柴海飛 郭小琴

(臺(tái)州恩澤醫(yī)療中心(集團(tuán))浙江省臺(tái)州醫(yī)院 1神經(jīng)外科，浙江 臺(tái)州 317000；2麻醉科)

腦膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)最多見(jiàn)的原發(fā)腫瘤，發(fā)病率比較高，惡性程度比較高的超過(guò)一半；腦膠質(zhì)瘤在成人中多見(jiàn)，隨著人口的不斷老齡化，老年腦膠質(zhì)瘤的發(fā)病率有升高趨勢(shì)。腦膠質(zhì)瘤的發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚，早發(fā)現(xiàn)早診斷有利于提高治療效果，改善預(yù)后〔1,2〕。miRNA被證實(shí)在細(xì)胞增殖和分化等多種生理過(guò)程的調(diào)節(jié)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，在腫瘤發(fā)生和細(xì)胞凋亡等過(guò)程中具有調(diào)控作用〔3〕。miR-195屬于miR-16家族成員之一，在乳腺癌、膀胱癌等多種惡性腫瘤組織中表達(dá)異常，與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切〔4〕。研究發(fā)現(xiàn)miR-195可影響腦膠質(zhì)細(xì)胞的生長(zhǎng)〔5〕，但腦膠質(zhì)瘤患者血清中miR-195水平及臨床意義尚不十分清楚。本文對(duì)老年腦膠質(zhì)瘤患者血清miR-195水平進(jìn)行研究，探討血清miR-195水平在老年腦膠質(zhì)瘤患者中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選擇浙江省臺(tái)州醫(yī)院神經(jīng)外科2009年1月至2016年1月老年腦膠質(zhì)瘤患者80例作為腦膠質(zhì)瘤組，同期健康體檢者80例作為對(duì)照組。腦膠質(zhì)瘤組年齡(75.12±3.24)歲；男39例，女41例；星形細(xì)胞瘤27例，室管膜瘤21例，少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤18例，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤14例；病理分級(jí)Ⅰ級(jí)14例，Ⅱ級(jí)23例，Ⅲ級(jí)31例，Ⅳ級(jí)12例；原發(fā)灶直徑(3.24±1.32)cm。對(duì)照組年齡(74.95±3.46)歲，男42例，女38例。腦膠質(zhì)瘤組和對(duì)照組年齡和性別比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：腦膠質(zhì)瘤患者均經(jīng)病理證實(shí)為腦膠質(zhì)瘤，均進(jìn)行手術(shù)治療；兩組研究對(duì)象均資料完整，簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：患嚴(yán)重心肝腎疾病者，患其他惡性腫瘤者，拒絕參與者。

1.3血清miR-195水平測(cè)定 腦膠質(zhì)瘤組患者分別于手術(shù)前和術(shù)后7 d抽取外周靜脈血4 ml，對(duì)照組于體檢當(dāng)日抽取外周靜脈血4 ml，離心(3 000 r/min)10 min，取200 μl血清，根據(jù)RNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)提取總RNA，采用實(shí)時(shí)定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測(cè)定血清miR-195水平，將血清RNA按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)反轉(zhuǎn)錄成cDNA，取cDNA液2 μl進(jìn)行擴(kuò)增，PCR反應(yīng)條件為95℃ 30 s，95℃ 5 s，60℃ 30 s，共40個(gè)循環(huán)，以2-ΔΔCt表示血清miR-195水平。

1.4研究方法 比較腦膠質(zhì)瘤組治療前、后及腦膠質(zhì)瘤組與對(duì)照組miR-195水平，并分析不同臨床病理特征腦膠質(zhì)瘤患者miR-195水平差異。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清miR-195水平比較 腦膠質(zhì)瘤組血清miR-195水平(0.56±0.09)明顯低于對(duì)照組(0.93±0.12，t=22.063,P=0.000)。

2.2腦膠質(zhì)瘤患者手術(shù)前后血清miR-195水平比較 腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后血清miR-195水平(0.83±0.11)明顯高于術(shù)前(0.56±0.09，t=16.992,P=0.000)。

