劉晶 李曉華 姜巖 張偉 董齊 劉宏斌 張昊 王鳳嬌

【摘 要】 目的：探討高尿酸血癥及亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）基因C677T位點多態(tài)性與中青年復發(fā)性腦梗死的關(guān)系。方法：2014年1月至2016年10月，選擇在齊醫(yī)三附院神經(jīng)內(nèi)科治療的140例中青年復發(fā)性腦梗死患者作為復發(fā)組，同時選擇同期首次發(fā)病的140例中青年腦梗死患者為首發(fā)組，采用聚合酶鏈反應-限制片段長度多態(tài)性法檢測分析MTHFR基因C677T位點多態(tài)性;采用高效液相色譜法測定血漿尿酸（UA）、同型半胱氨酸（Hcy）水平，采用全自動電化學發(fā)光免疫分析儀檢測血漿維生素B12、葉酸水平。結(jié)果：兩組患者血尿酸水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），但復發(fā)組血尿酸水平高于首發(fā)組，在MTHFR基因C677T位點的基因型分布比較中差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;與首發(fā)組比較，復發(fā)組患者T等位基因頻率升高（P<0.05）。復發(fā)組TT、CC基因型患者血漿Hcy水平明顯升高（P<0.05）;在兩組患者中血漿Hcy水平差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），同時兩組CT、CC基因型患者中維生素B12、葉酸比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;TT基因型的兩組患者維生素B12水平無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;TT基因型復發(fā)組患者血漿葉酸水平降低（P<0.05）。結(jié)論：MTHFR基因TT基因型是中青年復發(fā)性腦梗死的重要因素，TT基因型中青年復發(fā)性腦梗死患者存在高Hcy及低葉酸。高尿酸血癥與復發(fā)腦梗死發(fā)病有內(nèi)在聯(lián)系，是重要的危險因素。

【關(guān)鍵詞】 復發(fā)性腦梗死;亞甲基四氫葉酸還原酶;基因;高尿酸血癥

在臨床心腦血管疾病中，腦梗死為最常見的類型，3年復發(fā)率可以高達16.0%。因此復發(fā)性腦梗死具有疾病發(fā)生率高，以及復發(fā)率高等特點。通過查閱文獻發(fā)現(xiàn)，針對復發(fā)性腦梗死的臨床危險因素研究已經(jīng)日益成為熱點，高尿酸血癥逐漸出現(xiàn)在人們的視野中。而且有不少學者將分子生物技術(shù)以及人類基因組同時引入本研究領域。本研究針對本院收治的中青年復發(fā)性腦梗死患者分析血尿酸、亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）、基因C677T位點檢測，掌握高尿酸血癥以及MTHFR基因多態(tài)性與中青年腦梗死患者的發(fā)病關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性研究分析2014年1月至2016年10月，在齊齊哈爾醫(yī)學院神經(jīng)內(nèi)科收治的中青年復發(fā)性腦梗死患者140例作為復發(fā)組，同時選擇首次發(fā)病的140例中青年腦梗死患者為首發(fā)組。入選患者均符合《各類腦血管病診斷要點》[1]，并經(jīng)影像學檢查確診為腦梗死。復發(fā)性腦梗死診斷標準：原有

齊齊哈爾市科學技術(shù)計劃項目，項目名稱：中青年復發(fā)性腦梗死與亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性相關(guān)性研究，項目編號：SFGG-201513;齊齊哈爾醫(yī)學院院內(nèi)科研基金項目，項目名稱：中青年復發(fā)性腦梗死與高尿酸血癥及亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性相關(guān)性研究，項目編號：QY2016M-08

*李曉華為本文通訊作者

神經(jīng)癥狀及體征好轉(zhuǎn)或者消失，1個月后再次出現(xiàn)神經(jīng)癥狀或體征（同側(cè)或?qū)?cè)），并且影像學檢查確認有新發(fā)病灶，并排除其他原因。2000年WHO關(guān)于年齡段劃分標準[2]：青年18～44歲，中年45～59歲，本研究要求患者入組標準為18～59歲，平均（38.67±7.92）歲，所有患者均知情，簽署知情同意書，本研究得到齊齊哈爾醫(yī)學院附屬第三醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審批通過，可以進行本研究。

