韋妹艷 陳輝 段智 許奇美 汪砥

鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma，NPC）是最常見的頭頸部惡性腫瘤之一，并且我國是世界上鼻咽癌發(fā)病率最高的國家[1]，據(jù)一項流行病學(xué)調(diào)查研究[2]顯示，世界其他國家和地區(qū)鼻咽癌的發(fā)病率不到1/10萬，而我國南方幾個省份鼻咽癌的發(fā)病率高達(dá)30/10 萬；據(jù)不完全統(tǒng)計世界上大約80%鼻咽癌發(fā)生于中國[3]。鼻咽癌的早期癥狀不典型，可表現(xiàn)為涕中帶血、單側(cè)的耳鳴、耳閉塞感、聽力下降或頭痛等不典型癥狀[4]；正是由于鼻咽部解剖結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性及臨床癥狀的不典型性，使得鼻咽癌的早期臨床診斷比較困難，甚至需要進(jìn)行反復(fù)活檢才能夠確診，且確診時大多已發(fā)生頸部淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移[5]。而目前公認(rèn)的鼻咽癌治療的首選方案為放射治療[6]，盡管近幾年放化療技術(shù)不斷成熟，但是鼻咽癌治療后的總生存率仍保持在50%左右，局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是治療失敗的最終原因[7]。目前關(guān)于鼻咽癌局部浸潤和轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究尚不明確，因此，探究與鼻咽癌局部浸潤、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)有關(guān)的生物學(xué)指標(biāo)顯得尤為重要。結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因（Metastasis-associated in colon cancer-1，MACC-1）是于2009年對人類結(jié)腸癌組織、轉(zhuǎn)移腫瘤組織及人體正常組織進(jìn)行全面掃描時發(fā)現(xiàn)的一個新的基因[8]，并且已有研究[9]證實MACC-1基因在結(jié)腸癌、肝癌、食管癌中高表達(dá)，并與腫瘤的浸潤、局部復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)，且其高表達(dá)與生存期存在一定關(guān)系。本研究采用免疫組化法測定結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因（MACC-1）在NPC腫瘤組織中的表達(dá)，探討其與鼻咽癌腫瘤的病理學(xué)特征及預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 一般資料選取我院2006年1月～2012年12月間確診并放化療的初治鼻咽癌患者標(biāo)本90 例及同期送檢的慢性炎癥鼻咽黏膜組織標(biāo)本75例，分別為鼻咽癌組和慢性炎癥組，所有患者均經(jīng)病理學(xué)檢查確診，并具有完整的住院病歷資料。鼻咽癌組中男54 例，女36 例，年齡28～74 歲，平均（52.4±13.8）歲，慢性炎癥組中男40例，女35例，年齡27～78歲，平均（53.8±15.4）歲。兩組患者在年齡、性別比例等方面比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。

鼻咽癌組患者病理診斷符合《中國常見惡性腫瘤診治規(guī)范》中的關(guān)于鼻咽癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[10]，且于我院接受放化療的初治患者，病史資料詳細(xì)，無嚴(yán)重的心腦血管疾病及其他系統(tǒng)腫瘤病史?；颊呷朐航邮苤委熐靶醒Ｒ?guī)、尿常規(guī)、肝腎功能、鼻咽部MR、頭顱及胸部CT、腹部B 超及骨掃描檢查，而鼻咽癌的TNM分期采用1992年制定的福州分期標(biāo)準(zhǔn)[11]。鼻咽癌組中患者的病理組織學(xué)檢查結(jié)果：低分化鱗癌84 例，未分化鱗癌5 例，腺癌1 例；TN 分期中T1～T237 例，T3～T453 例，N034 例，N1～N356 例；臨床分期Ⅰ～Ⅱ14 例，Ⅲ～Ⅳ76 例；治療方式：單純放療患者21 例，同步放化療患者69 例；三維調(diào)強放療患者34 例，二維常規(guī)放療患者56 例；鼻咽癌組患者隨訪采用門診隨訪和電話隨訪，隨訪頻率為放療后2年內(nèi)每季度1 次，2～5年內(nèi)每半年1 次，5年以上每年隨訪1 次，隨訪內(nèi)容主要包括鼻咽部MR、頭顱和胸部CT、腹部B超及骨掃描。

