齊興柱 汪軍 劉磊

摘? 要? 本研究克隆了尖孢鐮刀菌古巴專化型4號生理小種（Fusarium oxysporum f. sp. cubense race 4， Foc4）轉(zhuǎn)錄因子FoSkn7一個候選的下游基因，結(jié)果表明該基因cDNA編碼序列全長1737 nt，編碼一個含578個氨基酸殘基的蛋白質(zhì)。對其編碼的蛋白進(jìn)行了結(jié)構(gòu)域和進(jìn)化分析，結(jié)果表明該蛋白質(zhì)含有脅迫誘導(dǎo)蛋白（stress-in-ducible protein-1， STI1）結(jié)構(gòu)域和多個三角形4肽重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域（tetratricopeptide repeat， TPR）。該蛋白質(zhì)與尖孢鐮刀菌番茄?；偷牧姿峄瘧?yīng)激誘導(dǎo)蛋白1（STIP1）親緣關(guān)系最近，因此初步將其確定為Foc4的磷酸化應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白并命名為FoSTIP1。采用相對熒光定量PCR方法分析了該基因在野生型B2菌株入侵香蕉苗根部及在外源H2O2誘導(dǎo)情況下的表達(dá)變化，也分析了FoSKN7基因缺失突變體中該基因在外源H2O2誘導(dǎo)情況下的表達(dá)。結(jié)果表明在入侵香蕉苗根部及在外源H2O2誘導(dǎo)情況下，B2菌株中的FoSTIP1表達(dá)均有上調(diào)，而FoSKN7基因缺失突變體中FoSTIP1即使有H2O2誘導(dǎo)，其表達(dá)也遠(yuǎn)低于B2菌株中的FoSTIP1。推測FoSTIP1可能是FoSkn7的靶基因并參與了Foc4抗外源氧化脅迫。

關(guān)鍵詞? 尖孢鐮刀菌古巴?；?號生理小種;磷酸化應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白;表達(dá)特性

中圖分類號? S432.4? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼? A

當(dāng)細(xì)胞面臨各種環(huán)境脅迫時，細(xì)胞內(nèi)熱休克蛋白基因被激活并表達(dá)，導(dǎo)致熱休克蛋白大量產(chǎn)生。熱休克蛋白主要作為分子伴侶參與到蛋白質(zhì)的折疊、轉(zhuǎn)運及組裝等過程，能恢復(fù)或加速清除細(xì)胞內(nèi)已變性的蛋白質(zhì)進(jìn)而穩(wěn)定細(xì)胞結(jié)構(gòu)[1]。近年來的研究表明，分子伴侶如Hsp70和Hsp90生物功能的發(fā)揮受到各種輔助伴侶分子的調(diào)控。磷酸化應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白（stress-inducible protein 1， STIP1）是迄今為止研究最為廣泛的輔助伴侶分子，也被稱為熱休克蛋白70/90組織蛋白[heat shock protein （HSP） 70/90 organizing protein， HOP]，是一個62.6 ku蛋白，有9個三角形4肽重復(fù)結(jié)構(gòu)域和一個核定位信號（NLS）[2]。該蛋白能夠直接與Hsp70和Hsp90相結(jié)合，并且作為連接體分子，把細(xì)胞質(zhì)中的Hsp70-client蛋白復(fù)合物轉(zhuǎn)運到Hsp90上[3]。STIP1的TRR結(jié)構(gòu)域在Hsp90伴侶機(jī)制中參與Hsp70和Hsp90的結(jié)合[4]。這種蛋白質(zhì)復(fù)合物參與了多種細(xì)胞過程，包括轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)折疊、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運、病毒復(fù)制、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞分裂[5-6]。核定位信號序列允許STIP1在細(xì)胞周期蛋白激酶的控制下從細(xì)胞質(zhì)運輸?shù)郊?xì)胞核[2]。

