唐彩琰
摘 要:主要介紹塞內(nèi)卡病毒的致病性證據(jù)、免疫應答和診斷等。
關(guān)鍵詞:豬;塞內(nèi)卡病毒;水皰性疾病
3 塞內(nèi)卡病毒的致病性證據(jù)
9周齡和4月齡豬試驗性感染當代塞內(nèi)卡病毒毒株的結(jié)果顯示了該病毒與豬水皰病之間的關(guān)聯(lián)。在這兩項研究中,塞內(nèi)卡病毒的潛伏期均為4 d~5 d。在感染急性期,扁桃體是該病毒復制的主要部位之一。病毒血癥期短,持續(xù)7 d,接種后第3天血清中的塞內(nèi)卡病毒基因組拷貝可達到峰值(約1×106.5/mL),隨后病毒滴度不斷減小,直至30 d后檢測不到病毒。
塞內(nèi)卡病毒可引起豬的急性自限性水皰性疾病。接種豬在其鼻吻部、唇部和/或蹄部(尤其是在冠狀帶和/或趾間間隙)出現(xiàn)病變。試驗性感染塞內(nèi)卡病毒的豬的其他臨床表現(xiàn)包括嗜睡、跛行和厭食。感染期間可觀察到多病灶深部潰瘍和皮膚糜爛/擦傷,最終形成陳年病變。
試驗感染的豬僅在扁桃體、脾、淋巴結(jié)和肺上可見組織顯微鏡改變,淋巴組織有輕度到中度增生,多病灶輕度肺不張,淋巴細胞、血漿細胞和肺部巨噬細胞偶發(fā)彌漫性充血并伴有多病灶輕度血管周積聚。研究顯示塞內(nèi)卡病毒在組織中分布廣泛,在疾病感染的急性期,病毒RNA和感染性顆粒在肺、縱隔和腸系膜淋巴結(jié)、肝臟、脾臟、小腸和大腸以及扁桃體中均可檢測到。恢復期豬的不同器官(除肺、心臟和肝臟外)的塞內(nèi)卡RNA呈陽性,但在以后的感染中不能從這些組織中分離到活的病毒顆粒。
根據(jù)試驗研究,塞內(nèi)卡病毒可持續(xù)排毒28 d。該病毒可經(jīng)口腔、鼻腔分泌物和糞便排出。排毒高峰期出現(xiàn)在豬感染后1 d~5 d,相對于鼻腔分泌物和糞便而言,口腔分泌物中的病毒量更高。此外,口腔分泌物、糞便和鼻腔分泌物分別在21 DPI(感染后天數(shù)Days Postinfection,DPI)、10 DPI和7 DPI成功分離到塞內(nèi)卡病毒的感染性顆粒。自然和試驗性感染塞內(nèi)卡病毒的結(jié)果表明,感染了塞內(nèi)卡病毒的豬的口腔/鼻腔分泌物、糞便以及尿液都可能會通過使用相同設(shè)施的豬之間的接觸直接傳播病毒,或通過病毒污染環(huán)境間接傳播。然而,我們還需要進一步研究來證實這些分泌物/排泄物在田間條件下對塞內(nèi)卡病毒傳播的作用。
4 對塞內(nèi)卡病毒的免疫應答
目前,只有少數(shù)研究評價了宿主對塞內(nèi)卡病毒感染的免疫應答。這些研究表明,田間條件下受感染和未受感染的母豬以及長期接受試驗挑戰(zhàn)的育肥豬,塞內(nèi)卡病毒感染可誘導早期免疫反應。無論疾病的臨床表現(xiàn)如何,塞內(nèi)卡病毒感染后約5 d就可發(fā)生血清轉(zhuǎn)化。隨著中和抗體滴度增加,疾病的嚴重程度、組織病毒載量、病毒血癥和病毒脫落降低,這表明抗體反應可從體循環(huán)和大多數(shù)器官、排泄物和分泌物中逐漸清除塞內(nèi)卡病毒。
塞內(nèi)卡病毒特異性免疫球蛋白M(Immunoglobulin M,IgM)抗體的最大濃度持續(xù)約10 d(從5 DPI到15 DPI),隨后血清IgM濃度從21 DPI下降到無法檢測的滴度。相比之下,塞內(nèi)卡病毒特異性IgG應答出現(xiàn)較晚,21 DPI后有強積極應答。
自然感染塞內(nèi)卡病毒的豬其病毒抗體滴度不同,間接熒光抗體(Indirect Flurescent Antibody,IFA)試驗或病毒中和(Virus Neutralization,VN)試驗檢測到的滴度在160~2 880之間,但巴西臨床感染動物的VN試驗可檢測到更高的滴度(≥4 096)。
5 塞內(nèi)卡病毒診斷
目前許多診斷測試可用于檢測塞內(nèi)卡病毒感染和/或其與病變和疾病的關(guān)聯(lián)。除新一代測序技術(shù)(Next-generation Sequencing,NGS)外,傳統(tǒng)PCR和定量RT-PCR(qRT-PCR)分子檢測是最常用的技術(shù)。分子檢測,尤其是qRT-PCR,是任何水皰性疾病的金標準,因為這種方法快速、敏感且特異,能夠快速并準確地診斷水皰性疾病,包括從不同生物樣本中檢測塞內(nèi)卡病毒基因組。分子學檢測診斷塞內(nèi)卡病毒的一個缺點是,由于塞內(nèi)卡病毒感染的進程不同,不同生物樣本中病毒脫落和/或載量不同導致檢測結(jié)果不一致。因此,應收集多種樣本,包括血清、扁桃體、糞便、口腔和水皰液,通過分子檢測對塞內(nèi)卡病毒進行篩選。
目前可用的其他診斷工具包括免疫組化和原位雜交,這兩種方法分別用來鑒定組織樣本中的特定病毒抗原和核酸。不同研究組已成功使用這兩種技術(shù)診斷塞內(nèi)卡病毒相關(guān)疾病。雖然僅有組織病理學評價不能直接判定為塞內(nèi)卡病毒感染,但這項技術(shù)的結(jié)果可指導選擇適合的組織/器官樣本進行免疫組化和原位雜交分析。
間接和競爭性酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)、IFA和VN試驗均可用于豬塞內(nèi)卡病毒的抗體檢測篩選??贵w檢測分析的主要優(yōu)點是具有在流行病學研究、大規(guī)模診斷程序和/或流行病學監(jiān)測中處理大量樣本的能力,表明豬群過去有病毒暴露和/或存在史。
無論選擇何種檢測方法,在臨床上都難以區(qū)分豬塞內(nèi)卡相關(guān)疾病和經(jīng)典病毒性囊泡感染,尤其是口蹄疫。對于主要的生豬生產(chǎn)國,出現(xiàn)臨床病史和/或表明可能存在水皰性疾病的病變時,都需要進行完整的水皰性外來動物疾病調(diào)查,因為塞內(nèi)卡病毒感染可能會對快速報告豬口蹄疫產(chǎn)生不利影響?!酢?/p>
(待續(xù))
原題名:Update on senecavirus infection in pigs(英文)
原作者:Raquel A. Leme、Alice F. Alfieri和Amauri A. Alfieri(巴西)