1.2 免疫組化S-P 法鼻咽癌組及慢性炎癥組標(biāo)本在取材后首先使用10%中性甲醛固定，隨后脫水和石蠟包埋，以厚度為4μm 進(jìn)行切片，之后進(jìn)行MACC-1（結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因）染色。具體步驟：切片在60℃烤箱內(nèi)過夜后進(jìn)行脫蠟水化，隨后使用3%的過氧化氫室溫孵育，蒸餾水沖洗，PBS 沖洗3次，之后滴山羊血清封閉液，不洗，直接滴加兔抗人MACC-1多克隆抗體，37℃孵育60～90min，PBS漂洗3次，滴加生物素標(biāo)記的二抗，37℃孵育，PBS漂洗后滴加S-P試劑，37℃孵育，PBS漂洗后，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，封片，鏡檢。結(jié)果判定：采用半定量法對MACC-1的染色結(jié)果進(jìn)行判定：①染色強度的計分：0 分為不染色，1 分為淺黃色，2 分為黃色，3 分為棕黃色；②染色細(xì)胞評分：取10個高倍鏡視野（×400），每個高倍鏡視野中隨機(jī)選擇100 個細(xì)胞，總計1000個細(xì)胞，計算染色細(xì)胞的比例，0分為染色細(xì)胞比例＜5%，1 分為5%～25%，2 分為25%～50%，3 分為50%～75%，4 分為＞75%；免疫組化評分=染色強度計分×染色細(xì)胞評分，0 分為（-），1～3 分為（+），4～6分為（++），＞6 分為（+++），（-）為陰性，（+）、（++）、（+++）為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法使用Excel 建立數(shù)據(jù)庫，將數(shù)據(jù)庫導(dǎo)入SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，計數(shù)資料使用頻數(shù)表示，計量資料比較采用t檢驗，率的比較采用χ2檢驗，有序等級資料采用秩和檢驗，單因素生存分析采用K-M檢驗，多因素生存分析采用COX多因素分析，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MACC-1 的表達(dá)情況鼻咽癌組與慢性炎癥組患者M(jìn)ACC-1免疫組化評分分別為（6.25±1.43）分、（2.13±0.67）分，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；鼻咽癌組與慢性炎癥組患者M(jìn)ACC-1的陽性表達(dá)率分別為70.0%、45.3%，鼻咽癌組MACC-1的陽性率顯著高于慢性炎癥組，經(jīng)有序資料秩和檢驗結(jié)果顯示，兩組間比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組MACC-1的表達(dá)情況

2.2 MACC-1 的表達(dá)與臨床特征及病理特征關(guān)系將MACC-1 的表達(dá)情況與臨床及病理組織學(xué)特征間關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析顯示，鼻咽癌組中MACC-1的表達(dá)與年齡沒有相關(guān)性，在不同年齡間表達(dá)的陽性率差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；MACC-1 的表達(dá)與性別無相關(guān)性，不同性別之間MACC-1表達(dá)陽性率的差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；MACC-1的表達(dá)與T分期、N分期及臨床分期有相關(guān)性，T3～T4期患者的MACC-1表達(dá)的陽性率高于T1～T2期患者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；N1～3期患者M(jìn)ACC-1表達(dá)的陽性率高于N0期患者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；臨床分期中Ⅲ～Ⅳ期患者M(jìn)ACC-1陽性率顯著高于Ⅰ～Ⅱ期患者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 MACC-1與鼻咽癌臨床及病理特征關(guān)系[n（%）]

2.3 MACC-1 表達(dá)情況與患者預(yù)后的關(guān)系入選鼻咽癌患者隨訪由首次放療結(jié)束時開始，至2016年6月隨訪結(jié)束，隨訪時間43～107 個月，平均（72.3±12.7）個月，失訪1 例。截至隨訪結(jié)束時，總計有15例患者復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)部位7例為鼻咽部，5例為顱底復(fù)發(fā)，3 例為淋巴結(jié)復(fù)發(fā)；37 例患者死亡，均為鼻咽癌的復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；隨訪結(jié)束時，MACC-1表達(dá)陽性患者的總生存率為50.8%，MACC-1 表達(dá)陰性患者的總生存率為77.8%，經(jīng)Log-Rank 檢驗顯示，MACC-1表達(dá)陽性患者生存率低于MACC-1表達(dá)陰性患者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=8.094，P＜0.05）。生存曲線見圖1。