然而，作為一個熱休克蛋白的輔助伴侶分子，除了釀酒酵母中報道過STIP1[7]之外，目前在植物和真菌中，無論國內(nèi)還是國外的文獻(xiàn)中都未見關(guān)于STIP1的報道。

Foc4是香蕉枯萎病的強(qiáng)致病性病原菌，這種病原菌對海南省乃至我國香蕉種植業(yè)造成了重大影響。本實驗室在研究Foc4抗外源氧化脅迫的轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)過程中獲得了一個候選的cDNA片段與已報道STIP1基因高度同源[7]，同時發(fā)現(xiàn)在FoSkn7轉(zhuǎn)錄因子缺失突變體中，該基因的表達(dá)大幅下調(diào)。因此，筆者將該預(yù)測基因命名為FoSTIP1，并對其進(jìn)行了克隆鑒定和表達(dá)分析，為進(jìn)一步開展該類蛋白作用機(jī)理研究提供基礎(chǔ)。

1? 材料與方法

1.1? 材料

1.1.1? 實驗用菌株和香蕉苗? Foc4的野生型B2菌株分離自海南省樂東縣香蕉枯萎病病株，由中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護(hù)研究所提供。FoSKN7基因缺失突變體由本實驗室制備。袋裝巴西蕉（Musa AAA， Cavendish cv. Brazil）組培苗購自海南省儋州市組培中心。

1.1.2? 試劑、引物及培養(yǎng)基? 植物總RNA提取試劑盒，PCR Mix反應(yīng)混合物，反轉(zhuǎn)錄試劑盒[FastKing RT Kit （With gDNase）]和熒光定量PCR試劑盒[Talent qPCR PreMix （SYBR Green）]均為北京天根生化科技有限公司的產(chǎn)品。PCR引物（表1）由上海生工生物科技有限公司合成。真菌菌株的培養(yǎng)采用葡萄糖-馬鈴薯培養(yǎng)基（potato- glucose-agar medium， PDA; potato-glucose-dextrose broth medium， PDB）。香蕉苗采用自來水培養(yǎng)。

1.2? 方法

1.2.1? 菌株及香蕉苗培養(yǎng)方法? 為了提取H2O2處理的菌體總RNA，將Foc4野生型B2菌株及FoSKN7基因缺失突變體于PDB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)6 d，然后在超凈工作臺中用6層擦鏡紙過濾培養(yǎng)物并收集濾液（即孢子液）然后按孢子與液體PDB培養(yǎng)基為1∶50的比例將孢子液接種到新的PDB培養(yǎng)基中，28 ℃、120 r/min振蕩培養(yǎng)12 h，然后加入H2O2至終濃度10 μmol/mL，繼續(xù)振蕩培養(yǎng)5 h收集菌體，液氮研磨，提取總RNA。將袋裝香蕉組培苗轉(zhuǎn)入透明塑料杯中，自來水室溫培養(yǎng)10 d左右直到香蕉苗長出幼嫩的白根，再將苗轉(zhuǎn)入新的塑料杯，并加入如前所述培養(yǎng)12 h的B2菌株，繼續(xù)室溫放置24 h，收集菌體及香蕉苗根的混合物，液氮研磨，提取總RNA，檢測目的基因在病原菌入侵香蕉苗根部時的表達(dá)變化情況。為了檢測目的基因在FoSKN7基因缺失突變體菌株中的表達(dá)差異，突變體和B2菌株分別用H2O2（5和10 μmol/mL）處理5 h后再提取總RNA。

