張寧 郭陽 劉微

[摘要]目的 建立生脈飲（黨參方）中五味子醇甲含量的測定方法。方法 采用高效液相色譜法（HPLC）測定生脈飲（黨參方）中五味子醇甲含量。色譜條件：色譜柱為Agilent 色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為甲醇-水（62：38），檢測波長為250 nm，流速為1.0 ml/min，進樣體積為10 μl。結(jié)果 五味子醇甲的進樣量在0.02084～0.41680 mg/ml范圍內(nèi)，與其峰面積呈良好的線性關(guān)系，回歸方程Y=2×107X（r=1，n=5）；精密度良好（RSD=0.23%）、穩(wěn)定性良好（RSD=0.4%）、重復(fù)性試驗的RSD為0.87%。平均加樣回收率為102.9%，RSD為0.7%（n=6）。頸復(fù)康藥業(yè)集團有限公司生產(chǎn)的3批生脈飲（黨參方）中五味子醇甲的平均含量分別為1.827、1.736和1.703 mg/支，平均RSD為0.1%。結(jié)論 所建立的方法準確、靈敏、簡便，可用于生脈飲（黨參方）中五味子醇甲的含量測定。

[關(guān)鍵詞] 高效液相色譜法；生脈飲（黨參方）；五味子醇甲；含量

[中圖分類號] R284.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2019）4（c）-0052-03

Determination method of Schisandrin content in Shengmaiyin （Dangshen Famula）

ZHANG Ning GUO Yang LIU Wei DUAN Shu-qing▲

Jingfukang Pharmaceutical Group Co.， Ltd.， Hebei Province， Chengde 067000， China

[Abstract] Objective To establelish a determination method of Schisandrin content in Shengmaiyin （Dangshen Famula）. Methods High performance liquid chromatography （HPLC） was used to deternmine Schisandrin content in Shengmaiyin （Dangshen Famula）. The chromatographic condition： Agilent column （4.6 mm×250 mm， 5 μm） was used， the mobilephase consisted of methyl alcohol-water， the detection wavelength was at 250 nm， the flow ratew was 1.0 ml/min， the volume was 10 μl. Results The linear range of Schisandrin was 0.02084～0.41680 mg/ml， it had a good linear relationship with its peak area， the regression equation was Y=2×107X （r=1， n=5）. The accuracy was good （RSD=0.23%）， the stability was good （RSD=0.4%）， and the RSD of the repeated test was 0.87%. The average recovery was 102.9% and the RSD was 0.7% （n=6）. The average contents of three batches of Schisandrin in Shengmaiyin （Dangshen Famula） produced by Jingfukang Pharmaceutical Group Co.， Ltd. were 0.182 mg， 0.173 mg and 0.165 mg in each Shengmaiyin （Dangshen Famula）. The average RSD was 0.1%. Conclusion This method is accurate， sensive， simple and stability， and has good reproducibility. It is suitable for the determination of Schisandrin in Shengmaiyin （Dangshen Famula）.

[Key words] High performance liquid chromatography； Shengmaiyin （Dangshen Famula）； Schisandrin； Content

生脈飲（黨參方）由黨參、麥冬、五味子等3味藥材組成，具有益氣復(fù)脈、養(yǎng)陰生津的功效。用于氣陰兩虧、心悸氣短、脈微自汗[1]。

生脈飲（黨參方）[1]現(xiàn)收載于部頒標準第10冊，除合劑的常規(guī)檢驗外，只有一項相對密度檢驗項。生脈飲中五味子具有收斂固澀、益氣生津、補腎寧心等的作用，在方中發(fā)揮重要作用[2-3]。因此，參考相關(guān)文獻[4-17]，本實驗采用高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）測定生脈飲中五味子醇甲的含量，為生脈飲（黨參方）的質(zhì)量控制方法提供理論依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1儀器與材料

安捷倫1100高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；五味子醇甲對照品（批號110857-201714，購于中國食品藥品檢定研究院）；甲醇（美國Fisher）為色譜純；純化水（Millipore；Milli-Q Direct 8）；0.45 μm微孔濾膜（上海市新亞凈化器件廠）。生脈飲（黨參方）（840001批、840002批、840003批）、陰性樣品制備所用的原料均由頸復(fù)康藥業(yè)集團有限公司提供。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

采用安捷倫C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為甲醇-水（62∶38），檢測波長為250 nm；流速：1.0 ml/min，柱溫：常溫。分離度應(yīng)>1.5。理論板數(shù)按五味子醇甲計算應(yīng)≥2000。

2.2對照品溶液的制備

精密稱定五味子醇甲對照品，加甲醇制成濃度為0.08336 mg/ml五味子醇甲的對照品溶液。

2.3供試品溶液的制備

精密量取生脈飲（黨參方）5 ml，置于10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

2.4陰性樣品的制備

按生脈飲（黨參方）處方配制不含五味子的陰性樣品，依“2.3”項下方法制備即得。

2.5專屬性試驗

按“2.1”項下的色譜條件，將“2.2”項下的對照品溶液、“2.3”項下的供試品溶液及“2.4”項下的陰性樣品溶液，分別注入高效液相色譜儀，進行測定。結(jié)果顯示，陰性無干擾（圖1）。

