唐 濤， 孫佩欣， 姚 冰， 梁海洋， 樸浩哲

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院 遼寧省腫瘤醫(yī)院 神經(jīng)外科，遼寧 沈陽(yáng) 110042

脊髓損傷是一種高致殘率疾病，其損傷程度不僅取決于機(jī)械創(chuàng)傷造成的原發(fā)性損傷，也與血管功能障礙、水腫、局部缺血、自由基產(chǎn)生、炎癥及細(xì)胞凋亡等繼發(fā)性損傷程度相關(guān)[1-2]。自由基于脊髓損傷后立即產(chǎn)生，通過(guò)磷脂中不飽和脂肪酸的過(guò)氧化作用導(dǎo)致細(xì)胞膜損傷，進(jìn)一步損害脊髓。其影響時(shí)間主要集中發(fā)生于損傷時(shí)至傷后48 h[3]。目前，應(yīng)用的各種神經(jīng)保護(hù)劑中，早期給予大劑量甲基強(qiáng)的松龍是一種有效控制繼發(fā)性脊髓損傷的治療方法。甲基強(qiáng)的松龍別名甲強(qiáng)龍，可有效抗炎，降低脂質(zhì)過(guò)氧化，抑制自由基。但大劑量甲強(qiáng)龍沖擊治療可增加感染、胃腸道出血及股骨頭壞死的風(fēng)險(xiǎn)[4]。

依達(dá)拉奉是一種有效的自由基清除劑，臨床上用于減少急性腦梗死引起的神經(jīng)元損傷。依達(dá)拉奉通過(guò)清除自由基，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化作用在腦缺血模型中提供神經(jīng)保護(hù)作用[5]。本研究建立大鼠脊髓損傷模型，檢測(cè)依達(dá)拉奉與甲強(qiáng)龍治療后血清丙二醛(Malonaldehyde，MDA)、白細(xì)胞介素6(interleukin-6，IL-6)及S-100B蛋白的水平，檢驗(yàn)依達(dá)拉奉治療急性脊髓損傷的效果，為臨床治療脊髓損傷提供依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組 36只成年健康雄性SD大鼠[北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，許可證號(hào)：SCXK-(軍)-2012-0003]，體質(zhì)量280～300 g，隨機(jī)分為對(duì)照組、依達(dá)拉奉組、甲強(qiáng)龍組，每組12只。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料 甲強(qiáng)龍(美國(guó)輝瑞制藥)，S-100B酶聯(lián)免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)試劑盒(R&D systems)，IL-6 ELISA試劑盒(Abcam公司)，MDA ELISA試劑盒(優(yōu)爾生商貿(mào))，依達(dá)拉奉(江蘇先聲制藥)，生理鹽水，磷酸緩沖鹽溶液緩沖液。

1.3 動(dòng)物模型制備 室溫條件下，異氟醚麻醉，大鼠俯臥位固定于手術(shù)操作板。以T10棘突為中心行后正中縱切口切開(kāi)皮膚、皮下組織，咬除T10脊突及椎板，形成直徑約4 mm的骨窗。將大鼠用固定器固定于MASCIS打擊器平臺(tái)，連接監(jiān)測(cè)電極并瞄準(zhǔn)打擊頭，打擊桿質(zhì)量10 g，提高至12.5 cm高度，電磁鐵吸住，按壓釋放按鈕，打擊桿自由落下。檢查打擊器曲線，確認(rèn)打擊有效性。止血，逐層縫合肌肉、皮下組織和皮膚。

1.4 研究方法 建模成功后2 h根據(jù)分組給藥：對(duì)照組腹腔注射生理鹽水1 ml，每日1次，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束,共計(jì)14次；依達(dá)拉奉組將3 mg/kg依達(dá)拉奉經(jīng)生理鹽水稀釋至1 ml腹腔注射，每日1次，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束；甲強(qiáng)龍組將30 mg/kg甲強(qiáng)龍經(jīng)生理鹽水稀釋至1 ml腹腔注射，并于第6小時(shí)及第24小時(shí)重復(fù)注射上述劑量。術(shù)后第1、3、7、14天進(jìn)行運(yùn)動(dòng)功能(Basso Beattie Bresnahan，BBB)評(píng)分，以評(píng)價(jià)大鼠后肢運(yùn)動(dòng)恢復(fù)情況。評(píng)分由不清楚實(shí)驗(yàn)分組的工作人員于一直徑2 m的圓形曠場(chǎng)實(shí)施[6]。分別于術(shù)后第1、3、7天BBB評(píng)分后經(jīng)鼠尾靜脈取靜脈血1 ml，靜置20 min后離心，取上層血清置于-80℃深低溫冰箱儲(chǔ)存，檢測(cè)血清MDA、S-100B蛋白及IL-6濃度。

