李德宇 李 娜

鄭州大學附屬腫瘤醫(yī)院(河南省腫瘤醫(yī)院) 1 核醫(yī)學科 2 手術(shù)部，河南省鄭州市 450008

甲狀腺癌是發(fā)病率增高最快的實體癌，90%以上的甲狀腺癌為分化型甲狀腺癌。大多數(shù)甲狀腺癌患者經(jīng)過手術(shù)治療、碘131治療以及甲狀腺抑制治療后有較好的預(yù)后，能夠長期生存，但仍有5%～23%的患者發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，其中又有大約30%的患者在自然狀態(tài)下或者治療過程中失分化，攝碘能力喪失，發(fā)展為碘難治性分化型甲狀腺癌，患者預(yù)后較差[1]。鈉碘同向轉(zhuǎn)運體(Sodium iodide symporter，NIS)在甲狀腺攝碘過程中發(fā)揮重要的作用[2]。Oct-4是POU轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一，在發(fā)育的不同時期、不同分化過程中發(fā)揮著重要的生物學功能，通過調(diào)控靶基因發(fā)揮相應(yīng)的作用[3]。CD133是干細胞以及腫瘤干細胞表面特異性標記分子[4]。本文探討碘難治性分化型甲狀腺癌中NIS、Oct-4和CD133的表達水平，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年1月—2017年10月在我院診斷治療的碘難治性分化型甲狀腺癌患者31例為碘難治組，另選擇碘治療有效甲狀腺癌患者30例為碘有效組，甲狀腺結(jié)節(jié)30例為對照組。納入標準：患者均行甲狀腺全切術(shù)，病理證實診斷，甲狀腺癌患者經(jīng)131I治療；所有患者臨床資料完整。排除標準：合并其他系統(tǒng)癌癥，臨床資料不完整者。131I治療有效判斷方法[5]：治愈為服用131I后5～7d全身顯像以及輔助影像學檢查結(jié)果顯示原發(fā)灶以及轉(zhuǎn)移灶均消失，Tg水平持續(xù)低于2ng/ml；好轉(zhuǎn)為原發(fā)灶縮小，轉(zhuǎn)移灶大小和數(shù)量減少，Tg水平下降。

1.2 檢測項目 NIS、Oct-4以及CD133采用免疫組化的方法檢測。制作石蠟切片，HE染色，觀察腫瘤細胞形態(tài)。脫蠟，抗原修復(fù)，消除內(nèi)源性H2O2活性，封閉，一抗孵育，二抗孵育，DAB顯色，復(fù)染，脫水，透明，封片。觀察結(jié)果。NIS、Oct-4以及CD133均表達于細胞內(nèi)。表達水平判斷：陽性細胞數(shù)：陽性細胞比例>75%為4分，51%～75%為3分，26%～50%為2分，10%～25%為1分，<10%為0分；染色深度：深棕色或者深褐色為3分，棕黃色為2分，淺黃色為1分；陽性判斷：陽性細胞數(shù)評分×染色深度評分，≥3分為陽性，<3分為陰性。

1.3 分析方法 比較三組NIS、Oct-4以及CD133陽性率及陽性積分。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS15.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，計量資料采用均數(shù)±標準差表示，采用F檢驗及t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 三組CD133陽性率及陽性積分比較 見表1。CD133表達在甲狀腺濾泡細胞、癌細胞胞漿以及細胞膜上。對照組無CD133陽性表達。碘難治組CD133陽性率顯著高于碘有效組，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=5.908，P=0.015)；碘難治組CD133陽性積分顯著高于碘有效組，差異有統(tǒng)計學意義(t=25.735，P=0.000)。

表1 碘難治組與碘有效組CD133陽性率及陽性積分比較

2.2 三組NIS陽性率及陽性積分比較 見表2。NIS表達在甲狀腺濾泡胞漿內(nèi)，未見細胞核有表達。碘有效組與對照組NIS陽性率均為100%，顯著高于碘難治組，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=21.999、21.999，P=0.000)；碘有效組與對照組NIS陽性積分顯著高于碘難治組，差異有統(tǒng)計學意義(t=16.162、16.167，P=0.000)；碘有效組與對照組NIS陽性積分比較差異無統(tǒng)計學意義(t=1.145，P=0.257)。

表2 三組NIS陽性率及陽性積分比較

2.3 三組Oct-4陽性率及陽性積分比較 見表3。Oct-4在甲狀腺濾泡細胞與癌細胞的細胞核，未見胞漿表達。對照組無Oct-4陽性表達。碘難治組與碘有效組Oct-4陽性表達率均為100%；兩組Oct-4陽性積分比較差異無統(tǒng)計學意義(t=0.557，P=0.579)。

