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        外源激素處理對(duì)櫸樹(shù)葉片愈傷組織誘導(dǎo)技術(shù)研究

        2019-05-28 09:24:08王曉立王婷許佳明
        農(nóng)業(yè)與技術(shù) 2019年10期

        王曉立 王婷 許佳明

        摘 要:櫸樹(shù)在秋季色彩艷麗、是觀賞價(jià)值高的園林樹(shù)種。為了建立櫸樹(shù)無(wú)性繁殖體系,探討櫸樹(shù)葉片愈傷組織的誘導(dǎo),以櫸樹(shù)葉片作為外植體,采用75%乙醇(30s)、2%次氯酸鈉溶液(25min)消毒,接種于含不同激素種類(lèi)及濃度的MS培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織,觀察統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)結(jié)果。結(jié)果表明:櫸樹(shù)葉片作為外植體可以啟動(dòng)愈傷組織的形成。在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,BA濃度為0.5mg/L,2,4-D濃度0.2mg/L的條件下,愈傷組織的誘導(dǎo)率最高。為櫸樹(shù)無(wú)性繁殖體系建立奠定基礎(chǔ)。

        關(guān)鍵詞:櫸樹(shù);外源激素;愈傷組織;誘導(dǎo)

        中圖分類(lèi)號(hào):S-3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

        DOI:10.19754/j.nyyjs.20190530069

        基金項(xiàng)目:宿遷市重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃(項(xiàng)目編號(hào):L201702);宿遷市科技計(jì)劃項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào):Z2018219);江蘇省宿遷學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào):2018XSJ052)

        *為本文通訊作者 櫸樹(shù)(Zelkova schneideriana)名稱(chēng)眾多,又被稱(chēng)為毛脈櫸、紅櫸、大葉櫸、黃櫸等。櫸樹(shù)分類(lèi)上為榆科(Ulmaceae)櫸樹(shù)屬(Zelkova),是我國(guó)重點(diǎn)保護(hù)植物[1]。櫸樹(shù)是亞熱帶常綠闊葉樹(shù)種,在環(huán)境保護(hù)中具有重要作用[2]。櫸樹(shù)因其株形高大、枝干優(yōu)美,在秋季色彩艷麗,是觀賞價(jià)值高的園林樹(shù)種[3]。櫸樹(shù)也是良好用材樹(shù)種[4]。近年來(lái),櫸樹(shù)野生資源稀缺,對(duì)于櫸樹(shù)的保護(hù)與開(kāi)發(fā)利用尤為重要[5]。本文試驗(yàn)通過(guò)對(duì)櫸樹(shù)葉片在不同外源激素種類(lèi)以及濃度配比的培養(yǎng)基上培養(yǎng),從而篩選出櫸樹(shù)葉片愈傷組織誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基,為進(jìn)一步研究櫸樹(shù)無(wú)性繁殖提供試驗(yàn)依據(jù)。

        1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

        1.1 實(shí)驗(yàn)材料

        取自校內(nèi)栽培櫸樹(shù)。以葉片作為組織培養(yǎng)外植體。

        1.2 培養(yǎng)基配方

        本試驗(yàn)采用L9(34)正交設(shè)計(jì),BA,2,4-D,NAA 3因素3水平試驗(yàn)(表1)。每種培養(yǎng)基的配方如(表2)。

        1.3 試驗(yàn)方法

        接種前,將櫸樹(shù)葉片外植體沖洗干凈,吸水紙吸干水分后在超凈臺(tái)上用濃度為75%的酒精浸泡30s,再用濃度為2%的Naclo浸泡25min消毒。然后無(wú)菌水洗3次,每次1min。將嫩葉分割成5mm×5mm的小塊,置于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,每瓶5片,每種培養(yǎng)基接種6瓶。培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)溫度(25±1)℃[6]。光照培養(yǎng)16h,黑暗培養(yǎng)8h。