1.2.2? FoSTIP1基因組編碼區(qū)、啟動子和cDNA序列的克隆及生物信息學(xué)分析方法? 利用Foc4的FoSKN7基因缺失突變體菌株轉(zhuǎn)錄組信息獲得了1個表達(dá)下調(diào)明顯的熱休克蛋白基因的cDNA信息。利用該cDNA信息在NCBI網(wǎng)站查找同源序列的方法，獲得了一段與Foc4有較高同源性的水稻惡苗病菌（Fusarium fujikuroi IMI 58289 ）的基因組序列（GenBank登錄號： HF679023.1），以此序列為模板設(shè)計了2對引物（表1），分別用于PCR擴(kuò)增目的基因的基因組序列及其上游啟動子區(qū)的序列。利用其cDNA序列信息在其起始密碼子和終止密碼子附近設(shè)計2對引物（表1），并以10 μmol/mL H2O2誘導(dǎo)5 h的總RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板，采用鑲嵌PCR方法擴(kuò)增、克隆并測序Foc4的STIP1基因的cDNA序列。利用目的基因的cDNA序列預(yù)測的蛋白質(zhì)序列在NCBI中進(jìn)行結(jié)構(gòu)域分析并查找了其他物種中與該蛋白質(zhì)序列類似的蛋白。參考相關(guān)文獻(xiàn)[8-9]分析了啟動子序列中FoSkn7轉(zhuǎn)錄因子可能的結(jié)合位點。

所應(yīng)用的生物信息學(xué)分析軟件包括：NCBI blast在線軟件http：//blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast. Cgi;NCBI結(jié)構(gòu)域預(yù)測在線軟件CDD http：//www. ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi?；蚪Y(jié)構(gòu)在線預(yù)測軟件softberry：http：//linux1.softberry. com/。Clustal X軟件對Foc4的STIP1蛋白序列及所獲得的同源蛋白序列進(jìn)行多重序列比對，以鑒定它們之間的同源性;MEGA 10軟件對所獲得的序列構(gòu)建了鄰位相接的系統(tǒng)發(fā)育樹，并用Bootstrap方法（Bootstrap method; model： P-distance; 1000 replicates; seed=64238）對該樹進(jìn)行分析。

1.2.3? 實時熒光定量PCR分析基因表達(dá)? 按植物總RNA提取試劑盒說明書提取處理后菌株的總RNA，然后反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA第一鏈，利用熒光定量PCR試劑盒[Talent qPCR PreMix （SYBR Green）]進(jìn)行相對熒光定量PCR分析，所用引物為：5-STyg、3'-STyg，5-Actin、3-Actin（表1）。PCR反應(yīng)體系按照熒光定量PCR試劑盒說明書配制。PCR反應(yīng)在BIO-RAD公司的Mini OpticonTM Rreal-Time PCR System上進(jìn)行。PCR熱循環(huán)條件如下：94 ℃變性30 s;退火溫度設(shè)梯度溫度48～50 ℃，并退火15 s;72 ℃延伸15 s;然后讀取熒光值，重復(fù)40個循環(huán);最后從45～90 ℃，每隔0.2 ℃讀取溶解曲線熒光值，每讀數(shù)一次，停留2 s。運行完畢后，從Opticon Monitor 3.1軟件讀取C（t）值，以β-actin基因作為內(nèi)參對照，檢測目的基因在野生型菌株入侵香蕉苗以及H2O2處理時的表達(dá)水平時，采用2ΔC（t）法計算，檢測目的基因在FoSKN7基因缺失突變體菌株中的表達(dá)水平時，采用2ΔΔC（t）法計算目的基因的相對表達(dá)水平。

2? 結(jié)果與分析

2.1? FoSTIP1基因的克隆、序列分析及蛋白質(zhì)產(chǎn)物結(jié)構(gòu)分析

在篩選Foc4抗外源氧化脅迫的功能基因的過程中獲得了一個候選基因（命名為FoSTIP1）的cDNA片段，通過輸入Genbank進(jìn)行blast比對，發(fā)現(xiàn)與水稻惡苗病菌（Fusarium fujikuroi IMI 58289，基因組登錄序列號：HF679023.1）高度同源。因此，以該水稻惡苗病菌同源序列為模板，設(shè)計引物擴(kuò)增成功獲得了FoSTIP1的基因組編碼區(qū)序列及上游啟動子序列，其中，基因組編碼區(qū)序列的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物長2113 nt，上游啟動子序列PCR擴(kuò)增產(chǎn)物長2221 nt，2個DNA片段部分重疊，測序后經(jīng)序列比對分析，最終鑒定該基因組編碼區(qū)序列1902 nt， 上游啟動子序列1501 nt。經(jīng)與水稻惡苗病菌基因組相應(yīng)序列比對，同源性達(dá)90%，將該序列遞交到GenBank，獲得登錄序列號：MG742355。