表3 碘難治組與碘有效組Oct-4陽性率及陽性積分比較

3 討論

大多數(shù)的甲狀腺癌患者可以通過手術(shù)治療、放射性碘治療、TSH抑制獲得長期無疾病生存，但仍然有一部分患者腫瘤細胞的形態(tài)以及功能發(fā)生退化，出現(xiàn)攝碘能力下降甚至喪失，稱為碘難治性甲狀腺癌，患者治療效果差，預(yù)后差，平均生存期縮短。分化型甲狀腺癌多用分子水平改變導(dǎo)致攝碘功能下降是碘難治性分化型甲狀腺癌的主要發(fā)生機制[6]。碘突變以及染色體重組在甲狀腺癌的發(fā)生及發(fā)展過程中發(fā)揮了決定性的作用，這些改變激活MAPK以及磷脂酰肌醇-3-激酶信號通路上的多個靶點，導(dǎo)致細胞增殖、異常、癌變、攝碘能力下降。

NIS位于甲狀腺濾泡細胞基底細胞膜上，在攝碘過程中發(fā)揮重要的作用，在有Na+的條件下，NIS可轉(zhuǎn)運碘離子等一些單價陰離子，但對碘離子的轉(zhuǎn)運作用最強，從而發(fā)揮攝碘功能。在正常的甲狀腺組織中，NIS主要分布在少數(shù)緊靠著毛細血管的濾泡細胞基底細胞膜上，在自身免疫性甲狀腺炎中期分布情況與正常情況相當，在彌漫性結(jié)節(jié)性增生的甲狀腺組織中，分布增加，在高分化的甲狀腺癌中分布減少，在低分化的甲狀腺癌中更少甚至缺失[7-8]。在本文中，碘治療有效患者以及對照組NIS陽性率為100.00%，而碘難治性分化型甲狀腺癌的陽性率為41.94%，顯著下降，對三組的陽性積分比較，碘難治性分化型甲狀腺癌患者積分也顯著下降。這個結(jié)果提示NIS分布下降可能是導(dǎo)致碘治療效果差的重要機制之一。

Oct-4是POU轉(zhuǎn)錄因子家族中的重要成員。POU家族成員有一個保守的POU結(jié)合域，其能夠結(jié)合八聚體模體而發(fā)揮調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄的作用。目前的研究認為在惡性腫瘤中共有一定數(shù)量的腫瘤干細胞，這類細胞無限增殖，在腫瘤的發(fā)生及發(fā)展過程中發(fā)揮重要的作用[9]。Oct-4是胚胎干細胞的標志物，其表達改變是干細胞分化狀態(tài)發(fā)生改變的標志，維持干細胞未分化狀態(tài)，調(diào)節(jié)干細胞分化過程，維持細胞多功能狀態(tài)。目前的研究證實其在腫瘤的起源中發(fā)揮重要的作用，其基因的異常表達可導(dǎo)致正常細胞惡化。在本文中，難治性分化型甲狀腺組以及碘治療有效的甲狀腺癌患者Oct-4陽性率均達到100%，而對照組無陽性表達，這個結(jié)果提示Oct-4在甲狀腺癌的發(fā)生及發(fā)展過程中也發(fā)揮了重要的作用，并不是導(dǎo)致碘治療無效的相關(guān)機制，但其可以作為碘難治性分化型甲狀腺癌治療的靶點。

CD133最早從造血干細胞中分離，CD133蛋白是細胞膜蛋白超家族中的醫(yī)院，含有至少9個不同的非翻譯區(qū)外顯子，其表達具有組織依賴性，在分化細胞中表達下調(diào)。CD133也是腫瘤干細胞特異性表面分子標志物，目前的研究證實在多種癌癥中CD133有陽性表達，例如胰腺癌、結(jié)腸癌、肝癌，這些由CD133標記的腫瘤干細胞在體外環(huán)境中具有自我分化、更新、克隆、增殖的能力，越來越多的證據(jù)證實CD133可能是腫瘤干細胞表面特異性表達的分子，提示其可以作為抗腫瘤治療的新靶點[10]。在本文中對照組無CD133治療，碘治療有效組陽性率低于碘難治組，陽性積分也顯著低于碘難治組，這提示CD133在甲狀腺癌的發(fā)生及發(fā)展過程中發(fā)揮了一定的作用，并且也可能是攝碘功能下降甚至喪失的機制抑制，可以作為碘難治性分化型甲狀腺癌的新的治療靶點。

綜上所述，NIS在碘難治性分化型甲狀腺癌中表達缺失，可能是碘治療無效的機制之一；CD133在碘難治性分化型甲狀腺癌中表達升高，可能參與了攝碘功能的下調(diào)，可以作為治療新靶點；Oct-4在碘治療有效的甲狀腺癌以及碘難治性分化型甲狀腺癌表達率均達到了100.00%，雖然可能不是碘治療無效的機制，但可以作為碘難治性分化型甲狀腺癌的治療靶點。