唐佳 徐川 唐勇 尹海燕 薛紅 魏大能 何建才 周奇志

(成都中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，四川 成都 610075)

他莫昔芬是絕經(jīng)前乳腺癌患者術(shù)后輔助內(nèi)分泌治療的最常用藥物〔1〕，潮熱是他莫昔芬的嚴(yán)重不良反應(yīng)之一。有研究發(fā)現(xiàn)，超過70%的患者服用他莫昔芬后出現(xiàn)潮熱〔2〕，且潮熱發(fā)作時(shí)間不定，以夜間發(fā)作較多，干擾患者的睡眠質(zhì)量和精神狀態(tài)，嚴(yán)重者可導(dǎo)致抑郁的發(fā)生〔3〕，使大多數(shù)患者難以忍受，甚至終止治療〔4〕。潮熱的主要表現(xiàn)為胸部及頸面部皮膚溫度升高、潮紅，甚至大量出汗，常持續(xù)數(shù)秒至數(shù)分鐘消退，隨后中心體溫下降，全身畏寒發(fā)冷，同時(shí)伴隨著心悸、焦慮、急躁甚至恐慌感。目前針對乳腺癌內(nèi)分泌治療引發(fā)的潮熱，臨床上多選用選擇性5-羥色胺再吸收抑制劑、加巴噴丁、可樂定等藥物，但均出現(xiàn)不同程度的口干、食欲減退、嗜睡、便秘、眩暈、皮膚瘙癢等不良反應(yīng)，使患者接受程度降低〔5〕，故目前缺乏理想的有效治療方法?，F(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)針刺可以很好改善乳腺癌內(nèi)分泌治療引發(fā)的潮熱，且副作用小〔6～8〕，但治療機(jī)制尚未明確。因此，構(gòu)建一個(gè)理想的他莫昔芬引發(fā)潮熱的大鼠模型，對尋求針對潮熱的干預(yù)措施及其機(jī)制研究有重要意義。本研究采用他莫昔芬灌胃大鼠建立潮熱模型，通過觀察大鼠尾部皮膚溫度及血清雌二醇(E2)水平，對該模型效果進(jìn)行綜合評價(jià)。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及喂養(yǎng) 11周齡清潔級SD雌性大鼠30只，體重(240±10)g，由四川達(dá)碩動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物合格證號(hào):SCXK(川)2015-030。所有大鼠成對飼養(yǎng)，適應(yīng)性馴養(yǎng)1 w，自由進(jìn)食、飲水，濕度55%～65%，溫度(23±1)℃。設(shè)置隔離單元自動(dòng)光照和通風(fēng)控制系統(tǒng)參數(shù)，光暗周期為12 h/12 h，光照期設(shè)置為9∶00～21∶00，黑暗期設(shè)置為21∶00～9∶00，通風(fēng)設(shè)置為每隔30 min通風(fēng)30 min。

1.2主要試劑與儀器 他莫昔芬(揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào):國藥準(zhǔn)字H32021472)，蒸餾水；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒(Rat E ELISA KIT，批號(hào):20180112，茁彩生物公司)；熱電偶測溫儀 (型號(hào)SH-64，深圳市深華軒科技有限公司)。

1.3方法

1.3.1實(shí)驗(yàn)分組及模型制備 在安靜、溫度恒定和濕度適宜的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，馴養(yǎng)1 w后，將大鼠置于尾部固定的特定裝置中每天4 h、適應(yīng)1 w，再檢測大鼠基礎(chǔ)尾溫1 w，將1 w尾溫的平均值作為基線溫度，即第0天的溫度，并剔除超過基線溫度的大鼠。最后共納入符合條件的大鼠20只。將20只大鼠隨機(jī)分為對照組、模型組各10只。每日上午8點(diǎn)，對照組予蒸餾水灌胃，模型組給予他莫昔芬懸濁液(以蒸餾水為溶劑)灌胃，灌胃劑量為10 mg/kg。兩組均持續(xù)灌胃28 d后停止。

1.3.2測溫 每日上午灌胃后按照灌胃順序?qū)⒏鞔笫笱b入固定裝置中，暴露尾部，在鼠尾背面距尾根1～2 cm已剃毛處做好十字標(biāo)記，將熱偶探測頭固定在標(biāo)記處，持續(xù)監(jiān)測鼠尾溫度4 h〔9〕，熱電偶測溫儀每1 min自動(dòng)讀取一次溫度值，并自動(dòng)記錄于存儲(chǔ)器，4 h溫度的平均值作為每只大鼠當(dāng)天的尾溫。整個(gè)測溫過程室溫保持在(23±1)℃。

1.3.3E2水平檢測 在灌胃第28天后取各組大鼠的腹主動(dòng)脈血，分離血清，采用ELISA方法檢測各組大鼠的血清E2濃度。

1.4統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù) 采用SPSS25.0軟件，采用重復(fù)測量資料的方差分析檢驗(yàn)及獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1大鼠尾溫結(jié)果 兩組大鼠的尾溫平均值經(jīng)重復(fù)測量方差分析，球形度檢驗(yàn)P<0.05，多變量檢驗(yàn)結(jié)果顯示測溫天數(shù)的P=0.056,測溫天數(shù)*組別的P=0.024，表示總體上隨著測溫天數(shù)的增加，兩組大鼠的尾溫變化趨勢有明顯差異，即隨著時(shí)間增加，模型組較對照組大鼠尾溫明顯升高。從0～28 d的分段變化趨勢看，從第12天開始，模型組尾溫有了上升趨勢，但第12、16天兩組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；而到第20、24、28天，模型組與對照組比較有明顯差異(P<0.05)。見圖1。第20～28天，模型組的尾溫(27.90±0.40)℃明顯高于對照組(26.13±0.06)℃，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