將上述克隆及測序獲得的FoSTIP1基因組序列信息輸入到softberry基因結(jié)構(gòu)預(yù)測網(wǎng)站，選擇了4個物種模式（Fusraium， Glarea_lozoyensis， Grosmannia_clavigera和Fusraiumgraminearum）預(yù)測轉(zhuǎn)錄序列，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以前3個物種模式為參照，預(yù)測的轉(zhuǎn)錄起始位點存在差異，但參照3個物種模式均預(yù)測到一個長1737 nt的ORF，編碼一個由578個氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)，預(yù)測該蛋白質(zhì)等電點pI=5.50，分子量為64.35127 ku，將該ORF序列與FoSTIP1（轉(zhuǎn)錄組測序編號為Gene5608）的cDNA序列進(jìn)行BLAST比對，結(jié)果完全相同。利用該ORF序列，在其起始密碼子和終止密碼子附近設(shè)計引物（表1），并以10 μmol/mL H2O2誘導(dǎo)5 h的總RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板，PCR擴(kuò)增、克隆及測序獲得了該基因ORF的cDNA序列。經(jīng)BLAST比對發(fā)現(xiàn)該ORF的cDNA序列與預(yù)測的cDNA序列一致，其長度為1737 nt。將該序列遞交到GenBank，獲得登錄序列號：MG742356。將以Fusraium物種模式作參考預(yù)測的轉(zhuǎn)錄序列與前面得到的上游啟動子序列及基因組編碼區(qū)序列比對，發(fā)現(xiàn)FoSTIP1在基因組上有4個外顯子，3個內(nèi)含子（圖1）。其中，內(nèi)含子1長59 nt，內(nèi)含子2為53 nt，內(nèi)含子3長52 nt。

FoSTIP1的結(jié)構(gòu)域分析表明C末端含有一個典型的脅迫誘導(dǎo)蛋白（stress-in-ducible protein-1，STI1）結(jié)構(gòu)域，多個三角形4肽重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域（tetratricopeptide repeat，TPR）（圖2）。

筆者搜索了NCBI的基因組數(shù)據(jù)庫，獲得了其他真菌中11個磷酸化應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白1的蛋白序列。將所獲得的蛋白序列與我們克隆獲得的Foc4的FoSTIP1的蛋白序列一起用MEGA7.0 軟件構(gòu)建了鄰位相接樹（圖3）。進(jìn)化樹分析表明，該蛋白質(zhì)與尖孢鐮刀菌番茄專化型的磷酸化應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白1（STIP1）親緣關(guān)系最近（圖3）。

2.2? FoSTIP1在外源氧化脅迫及入侵香蕉苗根部時的表達(dá)

在前期工作中，我們分別對Foc4在H2O2 （10 μmol/mL）處理5 h及入侵香蕉苗根部24 h的B2菌株進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測序，數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，在未經(jīng)外源H2O2處理的B2菌株樣品中，檢測到FoSTIP1轉(zhuǎn)錄本為2037，而經(jīng)外源H2O2（10 μmol/mL）處理5 h的B2菌株樣品中，F(xiàn)oSTIP1轉(zhuǎn)錄本為5190，二者比較，log2（FC）=1.047286，表達(dá)上調(diào)。log2（FC）表示兩樣品間基因轉(zhuǎn)錄本差異倍數(shù)（Fold Change）的對數(shù)值，用于衡量表達(dá)量差異的大小，log2（FC）>0即為表達(dá)上調(diào)。在入侵香蕉苗根部24 h的B2菌株樣品中，檢測到FoSTIP1轉(zhuǎn)錄本為4197，與未經(jīng)處理的B2菌株樣品中FoSTIP1轉(zhuǎn)錄本數(shù)量比較，log2（FC）=1.042924，表達(dá)上調(diào)。