        1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析

        采SPSS、Microsoft Excel軟件進(jìn)行分析和作圖。

        2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

        2.1 正交試驗(yàn)結(jié)果

        結(jié)果如表3所示。3個(gè)因素對(duì)櫸樹(shù)愈傷組織誘導(dǎo)影響的主次關(guān)系依次是B>A>C,即2,4-D>BA>NAA。根據(jù)k值各因素對(duì)櫸樹(shù)愈傷組織誘導(dǎo)的影響:BA表現(xiàn)為 0.5mg/L>4mg/L>2mg/L;2,4-D表現(xiàn)為0.2mg/L>0.5mg/L>1 mg/L;NAA表現(xiàn)為 0mg/L> 0.1mg/L> 0.5mg/L。由此可得最優(yōu)水平組合為:A1B1C1,即0.5mg/LBA+ 0.2mg/L2,4-D。

        2.2 不同濃度的BA對(duì)櫸樹(shù)愈傷組織誘導(dǎo)的影響

        BA濃度在0.5mg/L時(shí)出愈率高,有光澤,生長(zhǎng)性良好。當(dāng)BA濃度在2mg/L時(shí),出愈率低,顏色較暗,生長(zhǎng)差(圖1)。當(dāng)BA濃度在4mg/L時(shí)出愈率次于0.5mg/L時(shí)(圖1)。

        2.3 不同濃度2,4-D對(duì)櫸樹(shù)愈傷組織誘導(dǎo)的影響

        從圖2可得:在2,4-D濃度為0.2mg/L 時(shí)比其它2種誘導(dǎo)培養(yǎng)基出愈情況好,愈傷組織呈翠綠色,在2,4-D濃度為0.5mg/L 時(shí)次之,2,4-D濃度為1mg/L 時(shí)出愈最差。

        2.4 不同濃度NAA對(duì)櫸樹(shù)愈傷組織的誘導(dǎo)的影響

        NAA對(duì)櫸樹(shù)愈傷組織的誘導(dǎo)由下圖NAA的效應(yīng)曲線圖(圖3)可知,無(wú)NAA時(shí),誘導(dǎo)率最高,愈傷組織生長(zhǎng)好,具有光澤,隨著NAA濃度的升高愈傷組織長(zhǎng)勢(shì)逐漸降低,顏色變得暗淡,無(wú)光澤。

        3 討論與結(jié)論

        櫸樹(shù)無(wú)性繁殖技術(shù)已有很多人在研究。鐘飛霞利用櫸樹(shù)小苗的嫩莖、葉片作為外植體,成功誘導(dǎo)出愈傷組織[7]。金曉玲以嫩枝作為外植體,在MS基本培養(yǎng)基上,篩選出了誘導(dǎo)櫸樹(shù)芽萌發(fā)最佳培養(yǎng)基[8]。劉雪梅等發(fā)現(xiàn)適合櫸樹(shù)不定芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基[9];劉海龍發(fā)現(xiàn)幼嫩葉片誘導(dǎo)愈傷組織最佳配方[10]等。櫸樹(shù)葉片愈傷組織最佳培養(yǎng)基為MS+0.5mg/LBA+0.2mg/L2,4-D,出愈率為96.7%。

        參考文獻(xiàn)

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        [2] 中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志(第二十二卷)[M].北京:科學(xué)出版社,1999:382-386.

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        [4] 江蘇省植物研究所.江蘇植物志:下冊(cè)[M].南京:江蘇科學(xué)技術(shù)出版社,1982:63-64.

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        [7] 鐘飛霞.櫸樹(shù)無(wú)性繁殖技術(shù)研究[D].長(zhǎng)沙:中南林業(yè)科技大學(xué),2010:33-35.

        [8] 金曉玲,何平,張日清.櫸樹(shù)莖尖的培養(yǎng)[J].中南林學(xué)院學(xué)報(bào),2005,25(1):38-41.

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