于天龍

妊娠期糖尿?。╣estational diabete mellitus，GDM）可使產(chǎn)婦妊娠期高血壓疾病、胎膜早破等的幾率增加，且圍生期巨大兒，胎兒窘迫等的發(fā)生明顯高于正常孕婦[1]。GDM的發(fā)生與多種因素有關(guān)，包括一般因素（孕婦超重或肥胖、體重增長(zhǎng)過(guò)快、高齡、血清血脂水平等）[2-4]、遺傳因素、炎癥因子、脂肪因子（瘦素、脂聯(lián)素等）[5-7]。但是，GDM的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確。本文擬研究MTRR基因（rs1801394，rs1532268，rs162036）基因多態(tài)性與GDM易感性的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月—2018年6月來(lái)我院就診的孕婦60例作為研究對(duì)象，將孕婦分為GDM組（27例）和血糖正常組（33例）。根據(jù)國(guó)際妊娠糖尿病研究協(xié)會(huì)（IADPSG）推薦的GDM診斷標(biāo)準(zhǔn)為75 g OGGT：空腹血糖 ≥ 5.1 mmol/L；1小時(shí)≥10.0 mmol/L；2小時(shí)≥8.5 mmol/L。

1.2 血糖和血清HCY檢測(cè)

采集空腹靜脈血5 mL于BD真空生化管中，靜止10 min后離心15 min分離血清，在日立7600-020生化分析儀上進(jìn)行血糖和血清HCY水平檢測(cè)。

1.3 血清DNA提取

用EDTA抗凝管采集空腹靜脈血2 mL，進(jìn)行DNA提取，用凝膠電泳進(jìn)行質(zhì)量檢查。

1.4 多重PCR反應(yīng)

PCR引物序列見表1。

1.5 多重PCR產(chǎn)物純化

在20μl PCR產(chǎn)物中加入5 U SAP酶和2 U，Exonuclease I酶，37 ℃溫浴1 h，然后75 ℃滅活15 min。

1.6 連接反應(yīng)

連接引物：連接引物序列見表2。

1.7 測(cè)序

將連接產(chǎn)物在ABI3730XL測(cè)序儀上進(jìn)行測(cè)序，將ABI3730XL測(cè)序儀上收集的原始數(shù)據(jù)用 GeneMapper 4.1（AppliedBiosystems,USA） 分析。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用 SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，兩組間的基因型頻率和等位基因頻率的比較用 χ2檢驗(yàn)。孕婦基本資料及血清HCY 濃度采用兩個(gè)獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn), 以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 GDM組與非GDM組血糖及血清HCY水平結(jié)果

見表3。GDM組血清HCY水平明顯高于非GDM組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.037）。

2.2 基因分型結(jié)果

見圖1-9。rs1801394，rs1532268，rs162036各基因多態(tài)性GDM組和非GDM組比較無(wú)顯著差異。

3 討論

近年來(lái)，GDM的發(fā)生逐漸增多，關(guān)于GDM的研究亦逐漸增多，近年有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)GDM患者血清同型半胱氨酸（homocysteine，HCY）水平高于正常妊娠孕婦，且妊娠期糖尿病患者A2級(jí)血清HCY水平明顯高于A1級(jí)，而且，GDM患者血清高HCY者妊娠結(jié)局不良事件發(fā)生率明顯高于對(duì)照組，可見，血清Hcy水平與GDM及妊娠結(jié)局密切相關(guān)。

同型半胱氨酸（homocysteine，HCY）是一種含硫氨基酸，是蛋氨酸代謝過(guò)程中的重要產(chǎn)物，大量研究表明，GDM患者血清Hcy水平增高，是影響GDM妊娠結(jié)局的獨(dú)立因素[8]。HCY代謝受幾種關(guān)鍵酶：亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）、胱硫醚β合成酶（CBS）、蛋氨酸合成酶（MTR）及蛋氨酸合成酶還原酶（MTRR）[9]、葉酸、多種維生素共同作用。當(dāng)HCY代謝依賴的酶缺陷和（或）葉酸及B族維生素缺乏時(shí)，可引起高同型半胱氨酸血癥（hyperhomoeysteinemia，HHCY）。

表1 SNP位點(diǎn)PCR引物序列

表2 SNP位點(diǎn)連接引物序列

表3 兩組年齡、孕周、血糖及血清HCY水平（s）

表3 兩組年齡、孕周、血糖及血清HCY水平（s）

分組 n 年齡（歲） 孕周（周） 血糖（mmol/L） HCY（μmol/L）GDM組非GDM組P 值27 33-33±5 29±3 0.003 26±1 25±1 0.332 6.32±1.40 4.24±0.43 0.000 5.40±4.20 3.49±2.03 0.037

圖1-3分別為rs1801394（G/G），rs1801394（G/A）,rs1801394（A/A）基因

圖4-6分別為rs1532268（T/T），rs1532268（C/C），rs1532268（C/T）基因型

圖7-9分別為rs162036（G/G），rs162036（A/A），rs162036（G/A）基因

近年來(lái)，影響HCY代謝的酶引起廣大學(xué)者的重視。甲硫氨酸合成酶（MTR）是同型半胱氨酸代謝的關(guān)鍵酶，而蛋氨酸合成酶還原酶（MTRR）協(xié)同維生素B12用于維持甲硫氨酸合成酶（MTR）的還原活性。編碼蛋氨酸合成酶還原酶的基因位點(diǎn)變異不能維持甲硫氨酸合成酶（MTR）的活性，可引起血清Hcy升高。MTRR基因（rs1801394，rs1532268，rs162036）位點(diǎn)突變是常見的主要突變位點(diǎn)。近年來(lái)，關(guān)于MTRR基因多態(tài)性與胎兒先天缺陷，腦梗死，心血管疾病，兒童淋巴細(xì)胞白血病，多囊卵巢綜合征，神經(jīng)管畸形等疾病的相關(guān)研究較多[10-12]。而MTRR基因（rs1801394，rs1532268，rs162036）位點(diǎn)突變與妊娠糖尿病的關(guān)系，目前國(guó)內(nèi)外尚未見到報(bào)道。因此，本研究擬了解產(chǎn)婦HCY代謝酶相關(guān)基因MTRR基因（rs1801394，rs1532268，rs162036）的多態(tài)性，探討MTRR基因（rs1801394，rs1532268，rs162036）多態(tài)性與GDM易感性的關(guān)系。本研究結(jié)果顯示GDM組與非GDM組比較，GDM組血清HCY水平明顯高于非GDM組（P＜0.05），但rs1801394，rs1532268，rs162036各基因多態(tài)性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與GDM發(fā)生的易感性無(wú)明顯相關(guān)性（P＞0.05），但仍需擴(kuò)大樣本量進(jìn)行進(jìn)一步證實(shí)。