3 討論

圖1 生存曲線

我國是全世界范圍內(nèi)鼻咽癌發(fā)病率最高的國家之一，據(jù)不完全統(tǒng)計我國南方省份中鼻咽癌的患者占到世界范圍內(nèi)的80%左右，同時鼻咽癌作為耳鼻喉科最常見的惡性腫瘤，選擇合理的治療方式一直是臨床中需要解決的問題。由于鼻咽部隱窩解剖位置隱蔽、鼻咽部周圍重要的血管神經(jīng)、豐富的淋巴結(jié)構(gòu)等原因，不僅給手術(shù)治療鼻咽癌帶來了困難，同時導(dǎo)致鼻咽癌極易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[12]；鼻咽癌早期的臨床表現(xiàn)不具有特異性，鼻咽癌患者確診時大多已到達(dá)中晚期甚至發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，為有效的治療帶來了困難[13]。鼻咽癌最為常見的病理組織學(xué)類型為低分化型鱗癌，其對放療較為敏感[14]，且目前放療已經(jīng)成為治療鼻咽癌常規(guī)同時也是較為有效的方式，隨著三維放療、調(diào)強放療等放療方式的不斷進(jìn)步成熟，鼻咽癌的治療也逐漸規(guī)范[15]，然而目前鼻咽癌患者的病死率仍較高。鼻咽癌放射治療失敗的主要原因為局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。MACC-1基因最早是于人類結(jié)腸癌腫瘤組織、轉(zhuǎn)移瘤及正常組織的掃描中所發(fā)現(xiàn)的新基因，后來發(fā)現(xiàn)其不僅在結(jié)腸癌組織中常見，而且參與包括食管癌、肝癌、腎癌等多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程[16]。有研究[17]顯示，MACC-1在結(jié)腸癌腫瘤組織中表達(dá)水平最高，提示其與結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，同時可以此為靶點作為靶向治療的突破。此外有報道[18]顯示，MACC-1在肝癌、食管癌中的表達(dá)顯著高于其他人體正常組織中的表達(dá)水平，其與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及高TNM分期密切相關(guān)，同時有研究[19]證實，MACC-1高表達(dá)的食管癌患者的5年生存率明顯低于MACC-1 低表達(dá)的患者，且將食管癌中MACC-1表達(dá)情況作為提示患者預(yù)后的指標(biāo)。一項有關(guān)鼻咽癌的研究[20]顯示，MACC-1 高表達(dá)通過促進(jìn)Akt（Serr473）和β-catenin的表達(dá)來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，提示高表達(dá)MACC-1預(yù)示鼻咽癌患者的不良預(yù)后，可考慮將靶向MACC-1 作為治療鼻咽癌的新的治療方向。但目前對于MACC-1 與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)之間關(guān)系的研究較少，對MACC-1的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及調(diào)控途徑的研究有利于以MACC 作為靶點的基因治療。本研究中，通過免疫組化S-P 法對比鼻咽癌組和慢性炎癥組中MACC-1的表達(dá)情況發(fā)現(xiàn)，鼻咽癌組的MACC-1顯著高于慢性炎癥組，與文獻(xiàn)報道相符；同時對鼻咽癌患者TN 分期、臨床分期的MACC-1 的表達(dá)分析發(fā)現(xiàn)，高表達(dá)的MACC-1與高TN 分期、高臨床分期顯著相關(guān)，且MACC-1陽性患者的總生存率要顯著低于陰性患者，此與其他腫瘤中關(guān)于MACC-1的生存研究相符合。

綜上所述，鼻咽癌組織中MACC-1 的表達(dá)情況可作為判定鼻咽癌患者預(yù)后的一個獨立指標(biāo)，且積極研究MACC-1 基因的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及調(diào)控方式有助于發(fā)現(xiàn)新的鼻咽癌的靶向治療方式。