1.2 研究方法

入組患者在入院當日22∶00開始禁食，第2天08∶00空腹，采集3份肘靜脈血，裝入抗凝管，1管5mL，2管2mL，4℃冰箱保存待用。MTHFR基因測定方法：1）2mL靜脈血，3500r/min離心10min，半徑13.5cm。試劑盒采用人全血DNA（離心柱型，小量樣本，<1mL，編號GK1042，上海捷瑞公司生產(chǎn)），按操作說明書進行操作，-20℃環(huán)境下保存使用。2）PCR擴增：應用primer 5.0軟件設計PCR擴增引物，長度為655bp，PCR體系為25μL;95℃預變性5min，變性30s（94℃），復性45s（60℃），延伸1min（70℃），循環(huán)36次，最后延伸10min（72℃），在4℃時終止。3）RFLP分析：在20μL反應體系中加入2μL的酶切緩沖溶液，15μL限制性內(nèi)切酶，應用1μL的去離子水補足至20μL;37℃恒溫消化3h，檢測DNA的濃度和純度。

全部患者在次日清晨空腹采血8.0mL靜脈血，離心4.0mL，采用生化酶法檢測空腹血尿酸（UA），其余做常規(guī)血糖（FBG）、甘油三酯（TG）、膽固醇（CH）等檢查。UA正常范圍200～413μmol/L，超過413μmol/L診斷為高尿酸血癥。采集5mL靜脈血檢測同型半胱氨酸（Hcy），取血后30min在4℃下離心10min（r=13.5cm，3000r/min），-80℃下保存上層標本;采用液相色譜儀及熒光探測儀測定Hcy水平。

維生素B12和葉酸水平測定：靜脈血2mL，采用全自動電生化分析儀進行測定。

1.3 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料用%表示，采用χ2檢驗;計量資料采用（±s）表示，采用獨立樣本t檢驗比較，設定0.05為檢驗水準，（P<0.05）則差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料

各組患者在性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)以及生活史（吸煙、飲酒）方面比較差異不具有統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。詳見表1。

2.2 兩組各項指標比較

兩組各項指標比較，復發(fā)腦梗死組與首發(fā)腦梗死組血尿酸指標差異不具有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。但復發(fā)組血尿酸水平高于首發(fā)組。首發(fā)腦梗死組在血壓、血脂方面均明顯高于復發(fā)腦梗死組。見表2。

2.3 病例組血尿酸水平與其他因素相關(guān)性r值

2.4 高尿酸組與尿酸正常組比較

2.5 MTHFR基因C677T位點基因型分布及等位基因頻率比較

2.6 不同基因型血漿Hcy水平比較

2.7 血漿維生素B12、葉酸水平比較

不同基因型患者維生素B12、葉酸水平比較，CT、CC基因型患者維生素B12、葉酸水平比較無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;TT基因患者維生素B12水平比較無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;與首發(fā)組比較，復發(fā)組TT基因患者葉酸水平降低，具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表7。

3 討論

復發(fā)性腦梗死對人類危害極大，其病死率和致殘率較初發(fā)腦梗死更高，它已成為嚴重的社會問題和經(jīng)濟問題。復發(fā)性腦梗死危險因素的研究結(jié)果一直存在較大的差異，尤其是中青年復發(fā)性腦梗死，多數(shù)學者認為高尿酸血癥是復發(fā)型腦梗死的未受控因素，而MTHFR基因在復發(fā)的機制中也占有

