曹華琳 劉亞軍

[摘?要]?目的?對(duì)比分析核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)對(duì)輸血相關(guān)傳染性疾病的檢測(cè)效果。方法?選取我站采集的26325份無(wú)償獻(xiàn)血的檢驗(yàn)樣本作為研究對(duì)象，通過(guò)進(jìn)行2次酶聯(lián)免疫檢測(cè)或者必要時(shí)聯(lián)合1次核酸檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果?經(jīng)過(guò)對(duì)26325份血液標(biāo)本進(jìn)行酶聯(lián)免疫檢測(cè)和核酸檢測(cè)，酶聯(lián)免疫檢測(cè)檢出318例陽(yáng)性，核酸檢測(cè)檢出373例陽(yáng)性，其中核酸檢測(cè)出含有乙肝表面抗原（HBsAg）的血液樣本296例，檢出含有丙型肝炎病毒（HCV）的血液樣本53例，檢出含有人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV）的血液樣本24例，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)聯(lián)合應(yīng)用后，檢出381例陽(yáng)性，提示聯(lián)合檢測(cè)的檢出率高于任何單獨(dú)檢測(cè)。結(jié)論?核酸檢測(cè)在輸血傳播疾病的篩查過(guò)程中具有重要的價(jià)值，其能夠降低單獨(dú)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定的漏診率，提高乙肝病毒、丙肝病毒和HIV病毒等的篩查水平，而核酸檢測(cè)聯(lián)合酶聯(lián)免疫檢測(cè)具有更高的檢出效果。

[關(guān)鍵詞]?核酸檢測(cè);酶聯(lián)免疫檢測(cè);血液傳播

中圖分類(lèi)號(hào)：R446.6;R446.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1009-816X（2019）02-0171-03

doi：10.3969/j.issn.1009-816x.2019.02.021

乙肝病毒感染、丙肝病毒感染、HIV病毒感染能夠通過(guò)血液途徑進(jìn)行傳播，流行病學(xué)研究證實(shí)，每年輸血導(dǎo)致的乙肝病毒傳播的病例可達(dá)5萬(wàn)～10萬(wàn)人左右[1，2]。臨床上輸血治療前通過(guò)對(duì)血液制品的相關(guān)傳染性病毒的檢測(cè)，能夠提高血液制品的安全性。現(xiàn)階段臨床上采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)輸血相關(guān)病毒的陽(yáng)性情況，雖然其能夠提高乙肝病毒、丙肝病毒和HIV病毒的檢出水平，但長(zhǎng)期的隨訪(fǎng)觀(guān)察研究證實(shí)，酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)的局限性較為明顯，其漏診率較高，假陰性率可超過(guò)8%以上[3]。核酸檢測(cè)能夠通過(guò)對(duì)血液制品中的相關(guān)病毒顆粒DNA或RNA的擴(kuò)增，特異性的檢測(cè)不同的病毒感染情況[4]。部分研究者探討了核酸檢測(cè)在輸血相關(guān)感染性疾病中的作用，認(rèn)為其可以有效預(yù)防輸血相關(guān)疾病的傳播[5]，但與酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定的對(duì)比研究不足。為了提高輸血治療的安全性，本次研究選取我站采集的26325份無(wú)償獻(xiàn)血者的檢驗(yàn)樣本作為研究對(duì)象，探討了核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)聯(lián)合預(yù)防輸血相關(guān)疾病傳播的臨床效果，報(bào)道如下。

1?資料與方法

1.1?標(biāo)本：選取我站在2017年2月至2018年2月間采集的26325份無(wú)償獻(xiàn)血者的檢驗(yàn)樣本作為研究對(duì)象，獻(xiàn)血者經(jīng)過(guò)干式生化儀檢測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和快速金標(biāo)法檢測(cè)乙肝表面抗原（HBsAg）后，分別抽取2管靜脈血，每管5mL，其中一管含有分離膠，用于核酸檢測(cè);另一管不含分離膠，用于酶聯(lián)免疫檢測(cè)。含有分離膠的樣本需在4小時(shí)內(nèi)進(jìn)行離心處理，所有血液標(biāo)本采集處理完畢后均放于2～8℃的冰箱內(nèi)，等待統(tǒng)一檢測(cè)。

1.2?儀器與試劑：

1.2.1?主要儀器：酶免檢測(cè)系統(tǒng)：全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)處理系統(tǒng)（深圳愛(ài)康UranusAE280）、Freedom EVO clinical全自動(dòng)加樣儀（瑞士TECAN公司）;核酸檢測(cè)儀器：HAMILTON STAR全自動(dòng)混樣儀、Roche cobas s 201核酸提取擴(kuò)增系統(tǒng)（瑞士Roche公司）。