為了驗證轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)的可靠性，采用半定量RT-PCR技術(shù)分析了上述2種條件下FoSTIP1的表達(dá)。分析以β-actin基因作為內(nèi)參對照，采用2ΔC（t）法計算。結(jié)果如圖4所示，與轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果一致。其中，在外源H2O2（10 μmol/mL）處理5 h的B2菌株中FoSTIP1的表達(dá)量約為對照樣品中的2.201倍，入侵香蕉苗根部24 h的B2菌株中，F(xiàn)oSTIP1的表達(dá)量約為對照樣品中的1.878倍（圖4）。

2.3? FoSTIP1調(diào)控機(jī)理的初步分析

分析Foc4的FoSKN7基因缺失突變體菌株轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在FoSKN7基因缺失突變體菌株中檢測到FoSTIP1轉(zhuǎn)錄本為287，而野生型B2菌株樣品中，F(xiàn)oSTIP1轉(zhuǎn)錄本為2217，二者比較，log2（FC）= 2.97505，表達(dá)下調(diào)顯著。半定量RT-PCR分析結(jié)果如圖5所示，在用5 μmol/mL H2O2處理5 h的情況下，F(xiàn)oSKN7基因缺失突變體中FoSTIP1的相對表達(dá)量約為野生型B2菌株2/3，在用10 μmol/mL H2O2處理5 h的情況下，F(xiàn)oSKN7基因缺失突變體中FoSTIP1的相對表達(dá)量約為野生型B2菌株1/3。表明即使有外源氧化脅迫存在的情況下的情況下，F(xiàn)oSKN7基因缺失突變體中FoSTIP1的表達(dá)量相對B2菌株也大幅下調(diào)。

He等[8]報道了Skn7能結(jié)合到其靶基因（氧化脅迫應(yīng)答基因）啟動子區(qū)特異結(jié)合位點（5'-GGCNNGGC-3'， 5'-GGCNGGC-3'， 5'-GGCN A A-3'， 或5'-GGCNNAGA-3'）。Morgan等[9]也報道了Skn7 能結(jié)合到其靶基因啟動子區(qū)結(jié)合位點（5'-CCG AAA-3'）。參考釀酒酵母中Skn7轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合的堿基序列[10-11]，我們進(jìn)一步分析了FoSTIP1基因上游的啟動子序列。結(jié)果發(fā)現(xiàn)FoSTIP1基因上游的啟動子含有2個可能的Skn7轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合靶位點：5'-CCGAAA-3'（-1490），5'-GGCGAGA-3' （-770）（圖6）。

3? 討論

植物對病原菌入侵的最快防衛(wèi)反應(yīng)之一就是活性氧的急促釋放，稱為氧化爆發(fā)（oxidative burst），這種現(xiàn)象在植物抵抗病原菌入侵過程中具有重要作用。前期的研究工作中，我們發(fā)現(xiàn)Foc4在入侵位點會遭遇寄主細(xì)胞因活性氧迸發(fā)而產(chǎn)生的強(qiáng)氧化脅迫環(huán)境。因此，分別對H2O2處理過的以及香蕉苗根誘導(dǎo)過的Foc4野生型B2菌株，進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測序，以探究Foc4遭遇外源氧化脅迫時的分子應(yīng)對機(jī)制。同時，還對一個Foc4的FoSKN7基因缺失突變體進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測序。發(fā)現(xiàn)FoSKN7PCR反應(yīng)進(jìn)行3次重復(fù)。

