王 艷 張申眾 袁秀敏 王晉舜 張 璐 門(mén)桐林 李 雪

作為臨床上一種極為常見(jiàn)的惡性腫瘤疾病，非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)具有較高的發(fā)病率與死亡率，嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康[1]。研究報(bào)道，非小細(xì)胞肺癌在肺癌疾病中占80%左右，惡性程度高，容易出現(xiàn)早期轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)[2]，影響患者的臨床治療及預(yù)后。分子病理學(xué)研究證實(shí)，EGFR相關(guān)信號(hào)通路在肺癌發(fā)生及發(fā)展過(guò)程中有著重要的作用，其一方面影響著腫瘤細(xì)胞分化增殖、新生血管生成[3]，另一方面也影響著腫瘤細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移。目前，臨床對(duì)NSCLC的治療主要以分子靶向藥物為主[4-5]。本研究收集我院120例NSCLC患者的病例資料予以分析，總結(jié)了表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)基因19、21外顯子突變情況及NSCLC病理特征，分析了靶向治療效果，現(xiàn)對(duì)研究結(jié)果予以總結(jié)與匯報(bào)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年6月至2017年6月我院腫瘤科收治的120例EGFR基因突變陽(yáng)性NSCLC患者作為研究對(duì)象，其中男性53例，女性67例，年齡28～79歲，平均年齡為(56.4±5.2)歲。隨機(jī)數(shù)字表法對(duì)患者實(shí)施分組，觀察組與對(duì)照組各60例。2組患者年齡、性別、病理類(lèi)型及臨床分期等資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，存在可比性。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)[6-8]

納入標(biāo)準(zhǔn)：①對(duì)入選病例給予臨床診斷及病理學(xué)檢查，診斷結(jié)果與國(guó)際NSCLC臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)相符[9]；②該研究得到本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的認(rèn)可，入組患者均知情、同意，入組均為自愿，并按照要求在知情同意書(shū)上簽字；③病理組織EGFR基因突變顯示為陽(yáng)性；④病歷資料完整；⑤患者具有較好依從性，能夠接受定期隨訪。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴隨嚴(yán)重器官疾病以及肝腎功能不全者；②認(rèn)知功能障礙及智力障礙患者；③臨床資料不全者；④肺外存在原發(fā)性腫瘤患者；⑤存在嚴(yán)重感染及有心臟病史患者；⑥胃潰瘍患者；⑦存在藥物過(guò)敏史患者；⑧妊娠期及哺乳期婦女。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本選取 提取NSCLC患者病理組織切片，以6～8張為宜，對(duì)患者EGFR突變情況予以檢測(cè)，腫瘤組織切片予以甲醛固定，并實(shí)施石蠟包埋。采用切片機(jī)對(duì)病理組織進(jìn)行切割，制作成為厚度為5 μm的切片。通常病理組織切片選擇要以腫瘤組織覆蓋范圍>整體切片組織50%以上為宜，將標(biāo)本放置于-20 ℃環(huán)境下冷凍保存。

1.3.2 提取組織中DNA 將5～8張制備完成的病理組織切片放置于65 ℃環(huán)境下進(jìn)行烤片，1 h后對(duì)病理組織進(jìn)行二甲苯反復(fù)脫蠟處理，共3次，15 min/次。將其浸泡在無(wú)水乙醇中，反復(fù)3次，5 min/次。用蒸餾水予以漂洗。采用傳統(tǒng)手工方式實(shí)施病理切片，對(duì)非腫瘤組織進(jìn)行剝脫，保留腫瘤組織，在1.5 ml Eppendorf管中刮入腫瘤組織。在Eppendorf管中加入180 μl的BufferTL與20 μl蛋白酶K，震蕩使其混合均勻，放置入60 ℃環(huán)境下水浴消化過(guò)夜。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明提取標(biāo)本中的DNA組織。將提取的DNA組織滴入到適量瓊脂糖凝膠中，采用電泳檢測(cè)法對(duì)已提取的DNA進(jìn)行檢測(cè)，判斷提取的DNA樣本是否合格。測(cè)定樣本的260 nm及280 nm吸光度，在-20 ℃低溫環(huán)境下保存，留作備用。

1.3.3 EGFR基因19、21外顯子突變檢測(cè) 嚴(yán)格按照Gen Bank數(shù)據(jù)庫(kù)中人EGFR基因序列對(duì)EGFR外顯子19、21引物進(jìn)行設(shè)計(jì)，引物的設(shè)計(jì)需要充分考慮EGFR檢測(cè)位點(diǎn)，聚合酶反應(yīng)條件如下：94 ℃環(huán)境下給予5 min預(yù)變性處理，同樣溫度進(jìn)行30 sec變性處理，溫度降至55 ℃退火30 sec，70 ℃下進(jìn)行延伸45 sec，連續(xù)循環(huán)40次左右，最后70 ℃下延伸12 min。將擴(kuò)增提取物滴入到瓊脂糖凝膠中，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物給予電泳檢測(cè)。然后純化處理擴(kuò)增產(chǎn)物。將測(cè)序得到的結(jié)果與Gen Bank數(shù)據(jù)庫(kù)EGFR基因序列比較。