2.3腦膠質(zhì)瘤患者血清miR-195水平與臨床病理特征的關(guān)系 腦膠質(zhì)瘤患者血清miR-195水平與腦膠質(zhì)瘤的病理分級(jí)有關(guān)(P<0.05)，與年齡、性別、原發(fā)灶直徑無(wú)關(guān)(P>0.05)，病理分級(jí)Ⅲ～Ⅳ級(jí)患者血清miR-195水平明顯低于Ⅰ～Ⅱ級(jí)患者(t=10.875,P=0.000)。見(jiàn)表1。

表1 腦膠質(zhì)瘤患者血清miR-195水平與臨床病理特征的關(guān)系

3 討 論

腦膠質(zhì)瘤早期常缺乏典型的臨床癥狀，很多患者失去了早期治療的機(jī)會(huì)，因此在臨床上對(duì)腦膠質(zhì)瘤進(jìn)行早期診斷具有重要意義〔6〕。目前對(duì)腦膠質(zhì)瘤的診斷常通過(guò)影像學(xué)手段和神經(jīng)功能缺損癥狀；影像學(xué)手段包括CT檢查、MRI檢查、PET檢查等〔7〕。影像學(xué)檢查雖然定位比較準(zhǔn)確，且定性準(zhǔn)確率也比較高，可顯示病變的部位、病變范圍、腦室受壓情況等，還可顯示腫瘤的供應(yīng)血管，在某種程度上反映腦膠質(zhì)瘤的良惡性程度〔8〕，但影像學(xué)檢查受閱片者的主觀印象影響比較大，尤其在腦膠質(zhì)瘤級(jí)別的判斷上有一定局限性，且影像學(xué)檢查費(fèi)用昂貴。通過(guò)手術(shù)獲得腦膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本進(jìn)行術(shù)中或術(shù)后病理診斷是腦膠質(zhì)瘤診斷和分級(jí)的金標(biāo)準(zhǔn)，但缺乏術(shù)前評(píng)估。因此選擇簡(jiǎn)單有效的早期診斷腦膠質(zhì)瘤的方法具有重要意義。

miRNA可以通過(guò)干擾轉(zhuǎn)錄或者抑制翻譯等過(guò)程對(duì)靶基因進(jìn)行調(diào)節(jié)，影響相應(yīng)蛋白的表達(dá)〔9，10〕；體內(nèi)多種miRNA與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，包括抑癌基因和癌基因兩大類。正常情況下，抑癌基因和癌基因保持動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，當(dāng)機(jī)體受到一些因素的影響時(shí)可導(dǎo)致某一種基因活性受到影響，抑癌基因和癌基因之間的平衡被打破，促使組織細(xì)胞向惡性轉(zhuǎn)化〔11，12〕。近年研究發(fā)現(xiàn)多種miRNA和腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切,在腦膠質(zhì)瘤中表達(dá)異常，參與腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程〔13〕。miR-195為一種非編碼RNA，位于人類第17號(hào)染色體上，屬于miR-16家族成員，在不同腫瘤細(xì)胞中發(fā)揮不同的作用〔14，15〕，研究發(fā)現(xiàn)miR-195通過(guò)調(diào)控CyclinD1、CyclinE1等周期相關(guān)蛋白和Bcl-2等凋亡相關(guān)蛋白發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)，在多種惡性腫瘤組織中存在異常表達(dá)〔16，17〕。miR-195也抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，為腦膠質(zhì)瘤的基因治療提供了新的靶點(diǎn)，如慕偉等〔18〕研究發(fā)現(xiàn)miR-195通過(guò)阻滯腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的周期進(jìn)展抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖；王宏勤等〔19〕研究發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)miR-195可抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡，阻滯膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期。但miR-195在腦膠質(zhì)瘤患者血清中的水平及臨床意義尚不清楚。游離的miRNA來(lái)源于組織細(xì)胞的自動(dòng)釋放、組織細(xì)胞的裂解、體內(nèi)細(xì)胞凋亡等，游離的miRNA具有比較好的穩(wěn)定性，可以在血清中檢測(cè)到，和組織中表達(dá)水平具有比較高的吻合度，且具有組織特異性，因此血清miRNA有望成為腫瘤標(biāo)志物。本研究結(jié)果顯示，老年腦膠質(zhì)瘤患者血清miR-195水平在老年腦膠質(zhì)瘤的診斷、療效評(píng)價(jià)、惡性程度評(píng)估等方面具有重要價(jià)值。