魏 娜，孟文娟，何 雷，王珍珍

(江蘇豪森藥業(yè)集團有限公司，江蘇 連云港 222000)

替加環(huán)素是第一個被批準(zhǔn)的新型靜脈注射用甘氨酰四環(huán)素類抗生素，有廣譜抗微生物活性，用于治療由革蘭陰性或陽性病原體、厭氧性生物及耐甲氧西林金葡菌(MRSA)和甲氧西林敏感金葡菌(MSSA)導(dǎo)致的clA1,DSSSI，替加環(huán)素向醫(yī)生們提供了一種新的、可在治療初期當(dāng)病因尚未明了時供選擇的廣抗生素，并且不需根據(jù)腎功能受損情況調(diào)整劑量，使用方便，每12 h服用一次即可。替加環(huán)素是由美國輝瑞(原惠氏)公司研究開發(fā)，于2012年初在中國上市，2013年初有國內(nèi)仿制藥上市。藥品在出廠到儲藏、運輸、存放、銷售等環(huán)節(jié)，如處置不當(dāng)會影響藥品外觀顏色，特別是在貯藏期間受不同溫度、不同濕度、空氣質(zhì)量、光線強弱等因素的干擾，容易引起降解，可能產(chǎn)生有毒性的有色雜質(zhì)[1]。替加環(huán)素作為一種注射用抗生素藥品，其有色雜質(zhì)控制更為重要。

1 有色雜質(zhì)的檢測方法

溶液顏色檢查法廣泛應(yīng)用于化學(xué)藥品的質(zhì)量控制，目前，在2015版中國藥典通則0901溶液顏色檢查法中列出了幾種檢測方法：第一法(比色法)、第二法(紫外-可見分光光度法)、第三法(色差計法)。目視檢查法較為常用，但主觀誤差大，易受到外界照明條件及觀察者心理、生理及環(huán)境等因素的影響，對顏色不能進行量化的測定，對與標(biāo)準(zhǔn)比色液色調(diào)不一致和限度邊緣的樣品基本無法判定，造成結(jié)果判定差異。分光光度法通過對標(biāo)準(zhǔn)比色液在可見光區(qū)吸收情況進行考察，選擇各色調(diào)的最大吸收波長測定各色號的吸收度在一定程度上可以控制藥品溶液顏色，但藥品顏色往往不是單一波長所能表現(xiàn)的，也就是說在單一波長處的吸收度不能完全反映藥品顏色的全部特性。色差計是根據(jù)完整、成熟的色度學(xué)理論設(shè)計而成，該方法在很大程度上彌補了目視檢查法與分光光度法的不足，能夠客觀數(shù)字化的反映判斷結(jié)果，使藥品標(biāo)準(zhǔn)的判定更具科學(xué)性、嚴(yán)謹性[2]。

2 雜質(zhì)來源分析

參考相關(guān)文獻，替加環(huán)素容易氧化降解，在室溫條件下，溶解于水中，敞口攪拌數(shù)小時顏色由黃色/橘色變至深綠色。原研專利中，對替加環(huán)素進行了氧化破壞，使用制備色譜得到了有色雜質(zhì)(圖1)，并使用NMR和HRMS對有色雜質(zhì)進行了結(jié)構(gòu)確認，發(fā)現(xiàn)替加環(huán)素氧化降解時，B環(huán)打開形成羧酸和羥基、D環(huán)羥基氧化為醌而生成有色雜質(zhì)，該雜質(zhì)即為USP方法中的開環(huán)雜質(zhì)。

圖1 替加環(huán)素氧化得到有色雜質(zhì)

3 檢測方法開發(fā)

參考注射用替加環(huán)素相關(guān)文獻，確定采用色差計法對替加環(huán)素原料中可能降解產(chǎn)生的有色雜質(zhì)進行控制：取替加環(huán)素0.10 g，精密稱定，加0.02 mol/L鹽酸水溶液10.6 mL使溶解，混勻，靜置15 min后加入1 cm比色皿中，立即采用色差計測定替加環(huán)素與純化水的L*、a*、b*相對值，并利用公式計算“計算顏色值”(CCV,calculated color value)=2.19×L*+2.59×a*-0.48×b*。

該有色雜質(zhì)無明顯的警示結(jié)構(gòu)，在替加環(huán)素USP質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，有關(guān)物質(zhì)中未知單雜的限度為不大于0.10%。在色差計顏色的方法研究中，不同濃度的有色雜質(zhì)含量與CCV值有明顯的對應(yīng)關(guān)系，當(dāng)樣品中添加有色雜質(zhì)為0.10%時，計算顏色值為103，因此將計算顏色值即CCV值標(biāo)準(zhǔn)定為不小于100。

4 結(jié)果與討論

(1)儀器準(zhǔn)確度：考察USP的J、L、O號標(biāo)準(zhǔn)比色液，結(jié)果表明儀器準(zhǔn)確度很好。

(2)儀器專屬性：考察USP的J、L、F、O、Q號標(biāo)準(zhǔn)比色液，結(jié)果表明儀器的專屬性很好。

(3)儀器重復(fù)性：考察USP的 L號標(biāo)準(zhǔn)比色液，結(jié)果表明重復(fù)性好。

(4)溶劑選擇： 0.02 mol/L鹽酸乳酸鈉林格溶液、0.02 mol/L鹽酸氯化鈉溶液、0.02 mol/L鹽酸葡萄糖溶液、0.02 mol/L鹽酸溶液四種溶劑的CCV值顯示溶劑種類對結(jié)果無影響。當(dāng)稀釋液為0.02 mol/L鹽酸時，替加環(huán)素溶液的pH值和CCV值與制劑相似。

(5)溶液穩(wěn)定性：替加環(huán)素溶液在0～2 h內(nèi)，RSD為0.49%，溶液穩(wěn)定性很好。

(6)精密度：替加環(huán)素溶液10次測定的CCV值RSD為0.29%，精密度很好。

(7)線性：有色雜質(zhì)濃度范圍為0～38.12 μg/mL時，線性關(guān)系良好(n=10)，線性回歸方程為CCV = -2.3980×C + 216.0197，相關(guān)系數(shù) r=0.9974。

(8)準(zhǔn)確度：不同濃度有色雜質(zhì)加入量與CCV值有非常明顯的變化趨勢，即有色雜質(zhì)的濃度越大，對應(yīng)的CCV值越小。

(9)耐用性：復(fù)溶體積10.6 mL±0.2 mL與靜置時間15 min±2 min在樣品處理過程中耐用性良好。