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        原子吸收分光光度法間接測定甘氨酸的研究

        2019-06-13 00:07:04王傳嶺張雅倩
        山東化工 2019年10期
        關(guān)鍵詞:氫氧化銅甘氨酸光度

        王傳嶺,于 敏,張雅倩

        (嘉應(yīng)學(xué)院 醫(yī)學(xué)院,廣東 梅州 514000)

        甘氨酸又名氨基乙酸,是結(jié)構(gòu)最簡單的氨基酸,他是人體半必需氨基酸,是人體抗氧化劑谷胱甘肽的組成氨基酸,可用于醫(yī)藥、食品添加劑,但是,當(dāng)人體攝入量過多時,會破壞人體對氨基酸的吸收平衡,影響健康[1]。甘氨酸的測定方法有離子色譜法[2]、氣相色譜法[3]、液相色譜法[4]、毛細(xì)管電泳法[5]等。

        采用原子吸收分光光度法間接測定氨基酸曾有報道,如孫智敏等[6]利用磷酸銅懸浮液與氨基酸反應(yīng),形成銅配合物,測定谷氨酸的含量,胡寶祥[7]等利用硫化鋅懸浮液與氨基酸反應(yīng),形成鋅配合物,測定色氨酸含量,等等,本文采用氫氧化銅懸浮液與甘氨酸反應(yīng),間接測定甘氨酸含量。

        1 實(shí)驗(yàn)部分

        1.1 儀器和試劑

        A3原子吸收分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司),MIMG-CHE24MV超純水機(jī)(法國Merck Millipore公司);

        甘氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:準(zhǔn)確稱取分析純甘氨酸0.100 g,溶解后轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中,定容,得到濃度為1 mg/mL的甘氨酸的標(biāo)準(zhǔn)溶液。氫氧化鈉、鹽酸、氫氧化銅等試劑均為分析純。

        1.2 儀器工作條件

        波長:324.7 nm;光譜寬帶:0.4 nm;工作燈電流:3.0 mA;負(fù)高壓:300.0 V;燃燒器高度5mm。

        1.3 方法原理

        利用甘氨酸在一定條件下可以與氫氧化銅解離的銅離子發(fā)生絡(luò)合反應(yīng),定量的形成配合物,將溶液中多余的氫氧化銅沉淀分離后,測定上層清液中的總銅含量,即可間接測定甘氨酸的含量。

        1.4 實(shí)驗(yàn)方法

        移取一定量的甘氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液,加入一定量氫氧化銅懸浮液,混合均勻后,室溫下振蕩反應(yīng)10min,然后離心分離,吸取上層清液,在原子吸收分光光度計(jì)上,噴入空氣-乙炔火焰,在324.7nm波長下測定吸光度。

        2 結(jié)果與討論

        2.1 氫氧化銅用量選擇

        氫氧化銅的用量對吸光度有一定的影響,結(jié)果如圖1所示,可以看出,隨著氫氧化銅的用量增加,參與絡(luò)合反應(yīng)的銅離子也增加,甘氨酸能與氫氧化銅解離的銅離子發(fā)生絡(luò)合反應(yīng),故銅離子的吸光度呈上升趨勢。氫氧化銅的用量超過10 mg時,測得銅離子的吸光度基本不變,原因可能是當(dāng)氫氧化銅的用量超過10 mg時,此時的絡(luò)合反應(yīng)已經(jīng)到達(dá)飽和狀態(tài),因此,本實(shí)驗(yàn)選擇氫氧化銅的用量為10 mg。

        圖1 氫氧化銅用量與吸光度的關(guān)系

        2.2 工作曲線選擇

        恒定氫氧化銅的用量,其它條件不變,隨著甘氨酸溶液濃度的增加,甘氨酸能夠絡(luò)合更多的銅離子,因此測得銅的吸光度也隨之增加。當(dāng)甘氨酸溶液濃度為0~10 μg/mL時,甘氨酸與氫氧化銅有線性關(guān)系,但斜率太低,甘氨酸溶液濃度在10~100 μg/mL和100 ~600μg/mL的范圍內(nèi),有明顯的線性關(guān)系,本實(shí)驗(yàn)的選擇甘氨酸的濃度為10~100 μg/mL進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn),在該濃度范圍內(nèi),線性回歸方程為:A=0.0067C+0.0391,其中,A為吸光度,C為甘氨酸的濃度μg/mL, 相關(guān)系數(shù)R2=0.988,結(jié)果見圖2。

        圖2 甘氨酸濃度與吸光度關(guān)系

        2.3 pH值的影響

        用HCl和NaOH溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)溶液的pH值,在不同pH值測定甘氨酸濃度與吸光度的關(guān)系,結(jié)果如圖3、表1所示。在酸性條件下,線性關(guān)系均低于0.6,原因在于氫氧化銅會與酸發(fā)生中和反應(yīng),溶解度增大,導(dǎo)致線性關(guān)系不明顯;在堿性條件下,隨著pH值升高,線性關(guān)系越來越差,且吸光度越來越小,這可能是因?yàn)樵趬A性條件下,絡(luò)合-沉淀平衡向著沉淀反應(yīng)方向進(jìn)行,因此甘氨酸合銅離子濃度降低,吸光度減小,綜合比較, pH值=7時,更加有利于間接測定甘氨酸含量。

        圖3 pH值對吸光度的影響

        表1 不同pH值下甘氨酸與氫氧化銅反應(yīng)的線性情況

        表1(續(xù))

        2.4 共存離子的影響

        2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

        移取10mL 100μg/mL的甘氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液,按照實(shí)驗(yàn)方法重復(fù)8次,其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.9%,精密度良好。

        2.6 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

        配制不同濃度的甘氨酸溶液為測試樣品,分別向其中加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液,進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn),計(jì)算回收率,回收率在90.7%~107.4%之間。

        3 結(jié)論

        本文利用氫氧化銅與甘氨酸之間的絡(luò)合反應(yīng),采用原子吸收分光光度法間接測定甘氨酸的含量,測定方法操作簡便,實(shí)驗(yàn)條件下,線性關(guān)系良好,精密度高,可以用于甘氨酸含量的測定。

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