1.2.2?主要試劑：HBsAg ELISA試劑（北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司、美國(guó)雅培公司），抗-丙型肝炎病毒（（HCV）ELISA試劑（北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司、珠海麗珠診斷試劑有限公司），抗-人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV）ELISA試劑（法國(guó)伯樂(lè)公司、北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司），HBV、HCV、HIV核酸提取和擴(kuò)增檢測(cè)試劑（羅氏診斷公司，MPX1試劑）。所有試劑均經(jīng)過(guò)批批檢，嚴(yán)格按照SOP進(jìn)行操作并在有效期內(nèi)使用。

1.3?檢測(cè)方法：

1.3.1?ELISA檢測(cè)：對(duì)獻(xiàn)血者的血液標(biāo)本采用2種ELISA試劑平行檢測(cè)HBsAg、抗-HCV、抗-HIV。其中：HBsAg檢測(cè)S/CO值在0.8～1.0設(shè)置為灰區(qū)，S/CO值≥0.8即判為有反應(yīng)性;抗-HCV檢測(cè)S/CO值在0.7～1.0設(shè)置為灰區(qū)，S/CO值≥0.7即判為有反應(yīng)性;抗-HIV檢測(cè)S/CO值在0.7～1.0設(shè)置為灰區(qū)，S/CO值≥0.7即判為有反應(yīng)性。雙試劑有反應(yīng)性的標(biāo)本直接判為不合格;單試劑有反應(yīng)性標(biāo)本采用同種試劑對(duì)標(biāo)本進(jìn)行2孔復(fù)測(cè)，復(fù)測(cè)結(jié)果2孔均無(wú)反應(yīng)性為合格，2孔任1孔有反應(yīng)性判為不合格。

1.3.2?核酸檢測(cè)：將2種ELISA檢測(cè)結(jié)果呈陰性的26007份標(biāo)本送陜西省血液中心進(jìn)行核酸集中化檢測(cè)。采用6個(gè)標(biāo)本混合檢測(cè)模式，對(duì)有反應(yīng)性的標(biāo)本進(jìn)行拆分，混合檢測(cè)有反應(yīng)性拆分后還呈有反應(yīng)性的標(biāo)本判為有反應(yīng)性，混合檢測(cè)有反應(yīng)性拆分無(wú)反應(yīng)性的標(biāo)本判為無(wú)反應(yīng)性。拆分有反應(yīng)性的標(biāo)本，在進(jìn)一步鑒別后結(jié)果為有反應(yīng)性的最終判定為有反應(yīng)性，鑒別為無(wú)反應(yīng)性的最終判定為不確定，拆分后為有反應(yīng)性結(jié)果的所有血制品均做報(bào)廢處理。

1.4?統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：統(tǒng)計(jì)軟件采用SPSS 16.0計(jì)數(shù)資料采用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn);P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2?結(jié)果

2.1?酶聯(lián)免疫檢測(cè)與核酸檢測(cè)的結(jié)果比較：通過(guò)對(duì)26325份血液標(biāo)本進(jìn)行酶聯(lián)免疫檢測(cè)，檢測(cè)出318例陽(yáng)性，通過(guò)核酸檢測(cè)，檢測(cè)出373例陽(yáng)性，結(jié)果顯示存在部分含有病毒且處于變異、窗口期、隱性感染時(shí)的樣本，使用酶聯(lián)免疫檢測(cè)無(wú)法檢出的情況，其中核酸檢測(cè)新檢出含有HBsAg的血液樣本37例，新檢出含有HCV的血液樣本14例，新檢出含有HIV的血液樣本4例，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。

2.2?不同檢測(cè)方法的結(jié)果比較：經(jīng)過(guò)對(duì)26325份血液標(biāo)本中進(jìn)行酶聯(lián)免疫檢測(cè)和核酸檢測(cè)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行匯總，分別統(tǒng)計(jì)單獨(dú)應(yīng)用酶聯(lián)免疫、核酸檢測(cè)與聯(lián)合檢測(cè)的結(jié)果，顯示聯(lián)合檢測(cè)具有更好地檢出效果，將各種檢測(cè)方法的結(jié)果進(jìn)行匯總對(duì)比，結(jié)果顯示聯(lián)合檢測(cè)的檢出率更高，可以進(jìn)一步提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，降低輸血傳播疾病的風(fēng)險(xiǎn)。