基因缺失突變體中一個熱休克蛋白基因（磷酸化應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白1，F(xiàn)oSTIP1）表達(dá)下調(diào)顯著。因此對該基因進(jìn)行了克隆鑒定，基因結(jié)構(gòu)分析，啟動子分析。并利用實時熒光定量PCR方法對其在外源氧化脅迫存在條件下及菌株入侵香蕉苗根部條件下的表達(dá)進(jìn)行了分析?？紤]到熱休克蛋白作為細(xì)胞內(nèi)的保護(hù)性蛋白，是一類提高細(xì)胞應(yīng)對外界環(huán)境脅迫能力的蛋白質(zhì)。熱休克蛋白能與很多蛋白質(zhì)分子結(jié)合，發(fā)揮多種生理功能：幫助氨基酸鏈折疊成正確的三維結(jié)構(gòu)，清除受損而無法正確折疊的氨基酸鏈，護(hù)送蛋白分子尋找目標(biāo)分子以免受到其他分子的干擾等，從而減輕各種極端環(huán)_? 標(biāo)記為Skn7的可能結(jié)合靶位點，其中“ATG ”為FoSTIP1開放閱讀框的起始密碼子。

境條件如高溫、干旱、強(qiáng)氧化脅迫、UV線照射等對細(xì)胞的損害。所以，當(dāng)細(xì)胞面臨各類環(huán)境脅迫時，第一反應(yīng)就是引起多種熱休克蛋白表達(dá)上調(diào)[11]。與此相一致，本研究中FoSTIP1在外源氧化脅迫及香蕉苗根部誘導(dǎo)條件下的表達(dá)均大幅上調(diào)。在高等哺乳動物體內(nèi)，STIP1也是一個重要的分子伴侶，其兩端分別與Hsp70和Hsp90相連，對于腫瘤細(xì)胞發(fā)生、脅迫反應(yīng)和細(xì)胞增殖分化等均具有重要的調(diào)節(jié)作用。目前，STIP1作為卵巢癌發(fā)生的一種新的標(biāo)志物被廣泛研究和報道[12-14]。但是在植物和真菌中，除酵母以外未見有關(guān)于STIP1功能研究的報道。

考慮到Skn7轉(zhuǎn)錄因子是一個調(diào)控多種熱休克蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄因子，其蛋白質(zhì)包含一個N-末端的熱休克轉(zhuǎn)錄因子DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（heat-shock transcription factor-like DNA-binding domain）和一個C-末端的應(yīng)答調(diào)節(jié)受體結(jié)構(gòu)域（response regulator receiver domain）[15]，而FoSKN7的基因缺失突變體中FoSTIP1的表達(dá)大幅下調(diào)以及FoSTIP1啟動子區(qū)存在的可能的FoSkn7結(jié)合位點表明FoSTIP1是FoSkn7可能的靶基因。

綜上所述，本研究的結(jié)果暗示FoSTIP1可能參與了Foc4抗外源氧化脅迫，原因如下：1、熒光定量PCR表明，在有H2O2誘導(dǎo)的情況下FoSTIP1基因表達(dá)上調(diào)。2、由于Foc4在入侵位點會遭遇寄主細(xì)胞因活性氧迸發(fā)而產(chǎn)生的強(qiáng)氧化脅迫環(huán)境，香蕉苗誘導(dǎo)的情況下FoSTIP1基因表達(dá)上調(diào)可能與寄主細(xì)胞中活性氧（ROS）物質(zhì)的含量增加有關(guān)。3、酵母和多種絲狀真菌中的研究表明Skn7轉(zhuǎn)錄因子是參與抗外源氧化脅迫信號通路的的重要一環(huán)[10]，而轉(zhuǎn)錄組測序、熒光定量PCR及啟動子分析均證明FoSTIP1是FoSkn7的可能的靶基因。熱休克蛋白質(zhì)的主要功能即為參與生物細(xì)胞應(yīng)對外界環(huán)境脅迫[16]，而作為一種熱休克蛋白質(zhì)，F(xiàn)oSTIP1也可能參與這些過程。

參考文獻(xiàn)

Shraddha T， Raman T， Jata S. Role of heat-shock proteins in cellular function and in the biology of fungi[J]. Biotechnology Research International， 2015， 2015（2）： 1-11.