2.6線性關(guān)系實驗

精密稱取五味子醇甲對照品，加甲醇制成含五味子醇甲0.4168、0.2084、0.08336、0.04168、0.02084 mg/ml的對照品溶液，按照“2.1”項下色譜條件注入高效液相色譜儀。以對照品峰面積為縱坐標（Y），濃度為橫坐標（X），繪制標準曲線，見圖2。得回歸方程Y=2×107X（r=1，n=5），結(jié)果表明，五味子醇甲在0.02084～0.41680 mg/ml范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.7精密度實驗

取“2.2”項下的對照品溶液，按照“2.1”項下的色譜條件，各重復(fù)進樣6次，記錄每次的色譜峰面積，計算RSD值，結(jié)果顯示五味子醇甲RSD為0.23%，表明儀器精密度良好。

2.8重復(fù)性實驗

取同一批已知濃度生脈飲（黨參方），精密量取6份，按“2.3”項下的制備方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進行測定。結(jié)果顯示，五味子醇甲的平均含量為168.7 μg/ml，RSD為0.87%（n=6）。表明重現(xiàn)性良好。

2.9穩(wěn)定性實驗

按照“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別在0，1， 2，3，......，22，23，24 h進樣10 μl，記錄色譜峰面積，結(jié)果顯示，峰面積RSD值為0.4%。表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10加樣回收實驗

精密量取已測定五味子醇甲含量的生脈飲（含量為0.1687 mg/ml）6份，精密吸取25 ml至50 ml容量瓶中，加水至刻度，搖勻；再精密吸取5 ml，分別加入“2.2”項下的五味子醇甲對照品溶液5 ml，混勻，即可。按“2.1”項下色譜條件進行測定，結(jié)果顯示，五味子醇甲平均回收率為102.9%，RSD值為0.7%（表1）。

2.11定量限

取標準曲線中最低濃度的對照品，按“2.1”項下的色譜條件進行檢測，然后按倍數(shù)稀釋對照品溶液。結(jié)果五味子醇甲濃度為0.2084 μg/ml時信噪比為10∶1，定量限為2.084 ng。

2.12檢測限

取標準曲線中最低濃度的對照品，按“2.1”項下的色譜條件進行檢測，然后按倍數(shù)稀釋對照品溶液。結(jié)果五味子醇甲濃度為0.08336 μg/ml時信噪比為3∶1，檢測限為0.8336 ng。

3樣品含量測定

按上述所建方法，測定頸復(fù)康藥業(yè)集團有限公司生產(chǎn)的生脈飲（黨參方）中五味子醇甲的含量，每批樣品做平行樣，結(jié)果取平均值（表2）。結(jié)果表明，3批五味子醇甲含量分別為：840001批1.827 mg/支，840002批1.736 mg/支，840001批1.703 mg/支，3批生脈飲（黨參方）中五味子醇甲整體平均含量為1.755 mg/支，平均RSD值為0.1%。

3討論

生脈飲（黨參方）療效較好，受廣大患者的好評。但現(xiàn)行標準中除合劑的常規(guī)檢驗外，只有一項相對密度檢驗項，并沒有含量測定項，為確保生脈飲藥品質(zhì)量，本實驗對生脈飲（黨參方）的質(zhì)量控制進行了研究。五味子為處方中一味重要中藥材，其中含木脂素類成分，以五味子醇甲為代表，本實驗采取高效液相色譜法對生脈飲（黨參方）中五味子醇甲的含量進行研究。

本實驗建立了生脈飲（黨參方）中五味子醇甲的含量的測定方法，具有準確、靈敏度高、操作簡單、分離效果好、陰性無干擾等優(yōu)點。實驗結(jié)果提示，3批生脈飲（黨參方）中五味子醇甲的平均含量分別為1.827、1.736和1.703 mg/支，整體平均含量為1.755 mg/支，平均RSD值為0.1%。本實驗可為生脈飲（黨參方）中質(zhì)量控制研究提供理論依據(jù)，可更為全面的反映藥品質(zhì)量，亦對其他制劑研究提供借鑒。

實驗過程中也對色譜條件進行了考察：采用Agilent色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；YMC-pack色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）兩個色譜柱進行樣品分離，結(jié)果提示，Agilent色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）的分離效果更好。流動相選取甲醇-水（62：38）和甲醇-水（56：44）兩個流動相進行樣品分離，結(jié)果提示，甲醇-水（62：38）分離效果更好。對前處理方法做了考察，最終確定為直接稀釋取續(xù)濾液即得，操作步驟簡單，省時省力。

本研究結(jié)果提示，五味子醇甲的進樣量在0.02084～0.41680 mg/ml范圍內(nèi)，與其峰面積呈良好的線性關(guān)系，回歸方程Y=2×107X（r=1，n=5）；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性良好。平均加樣回收率為102.9%（RSD=0.7%）。

從目前研究數(shù)據(jù)來看，頸復(fù)康藥業(yè)集團有限公司生產(chǎn)的3批生脈飲（黨參方）質(zhì)量控制較為穩(wěn)定。還有待搜集更多批次生脈飲（黨參方）進行研究分析。

綜上所述，本研究所建立的方法，準確、靈敏、簡便，可用于生脈飲（黨參方）中五味子醇甲的含量測定

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（收稿日期：2018-07-09 本文編輯：孟慶卿）