張 齊，比拉力·艾山，李勝忠，布麗布麗汗，黃淑萍，艾力亞木·吐爾袞

（新疆農(nóng)業(yè)大學動物科學學院，新疆 烏魯木齊 830052）

新疆裸重唇魚（Gymnodiptychus dybowskii）隸屬鯉形目（Cypriniformes）、鯉科（Cyprinidae）、裸重唇魚屬（Gymnodiptychus），俗稱石花魚、裸黃瓜魚[1]。國內(nèi)主要分布于新疆天山北坡準噶爾盆地各水域和伊犁河流域；國外見于中亞地區(qū)錫爾河、巴爾喀什湖支流上游等水體[2]。新疆裸重唇魚是一種高山冷水性經(jīng)濟魚類，常見于海拔600～2000m的高山河流水域，其生活水體一般水質(zhì)清澈、溶氧高且水溫低[2]，是伊犁河水系中具有代表性的土著種和生態(tài)敏感種[1，3]。近幾十年來，由于過度捕撈、水利工程建設、增殖放流缺失等人為因素，導致伊犁河水系的新疆裸重唇等土著魚類的種群資源日趨枯竭，種群數(shù)量已極其稀少，2004年和2019年新疆裸重唇魚兩次被新疆維吾爾自治區(qū)人民政府列為Ⅰ類保護動物[3]。因此，盡快開展新疆裸重唇魚繁殖方面的相關研究，促進該保護魚類的增殖放流，對于該魚資源的保護和養(yǎng)殖開發(fā)具有重要意義。

本研究擬對新疆裸厚唇魚的受精、原腸、晶體期、破膜等孵化中胚胎發(fā)育的4個關鍵階段進行觀察，旨在掌握新疆裸厚唇魚胚胎發(fā)育的規(guī)律，為新疆裸厚唇魚繁殖時受精率、發(fā)眼率和孵化率的提高提供數(shù)據(jù)支撐和技術指導。

1 材料與方法

1.1 親魚來源

本研究所用新疆裸重唇魚親魚采自新疆伊犁河新源縣-恰甫其海水庫河段。雌魚體長范圍15～25cm，平均體長18.6 cm；雄魚體長范圍4.5～8.0 cm，平均體長5.5cm。

1.2 孵化設施

平列式孵化盤材質(zhì)為玻璃鋼，規(guī)格為60cm×40 cm×20 cm

1.3 受精與孵化

本研究采用干法人工授精，雌雄比為2∶1或3∶1，精卵混合后攪拌和漂洗，于平列式孵化盤靜水孵化，孵化水溫破膜期前控制在13℃，破膜期控制在15℃，水體溶氧為8.4mg/L，NH3-N≤0.2mg/L，每天換水2次。

1.4 胚胎發(fā)育觀察

所得受精卵使用顯微鏡觀察，并及時用麥克奧迪SK－200型顯微鏡進行拍攝，記錄不同孵化時間內(nèi)胚胎發(fā)育各階段的形態(tài)變化。本試驗分為5批次進行，各批次胚胎每天觀察1次，以所觀察樣本中有50%表現(xiàn)出相應發(fā)育期特征為標準作為記錄時間。

2 結果與分析

2.1 胚胎發(fā)育

本研究觀察和記錄到了新疆裸重唇魚胚胎發(fā)育的4個關鍵階段：受精卵期、原腸期、晶體期、破膜期。在破膜期前孵化水溫13 ℃，破膜期孵化水溫15℃的條件下，新疆裸重唇魚魚苗孵化需要192h，平均孵化積溫為2 516℃·h。各發(fā)育階段所需積溫見表1。

表1 新疆裸重唇魚胚胎發(fā)育關鍵階段時程

2.1.1 受精卵

新疆裸重唇魚的卵粒呈淡黃色、透明。受精后的合子緊靠卵膜（見圖1a）。

從卵子受精到合子出現(xiàn)所需時間為0～12 h，所需積溫為78.0℃·h（見表1）。

2.1.2 原腸期

從新疆裸重唇魚胚層下包至1/3以上時的原腸早期開始，到胚層下包至3/4時的原腸晚期結束（見圖1b），所需時間為48～60 h，平均累計積溫為702.2 ℃·h（見表1）。

2.1.3 晶體期

新疆裸重唇魚胚胎的眼杯口處出現(xiàn)圓形的晶體且輪廓清晰，顏色較暗，為晶體期（見圖1c），所需時間為120～130 h，平均累計積溫為702.2℃·h（見表1）。

2.1.4 破膜期

受精163～168h時新疆裸重唇魚胚體扭動幅度大，胚體轉(zhuǎn)動頻繁，表明即將進入破膜期。水溫從13℃緩慢升高至15℃，促進胚體轉(zhuǎn)動破膜（見圖1c）。破膜時從頭部開始，或尾部開始，此時平均孵化積溫累計達到2516.1℃·h（見表1）。