Longshaw V M， Chapple J P， Balda M S， et al. Nuclear translocation of the Hsp70/Hsp90 organizing protein mSTI1 is regulated by cell cycle kinases[J]. Journal of Cell Science， 2004， 117（5）： 701-710.

李? 巖， 李建遠(yuǎn). 磷酸化應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白的研究進(jìn)展[J]. 中外醫(yī)學(xué)研究， 2011， 9（12）： 116-118.

Odunuga O O， Longshaw V M， Blatch G L. Hop： more than an Hsp70/Hsp90 adaptor protein[J]. Bioessays， 2004， 26（10）： 1058-1068.

Johnson B D， Schumacher R J， Toft D O， et al. Hop modulates Hsp70/Hsp90 interactions in protein folding[J]. Journal of Biological Chemistry， 1998， 273（6）： 3679-3686.

Zanata S M， Lopes M H， Juliano M A， et al. Stress-inducible protein 1 is a cell surface ligand for cellular prion that triggers neuroprotection[J]. The EMBO Journal， 2002， 21（13）： 3307-3316.

Nicolet C M， and Craig E A. Isolation and characterization of STI1， a stress-inducible gene from Saccharomyces cerevisiae [J]. Molecular Cellular Biology， 1989， 9（9）： 3638-3646.

He X J， Fassler J S. Identification of novel Yap1p and Skn7p binding sites involved in the oxidative stress response of Saccharomyces cerevisiae[J]. Molecular Microbiology， 2005， 58（5）： 1454-1467.

Morgan B A， Banks G R， Toone W M， et al. The Skn7 response regulator controls gene expression in the oxidative stress response of the budding yeast Saccharomyces cerevisiae[J]. The EMBO Journal， 1997， 16（5） ： 1035-1044.

Hong S Y， Ludmila V R， John E L. Oxidative stress-related transcription factors in the regulation of secondary metabolism[J]. Toxins， 2013， 5（4）： 683-702.

Raitt D C， Johnson A L， Erkine A M， et al. The Skn7 response regulator of Saccharomyces cerevisiae interacts with Hsf1 in vivo and is required for the induction of heat shock genes by oxidative stress[J]. Molecular Biology of the Cell， 2000， 11（7）： 2335-2347.

Tsai C L， Tsai C N， Lai C H， et al. Secreted stress-induced phosphoprotein 1 activates the ALK2-SMAD signaling pathways and promotes cell proliferation of ovarian cancer cells[J]. Cell Reports， 2012， 2（2）： 283-293.

Chao A， Lai C H， Wang T H， et al. Tumor stress-induced phosphoprotein1 （STIP1） as a prognostic biomarker in ovarian cancer[J]. PLoS One， 2013， 8（2）： e57084.

Lopes M H， Hajj G N， Martins V R， et al. Interaction of cellular prion and stress-inducible protein 1 promotes neuritogenesis and neuroprotection by distinct signaling pathways[J]. The Journal of Neuroscience， 2005， 25（49）： 11330-11339.

Fassler J S， West A H. Fungal Skn7 stress responses and their relationship to virulence[J]. Eukaryotic Cell， 2011， 10（2）： 156-167.

Amit K V， Danish D， Chandan S， et al. Evolutionary conservation and emerging functional diversity of the cytosolic Hsp70： J protein chaperone network of Arabidopsis thaliana[J]. G3： Genes， Genomes， Genetics， 2017， 7 （6）： 1941-1954.