2 結(jié)果

2.1 3組BBB評(píng)分比較 實(shí)驗(yàn)前建立實(shí)驗(yàn)動(dòng)物BBB評(píng)分基準(zhǔn)線，將達(dá)不到21分的動(dòng)物剔除。術(shù)后第1天，3組動(dòng)物評(píng)分均下降到0～1 分，組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。術(shù)后第3天各組評(píng)分均有所上升，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。術(shù)后第7天，兩治療組評(píng)分均較對(duì)照組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。兩治療組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)圖1。

圖1 運(yùn)動(dòng)行為學(xué)評(píng)分

2.2 3組S-100B蛋白比較 脊髓損傷后第1天，兩治療組大鼠血清S-100B水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。脊髓損傷后第7天，對(duì)照組大鼠血清S-100B水平明顯高于兩治療組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 脊髓損傷大鼠血清S100B水平濃度/pg·>ml-1)

注：與對(duì)照組比較，①P<0.05

2.3 3組IL-6比較 脊髓損傷后第1天，甲強(qiáng)龍組脊髓損傷大鼠IL-6水平明顯低于其他兩組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。脊髓損傷后第3、7天，兩治療組大鼠IL-6水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 脊髓損傷大鼠血清IL-6水平濃度/pg·>ml-1)

注：與對(duì)照組比較，①P<0.05；與甲強(qiáng)龍組比較，②P<0.05

2.4 3組MDA比較 脊髓損傷后第1天，3組MDA水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。脊髓損傷第7天，兩治療組脊髓損傷大鼠血清MDA水平明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。兩治療組組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 脊髓損傷大鼠血清MDA水平濃度/mmol·>ml-1)

注：與對(duì)照組比較，①P<0.05

3 討論

原發(fā)性脊髓損傷在創(chuàng)傷時(shí)細(xì)胞體及神經(jīng)元受到直接、不可逆轉(zhuǎn)的破壞。繼發(fā)性損傷機(jī)制在原發(fā)性損傷后開(kāi)始，導(dǎo)致繼發(fā)性細(xì)胞死亡[7]。繼發(fā)性損傷引起的神經(jīng)功能障礙多于原發(fā)性損傷。由于原發(fā)損傷的不可預(yù)測(cè)性以及激發(fā)損傷的復(fù)雜性，目前，脊髓損傷治療策略均集中在減輕繼發(fā)損傷程度上，以達(dá)到改善預(yù)后的目的[8]。大劑量甲強(qiáng)龍沖擊治療被認(rèn)為是有效的治療手段，本研究以大劑量甲強(qiáng)龍沖擊治療為陽(yáng)性對(duì)照，而生理鹽水被設(shè)定為陰性對(duì)照。

BBB評(píng)分結(jié)果顯示，損傷后第1天及第3天各組運(yùn)動(dòng)功能未見(jiàn)明顯差異，而7天后，兩治療組評(píng)分明顯優(yōu)于對(duì)照組，說(shuō)明依達(dá)拉奉可有效改善脊髓損傷大鼠的運(yùn)動(dòng)行為學(xué)評(píng)分，達(dá)到與甲強(qiáng)龍相似的結(jié)果。MDA是評(píng)價(jià)氧化應(yīng)激的常見(jiàn)指標(biāo)[9]，損傷后第1天，甲強(qiáng)龍組表現(xiàn)出明顯的抗氧化應(yīng)激作用，這與甲強(qiáng)龍沖擊治療的給藥方式有關(guān)，而依達(dá)拉奉組在損傷后7 d表現(xiàn)出良好的清除自由基、抗氧化應(yīng)激作用。IL-6在體內(nèi)參與眾多病理生理過(guò)程，可調(diào)節(jié)多種細(xì)胞的生長(zhǎng)與分化，可調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、急性期反應(yīng)及造血功能，在機(jī)體的抗感染免疫反應(yīng)中起重要作用[10]。本研究結(jié)果表明，依達(dá)拉奉可以有效降低脊髓損傷后血清IL-6水平，減輕繼發(fā)性炎癥反應(yīng)，但其作用與甲強(qiáng)龍組比較仍有差異。S-100B蛋白是一種酸性鈣結(jié)合蛋白，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)主要存在于膠質(zhì)細(xì)胞，其血清濃度反映神經(jīng)損傷的程度，由于其在脊髓損傷后可以激活膠質(zhì)細(xì)胞[11]，一定程度上反映炎癥反應(yīng)的程度。應(yīng)用依達(dá)拉奉治療脊髓損傷可明顯降低血清S-100B水平，減輕神經(jīng)損傷程度。

綜上所述，依達(dá)拉奉治療急性脊髓損傷策略能夠有效減輕氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)，提高運(yùn)動(dòng)功能。