圖1 新疆裸重唇魚胚胎發(fā)育關鍵階段

表2 新疆裸重唇魚人工孵化結果

2.2 孵化結果

從表2可以看出，本研究新疆裸重唇魚的平均孵化率為67.3%±3.9%。

3 討論

3.1 關于新疆裸重唇魚胚胎發(fā)育關鍵階段的認識

國內(nèi)外關于魚類胚胎發(fā)育關鍵階段的研究已有許多報道。覃寶利[4]等在觀察大鱗鲃胚胎發(fā)育的受精卵期時，指出正常受精卵進入低囊胚期時囊胚變低，細胞界限看不清；異常受精卵或未受精卵的胚盤也會變低，初看起來類似正常受精卵的低囊胚期。焦文龍[5]指出，當虹鱒胚胎發(fā)育至發(fā)眼期時，胚胎對外界環(huán)境因素的變化不敏感，是運輸?shù)陌踩?。Cмирнова[6]認為，魚類胚胎破膜期缺氧會導致破膜過早，降低仔魚的存活力。

本研究發(fā)現(xiàn)，新疆裸重唇魚受精卵期質(zhì)量好的精子卵子受精后呈現(xiàn)出分裂球大小均等的卵裂，而質(zhì)量差的精子卵子受精后多呈現(xiàn)出分裂球大小不一的卵裂。均等卵裂的胚胎通常能夠順利度過原腸期，

而不均等卵裂胚胎很難度過原腸期。晶體期之前的胚胎對水體振動比較敏感，晶體期后的胚胎對水體振動有了較強的適應性。破膜期胚體頭部和尾部擺動是否有力對于破膜完成非常重要。新疆裸重唇魚胚胎發(fā)育的4個階段的存活狀況與以上國內(nèi)外相關研究結果基本一致。

3.2 關于提高新疆裸重唇魚孵化率的4項有效措施

受精卵期是胚胎發(fā)育的起始時期，也是孵化的首要階段，該階段的安全度過一是與親魚的規(guī)格、健康和營養(yǎng)狀況有關，二是與人工授精時干燥避光無血尿污染的正確操作有關。規(guī)格偏小親魚的精子卵子成熟度偏小，規(guī)格偏大親魚的精子卵子趨向老化；健康差、營養(yǎng)不良親魚的精子卵子質(zhì)量差、畸形率高；人工授精時器皿不干燥、避光不夠、精子和卵子被血尿體液污染，則會導致受精前精子的失活，以及光線照射傷害精子和卵子的DNA結構。原腸期是胚胎發(fā)育的第二個關鍵階段。質(zhì)量好的精子和卵子受精后，往往在提供合適的溶氧、水溫、pH、氨氮等水質(zhì)條件時，都能正常度過原腸期階段的胚胎發(fā)育，而質(zhì)量差、畸形率高的精子和卵子即便是能夠完成受精，也很難度過原腸期的胚胎發(fā)育。對于該階段死亡的胚胎要及時撿出，避免死亡胚胎污染孵化水體和引起水霉病的發(fā)生，該階段要減少孵化水體振動。晶體期是胚胎發(fā)育的第三個關鍵階段。此時新疆裸重唇魚胚胎發(fā)育的器官結構基本形成，胚胎對水體的振動也有了一定的適應性，苗種移殖、出售、運輸可以在此階段進行，但要注意水體的溶氧、水溫、pH、氨氮等水質(zhì)條件。本研究發(fā)現(xiàn)，新疆裸重唇魚的發(fā)眼期本應在晶體期出現(xiàn)，但實際上該魚的發(fā)眼期即眼球色素出現(xiàn)是在破膜期之后的某個時間，這一點與多數(shù)魚類的胚胎發(fā)育完全不同，這可能與該魚長期生活于高海拔水域的卵石隱蔽物下有關。

破膜期是胚胎發(fā)育的第四個關鍵階段。此時新疆裸重唇魚胚體轉(zhuǎn)動頻繁，但無法迅速破膜而出，導致憋死和悶死的胚胎也不在少數(shù)。本研究證實，采用破膜期適當升溫的方法，可以激發(fā)新疆裸重唇魚胚胎的興奮性，有利于促進該魚胚胎迅速完成頭部或尾部的擺動，最終實現(xiàn)順利破膜，提高孵化率。

因此，在新疆裸重唇魚魚苗孵化階段，采取下述4項措施：（1）強化親魚的產(chǎn)前培育，掌握正確人工授精方法；（2）及時撿出死亡胚胎，減少振動；（3）注意孵化水體的溶氧、水溫、pH、氨氮等水質(zhì)條件保持；（4）破膜期適當升溫，可有效提高新疆裸重唇魚胚胎發(fā)育成活率。