尿酸為人體正常代謝產(chǎn)物，采用尿酸酶法檢測正常值范圍為200～413mmol/L。當人體內(nèi)嘌呤代謝異常，會出現(xiàn)尿酸生成增多或排泄減少的情況，人體內(nèi)血尿酸濃度增高稱之為高尿酸血癥，高尿酸血癥能夠增加腦血管病發(fā)病風險，若未加以控制，更會增加腦血管病的復發(fā)率。本研究中可以看出，初發(fā)組及復發(fā)組患者血尿酸水平均出現(xiàn)明顯增高，可以看出血尿酸異常率增高與腦梗死初發(fā)及復發(fā)均密切相關(guān)。本研究可以發(fā)現(xiàn)高尿酸組與尿酸正常組比較，腦梗死的復發(fā)率差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），可認為高尿酸血癥是腦梗死復發(fā)的危險因素。高尿酸血癥的致病機制尚未明確，可能與以下因素有關(guān)：1）尿酸水平與脂蛋白代謝異常，以及高血壓等因素相互作用，促進粥樣硬化形成;2）尿酸鹽結(jié)晶能夠促進炎癥反應，激活血小板以及凝血過程;3）可以通過影響嘌呤代謝促進形成血栓。痛風發(fā)作時，釋放趨化因子促使急性炎癥的發(fā)生。腦卒中急性發(fā)作，血液中白細胞黏附作用增強，細胞間黏附分子濃度明顯增高，可以看出各疾病在彼此發(fā)生中能夠相互促進。

本研究可以看出高尿酸血癥是復發(fā)腦梗死的危險因素，這與我國著名學者周其達的研究一致[3]。但是否為獨立危險因素，本文尚未得出此類結(jié)論。目前高尿酸血癥導致腦梗死復發(fā)率增加的社會原因，主要是因為未引起痛風癥狀的高尿酸血癥一般不會引起病人及家屬的重視，一般也不會予以治療。因此監(jiān)控血尿酸水平對復發(fā)腦梗死的預防非常有益。MTHFR基因C677T位點是研究熱點，該位點處于MTHFR基因的N端，能夠影響酶的耐熱性、活性。杜麗麗等研究指出[4]，MTHFR基因是Hcy代謝關(guān)鍵酶，其C677T位點的多態(tài)性與人體血脂水平高度相關(guān)，本研究表明，復發(fā)組TT基因型患者的Hcy水平明顯高于首發(fā)組患者。蔣萍等曾指出[5]，TT基因型患者酶活性降低，約為正常值的30%，所以出現(xiàn)TT基因型患者的血漿Hcy水平，顯著高于純合野生型CC基因型患者。陳星霖[6]曾報道TT和CT基因型患者血漿高Hcy檢出率明顯增高。本研究可以看出，兩組間MTHFR基因C677T位點基因型分布具有顯著差異，并且復發(fā)組患者T等位基因的頻率明顯高于首發(fā)組，可以看出MTHER基因C677T位點的基因突變，能夠促進RIS的發(fā)生。

葉酸是一種B族維生素，與維生素B12共同促進Hcy再甲基化過程。本研究中，復發(fā)組TT基因型患者的血漿葉酸水平明顯低于首發(fā)組，在Hcy代謝中，葉酸水平降低能夠促進高Hcy，進而促進復發(fā)性腦梗死發(fā)生。

綜上所述，MTHFR基因TT基因型是中青年復發(fā)性腦梗死的重要因素，TT基因型中青年復發(fā)性腦梗死患者存在高Hcy及低葉酸。高尿酸血癥與復發(fā)腦梗死發(fā)病有內(nèi)在聯(lián)系，是重要的危險因素。

參考文獻

[1] 中華醫(yī)學會第四屆全國腦血管病學術(shù)會議.各類腦血管病診斷要點[J].中華神經(jīng)內(nèi)科雜志，1996，29（06）：379.

[2] 陳道純.人類年齡期劃分的指數(shù)公式[J].中國老年學雜志，2004，24（08）：771-772.

[3] 周其達.腦梗死復發(fā)的危險因素研究[J].實用心腦肺血管病雜志，2011，19（07）：1081-1082.

[4] Du L L，Lyu Z P，Liu C W，et al.Association between the MTHFR C677T polymorphism and serum lipid levels and longevity in the long-lived cohort in Guangxi Hongshuihe river basin[J].Chinese Journal of Arteriosclerosis，2016，21（04）：637-639.

[5] Jiang P，Zang D W.Correlation between polymorphisms of MTHFRC677T gene and plasma homocysteine in patients with acute cerebral infarction[J].Shandong Medical Journal，2017，54（08）：1-4.

[6] 陳星霖.MTHF+C677T基因突變及血漿tHcy水平與腦卒中關(guān)系的研究[D].武漢：華中科技大學，2016.