3?討論

乙肝病毒感染、丙肝病毒感染、HIV病毒感染通過(guò)輸血傳播的風(fēng)險(xiǎn)明顯上升，乙肝病毒感染、丙肝病毒感染等感染導(dǎo)致的患者多器官功能衰竭和遠(yuǎn)期并發(fā)癥的發(fā)生率也明顯的升高[5]。特別是在偏遠(yuǎn)或者經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)的地區(qū)，由于檢測(cè)技術(shù)的落后，血制品乙肝病毒感染、丙肝病毒感染等漏診而導(dǎo)致疾病傳播的風(fēng)險(xiǎn)有進(jìn)一步增高的趨勢(shì)[6]。對(duì)于相關(guān)血液制品中不同感染性病毒的檢測(cè)，不僅能夠保證血液制品的安全性，同時(shí)還能夠降低輸血相關(guān)因素導(dǎo)致的正常人群的感染和感染性疾病的擴(kuò)散。臨床上通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)血清中乙肝病毒等顆粒蛋白，其檢測(cè)環(huán)境要求相對(duì)較低，檢測(cè)試劑盒的操作較為簡(jiǎn)便[7]。但一項(xiàng)囊括了217例樣本量的血液制品的病毒篩查分析結(jié)果提示，兩次酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定篩查相關(guān)傳染性病毒感染的靈敏度不足78%，漏診率或者誤診率可達(dá)6%～10%[8]。核酸檢測(cè)能夠通過(guò)對(duì)于相應(yīng)病毒顆粒RNA的擴(kuò)增，采用PCR方式檢測(cè)基因的擴(kuò)增產(chǎn)物，進(jìn)而識(shí)辨不同病毒感染的風(fēng)險(xiǎn)。核酸檢測(cè)對(duì)于血液制品中相關(guān)病毒的基礎(chǔ)性濃度要求較低，在較低的基線(xiàn)水平上即可實(shí)現(xiàn)對(duì)于病毒的檢測(cè)效果。同時(shí)核酸檢測(cè)不受到環(huán)境溫度的影響，對(duì)處于窗口期、免疫變異病毒或無(wú)應(yīng)答狀態(tài)的病毒顆粒等，均具有較高的檢測(cè)靈敏度[9]。在本次研究中，對(duì)病毒處于窗口期、病毒變異或者隱性感染的患者中，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定的局限性較為明顯，其無(wú)法進(jìn)行相關(guān)血液標(biāo)本的檢測(cè)。而核酸檢測(cè)在酶聯(lián)免疫檢測(cè)陰性的標(biāo)本中篩查出了不同數(shù)量的乙肝病毒、丙肝病毒和HIV病毒感染情況，表明酶聯(lián)免疫檢測(cè)存在明顯的漏診情況，而核酸檢測(cè)能夠提高輸血相關(guān)病毒的檢測(cè)能力。通過(guò)匯集不同的相關(guān)文獻(xiàn)，認(rèn)為這主要考慮與下列幾個(gè)原因有關(guān)[10～12]：（1）核酸檢測(cè)的特異性較高，不論病毒是否處于窗口期、靜止期或隱性感染期，核酸檢測(cè)方法均能夠通過(guò)對(duì)于病毒DNA的擴(kuò)增，從而實(shí)現(xiàn)篩查作用;（2）核酸檢測(cè)受操作方法、步驟、試劑盒的影響較小，由于病毒DNA短期內(nèi)不存在變異，因此HBsAg變異等并不會(huì)影響到核酸檢測(cè)的靈敏度。趙紅娜等[13]也發(fā)現(xiàn)，核酸檢測(cè)能夠提高5%左右的輸血相關(guān)傳播性疾病的篩查靈敏度，同時(shí)能夠顯著降低酶聯(lián)免疫檢測(cè)的漏診水平。單獨(dú)應(yīng)用酶聯(lián)免疫與核酸檢測(cè)檢查結(jié)果分析可見(jiàn)，單獨(dú)采用核酸檢測(cè)的檢出效果更為明顯，這主要由于核酸檢測(cè)的穩(wěn)定性、對(duì)于標(biāo)本的要求相對(duì)較低、檢測(cè)結(jié)果的抗干擾能力較強(qiáng)。特別是對(duì)于氣候或溫度變化較為明顯的地區(qū)，核酸通過(guò)擴(kuò)增病毒顆粒DNA進(jìn)而進(jìn)行檢測(cè)的方式，穩(wěn)定性更高。本研究還發(fā)現(xiàn)聯(lián)合核酸檢測(cè)+酶聯(lián)免疫檢測(cè)能夠進(jìn)一步提高單獨(dú)核酸檢測(cè)的效果，提示了聯(lián)合篩查在血液制品檢測(cè)過(guò)程中的作用。但部分研究者并不認(rèn)為聯(lián)合核酸檢測(cè)+酶聯(lián)免疫檢測(cè)的效果優(yōu)于單獨(dú)核酸檢測(cè)，認(rèn)為聯(lián)合檢測(cè)的費(fèi)用較高而靈敏度并無(wú)明顯的上升[14]，這與本次研究的結(jié)論存在一定的差別，考慮可能與PCR儀器的精度、PCR引物設(shè)計(jì)等的差異有關(guān)。

綜上所述，核酸檢測(cè)在輸血傳播性疾病的篩查過(guò)程中具有重要的價(jià)值，其能夠降低單獨(dú)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定的漏診率，提高乙肝病毒、丙肝病毒和HIV病毒等的篩查水平，而聯(lián)合核酸檢測(cè)和酶聯(lián)免疫檢測(cè)具有更高地檢出效果。

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（收稿日期：2018-9-6）