收集所有患者的年齡、性別、吸煙史、病理類(lèi)型等一般資料，對(duì)所有患者給予定期電話(huà)隨訪，督促患者進(jìn)行門(mén)診復(fù)查。

1.3.4 治療方法 對(duì)照組：給予常規(guī)治療。觀察組：給予靶向治療，患者入院第1天晚上給予250 mg吉非替尼(AstraZeneca KK Maihara Plant，國(guó)藥準(zhǔn)字H20090759)治療，之后每天僅早上給予250 mg吉非替尼治療，連續(xù)治療1個(gè)月。

1.4 觀察指標(biāo)

對(duì)EGFR基因19及21外顯子突變狀態(tài)予以檢測(cè)，比較患者EGFR基因19及21外顯子突變情況及NSCLC臨床病理特征。對(duì)2組患者臨床治療效果、中位生存期進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。治療總有效率=完全緩解率+部分緩解率[10]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 EGFR基因19、21外顯子突變情況比較

120例患者中EGFR基因19外顯子突變率61.7%(74/120)，顯著高于EGFR基因21外顯子突變率38.3%(46/120)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.376，P=0.021)。

2.2 EGFR基因19、21外顯子突變患者臨床病理特征分析

EGFR基因19、21外顯子突變患者在性別、年齡、有無(wú)吸煙史、臨床分期、有無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、有無(wú)手術(shù)切除史方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，在有無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移、病理類(lèi)型、組織類(lèi)型方面的數(shù)據(jù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 EGFR基因19、21外顯子突變患者臨床病理特征分析(例，%)

2.3 觀察組與對(duì)照組患者臨床治療情況比較

治療后對(duì)療效予以隨訪與評(píng)估，發(fā)現(xiàn)觀察組總有效率為95.0%(57/60)，與對(duì)照組的71.7%(43/60)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=12.597，P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 觀察組與對(duì)照組患者臨床治療情況比較(例，%)

2.4 觀察組與對(duì)照組患者中位生存期比較

觀察組患者治療后中位生存期為(54.25±4.52)周，顯著高于對(duì)照組的(32.46±4.61)周，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=26.143,P<0.05)。

3 討論

研究報(bào)道，肺癌患者中有80%以上屬于非小細(xì)胞肺癌，且50%以上NSCLC患者就診時(shí)已發(fā)展至晚期，部分患者病灶甚至向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[11-12]。目前，臨床對(duì)于NSCLC的治療方案多種多樣，一般對(duì)于早期NSCLC患者建議行手術(shù)治療，而對(duì)于晚期及病灶遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者則采用化療方案治療。

近年來(lái)，分子病理學(xué)研究不斷深入，NSCLC分子機(jī)制也逐漸明確，靶向藥物成為臨床治療NSCLC的首選。EGFR在多種腫瘤疾病中均呈現(xiàn)出過(guò)度表達(dá)或突變狀態(tài)，40%～80%NSCLC患者伴隨EGFR的高表達(dá)。EGFR能夠激活下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，在腫瘤細(xì)胞分化、增殖中發(fā)揮著極為重要的作用[13]，同時(shí)還能夠促進(jìn)腫瘤組織新生血管生成。吉非替尼作為第1個(gè)EGFR-TKIs在NSCLC治療中得以應(yīng)用。有學(xué)者在研究中提出TKIs的敏感性很大程度上取決于NSCLC病理組織EGFR有無(wú)發(fā)生突變[14-15]。在對(duì)NSCLC患者給予TKI治療前，可以對(duì)其EGFR基因突變狀態(tài)予以檢測(cè)，然后篩選出適宜靶向治療的患者。這對(duì)于抑制腫瘤進(jìn)程、改善預(yù)后有著重要的意義。

EGFR位于第7號(hào)染色體短臂，共有28個(gè)外顯子，其中主要突變區(qū)域集中在18～21外顯子，90%以上為19、21外顯子突變，前者主要表現(xiàn)為缺失突變，后者主要為L(zhǎng)858R突變。本研究對(duì)120例EGFR基因19或21外顯子突變NSCLC患者的病理組織切片予以檢測(cè)，結(jié)果顯示EGFR基因19外顯子突變占61.7%，顯著高于EGFR基因21外顯子突變38.3%(P<0.05)，與以往學(xué)者研究結(jié)果一致。本次研究中，觀察組治療后總有效率為95.0%，與對(duì)照組的71.7%比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明靶向治療效果較好，對(duì)患者有重要的臨床意義。

綜上所述，EGFR基因突變類(lèi)型與NSCLC臨床病理特征密切相關(guān)，通過(guò)對(duì)患者EGFR基因19、21外顯子突變的檢測(cè)，能夠?yàn)榘邢蛑委熖峁﹨⒖肌?/p>