兩組在第0～19天和第20～28天自身前后比較，對照組的鼠尾溫度在兩個(gè)時(shí)間段自身前后比較無明顯差異〔第0～19天：(26.54±0.24)℃，第20～28天：(26.13±0.06)℃，P>0.05〕，而模型組在第20～28天(27.90±0.40)℃明顯高于第0～19天(26.48±0.56)℃，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

兩組造模前及造模結(jié)束第28天相互比較，造模前基礎(chǔ)尾溫比較無明顯差異〔對照組(26.36±1.03)℃，模型組(26.72±1.01)℃,P>0.05〕，而在造模第28天時(shí)，模型組尾溫〔(28.31±1.41)℃〕較對照組〔(26.20±2.55)℃〕有明顯升高(P<0.05)。

2.2血清E2濃度對比結(jié)果 與對照組〔(56.65±17.69)pg/ml〕比較，模型組的血清E2濃度明顯下降〔(35.89±7.68)pg/ml，P<0.05〕。

與對照組比較:1)P<0.05圖1 兩組尾溫變化的曲線圖

3 討 論

現(xiàn)有研究觀察了圍絕經(jīng)期婦女潮熱發(fā)生的生理學(xué)改變，發(fā)現(xiàn)在潮熱開始時(shí)手指和腳趾的皮膚溫度大幅度升高，并證明這種皮膚溫度的升高與潮熱的發(fā)生有關(guān)〔10〕。因此，皮溫升高成為潮熱發(fā)生的最顯著特征。大鼠尾部是唯一無毛皮覆蓋且表面積較大的部分，能消散大約20%的總產(chǎn)熱量，類似于人類的面部及四肢〔11〕，所以用大鼠尾溫判斷模型動(dòng)物是否發(fā)生潮熱是可靠的。Opas等〔9〕曾用他莫昔芬(每天5 mg/kg)對正常大鼠連續(xù)灌胃10 d并監(jiān)測大鼠尾部皮膚溫度變化，發(fā)現(xiàn)從第7天開始大鼠尾溫有了明顯的升高，在第10天與以甲基纖維素灌胃的對照組比較有顯著差異。才開始本研究中，模型組尾溫在第20天與對照組相比有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，并持續(xù)到第28天灌胃結(jié)束?？紤]與上述實(shí)驗(yàn)中大鼠尾溫升高時(shí)間不同的原因，可能是研究目的不同、灌胃溶劑和大鼠年齡不同及個(gè)體差異等所致，且本實(shí)驗(yàn)灌胃溶劑采用的蒸餾水與臨床患者服藥用水相似，與實(shí)際更相符；但本研究與Opas等〔9〕研究的最后結(jié)果一致，即他莫昔芬可引起大鼠皮膚溫度升高，產(chǎn)生類似于圍絕經(jīng)期潮熱的癥狀。

他莫昔芬是第一代選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑，能夠與細(xì)胞膜上雌激素受體結(jié)合，形成復(fù)合物，從而切斷了雌激素的來源，降低雌激素水平，進(jìn)而導(dǎo)致潮熱的癥狀出現(xiàn)。在本研究中，經(jīng)過28 d他莫昔芬灌胃后，模型組的血清E2濃度明顯低于對照組，與國內(nèi)外多篇文獻(xiàn)〔2,12，13〕中提到的“低雌激素可能引發(fā)體溫調(diào)定點(diǎn)下移而導(dǎo)致潮熱”的研究理論一致。結(jié)合鼠尾溫度結(jié)果，此造模方法能很好地模擬人類潮熱時(shí)的主要癥狀，故可判定他莫昔芬引發(fā)潮熱的動(dòng)物模型造模成功。 本研究在測溫前將大鼠適應(yīng)性馴養(yǎng)1 w，再放入測溫裝置適應(yīng)1 w，有助于緩解大鼠的焦慮緊張情緒，避免對尾部溫度產(chǎn)生影響，提高溫度數(shù)據(jù)檢測的準(zhǔn)確性。且測溫部位剃毛并做好標(biāo)記，將熱電偶探頭固定在標(biāo)記處，采用連續(xù)監(jiān)測尾溫4 h的測溫方式，相較于紅外線測溫儀等瞬間測尾溫的方式，能夠確保每日測溫部位的一致性，且數(shù)據(jù)量較大，能夠減少溫度之間的誤差。由于該實(shí)驗(yàn)固定制動(dòng)時(shí)間相對較長，也存在極少數(shù)大鼠測溫脫落現(xiàn)象，在后續(xù)的測溫實(shí)驗(yàn)中可考慮采用在鼠尾植入皮膚溫度傳感器24 h監(jiān)測大鼠尾溫的方法，進(jìn)一步減少誤差。

綜上，用10 mg/kg的他莫昔芬連續(xù)灌胃28 d，能成功地復(fù)制出乳腺癌內(nèi)分泌藥物他莫昔芬所致潮熱的動(dòng)物模型。此模型填補(bǔ)了國內(nèi)外抗癌內(nèi)分泌藥物導(dǎo)致潮熱的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型研究的空缺，為研究該類潮熱發(fā)生的中樞等機(jī)制提供了新的途徑，為有效、基本無副作用的非藥物替代療法如針刺緩解乳腺癌他莫昔芬等抗癌內(nèi)分泌藥物所致潮熱癥狀〔14～16〕機(jī)制研究提供了理想的動(dòng)物模型和研究平臺(tái)。