1。

A.溶劑空白；B.對(duì)照品；C.樣品；1.乙醇；2.乙醚；3.N，N-二甲基甲酰胺

圖1 殘留溶劑的GC圖譜

A.blank solution；B.reference substance；C.sample；1.ehtanol；2.ethyl ether；3.DMF

Fig.1GCchromatogramsofresidualsolvent

表1 乙醇回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Tab.1Resultsofrecoverytestofethanoln=9

加入量實(shí)測(cè)量μg回收率平均回收率RSD%502.0505.5100.7502.0501.599.9502.0499.099.41004.01021101.71004.0998.099.4100.00.71004.01004.0100.01506.01501.099.71506.01506.0100.01506.01500.099.6

表2 乙醚回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Tab.2Resultsofrecoverytestofethylethern=9

2.8進(jìn)樣精密度實(shí)驗(yàn) 取“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品儲(chǔ)備液各5 mL，依次置5個(gè)20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封。分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。乙醇和乙醚峰面積的RSD(n=5)分別為0.8%和1.8%。

2.9重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 分別精密量取本品(批號(hào)：1510601)1.0，2.0，3.0 mL各3份，置50 mL量瓶中，用50%DMF溶液定容，搖勻，作為測(cè)試液。取9份測(cè)試液和“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液各5 mL，分別置20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封，分別測(cè)定，記錄色譜圖。按峰面積以外標(biāo)法計(jì)算殘留量。9份樣品中均未檢出乙醇，均檢出乙醚，平均含量(n=9) 為0.022%，RSD為1.3%，表明本法重復(fù)性好。

2.10樣品測(cè)定 按照“2.2.1”“2.2.2”項(xiàng)方法制備對(duì)照品和供試品溶液，進(jìn)樣并計(jì)算樣品中殘留溶劑的含量。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 4批樣品測(cè)定結(jié)果

Tab.3Resultsoffourbatchesofsamples%

批號(hào)乙醇乙醚1510601未檢出0.0231510602未檢出0.0251610601未檢出0.0201610602未檢出0.033

3 討論

3.1色譜條件的選擇 本實(shí)驗(yàn)考察不同涂布液種類的毛細(xì)管氣相色譜柱，由于乙醇極性較大，乙醚極性較小，二者極性相差較大，故選擇使用中等極性的DB-624毛細(xì)管柱，并參考《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版二部中馬來(lái)酸依那普利等其他品種項(xiàng)下乙醇等有機(jī)溶劑的測(cè)定方法，采用程序升溫的方式，并經(jīng)反復(fù)實(shí)驗(yàn)確定升溫程序，可使乙醇和乙醚的分離度達(dá)到1.5。因魚(yú)肝油酸鈉注射液濃度較大，且主成分為長(zhǎng)鏈脂肪酸鹽的混合物，如采用直接進(jìn)樣法，脂肪酸附著在氣相色譜柱上較難氣化完全，可能污染色譜柱而改變色譜柱性能，故本方法采用頂空進(jìn)樣的方式，僅使樣品中存在的有機(jī)溶劑氣化進(jìn)入色譜柱，避免主成分進(jìn)入色譜系統(tǒng)，既可以檢測(cè)樣品中殘留的有機(jī)溶劑，又避免色譜系統(tǒng)受到污染。

3.2樣品制備方法的選擇 本品為水溶液，但乙醚在水中溶解性較差，不符合《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版四部通則[9]項(xiàng)下有機(jī)溶劑對(duì)照品應(yīng)在溶劑中完全溶解的要求。因乙醇與乙醚在DMF中具有良好的溶解性，故本實(shí)驗(yàn)采用50%DMF溶液為溶劑，可以保證對(duì)照品溶液的濃度準(zhǔn)確，且該溶劑對(duì)待測(cè)的兩種成分并無(wú)干擾，該方法專屬性、準(zhǔn)確性和重復(fù)性良好。