劉義文 廖春嬌 樊利芳

[摘要]目的 檢測PPARγ與PGC-1在胃腺癌演變各階段過程中的表達，探討PPARγ和PGC-1在胃癌發(fā)生中的作用及其臨床病理意義。方法 選擇2011年1月～2016年9月荊州市第二人民醫(yī)院收集的135例胃腺癌組織標本、52例正常胃黏膜組織標本以及19例慢性萎縮性胃炎、31例腸上皮化生、16例不典型增生等不同程度癌前病變組織標本。采用免疫組化方法，檢測PPARγ、PGC-1在各組標本中的表達情況，分析正常胃黏膜、癌前病變、胃腺癌組織中PPARγ、PGC-1的陽性表達差異以及PPARγ、PGC-1表達之間的相關性，并分析其表達與胃癌病理特征的關系。結果 PPARγ及PGC-1在胃癌組織中的陽性表達率較癌前病變組織及正常胃黏膜組織中的表達降低，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。135例胃癌中，PPARγ與PGC-1的表達成顯著正相關（r=0.956，P<0.05）；PPARγ、PGC-1陽性表達隨著胃癌組織分化程度的降低而降低（P<0.05），PPARγ、PGC-1陽性表達與患者的Borrmann分型、Lauren分型、組織分化程度及TNM分期有關（P<0.05）。PPARγ、PGC-1陽性表達與患者的性別、年齡、淋巴結轉移與否無相關性（P>0.05）。結論 PPARγ、PGC-1表達與胃癌發(fā)生、發(fā)展關系密切，檢測PPARγ、PGC-1表達水平有助于預測胃癌的進展。

[關鍵詞]胃腺癌；癌前病變；氧化物酶體增殖物激活受體γ；輔助活化因子1

[中圖分類號] R735.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2019）4（b）-0016-05

[Abstract] Objective To detect the expression of PPARγ and PGC-1 of the evolution of gastric adenocarcinoma in different stages， and to explore the role of PPARγ and PGC-1 in the development of gastric cancer and its clinicopathological significance. Methods From January 2011 to September 2016， 135 gastric adenocarcinoma tissue specimens， 52 normal gastric mucosa tissue specimens， 19 cases of chronic atrophic gastritis， 31 cases of intestinal metaplasia and 16 cases of atypical hyperplasia were collected from the Second People′s Hospital of Jingzhou City. The expression of PPARγ and PGC-1 was examined by immunohistochemical method. The difference of positive expression of PPARγ and PGC-1 in normal gastric mucosa， precancerous lesions and gastric adenocarcinoma were analyzed， and the correlation between the expression of PPARγ and PGC-1 and the pathological characteristics of gastric cancer were analyzed. Results The positive expression rates of PPARγ and PGC-1 in the gastric cancer tissues were lower than those in the precancerous lesion tissues and the normal gastric mucosa tissues， and the difference was statistically significant （P<0.05）. In 135 cases of gastric adenocarcinoma， the expression of PPARγ was positively correlated with PGC-1 expression （r=0.956， P<0.05）. The expression levels of PPARγ and PGC-1 were decreased with the lower ranked differentiation of gastric cancer （P<0.05）. The expression levels of PPARγ and PGC-1 were closely associated with the Borrmann type， Lauren classification， the histological differentiation and TNM tumor stage （P<0.05）. However， there was no significant association between the expression of PPARγ and PGC-1 and the gender， age and lymph node metastasis （P>0.05）. Conclusion The expression levels of PPAR and PGC-1 are closely related to the occurrence and development of gastric cancer. Monitoring the expression levels of PPARγ and PGC-1 may be helpful to predict the development and progression of gastric cancer.

[Key words] Gastric adenocarcinoma； Precancerous lesions； PPARγ； PGC-1

過氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferators-activated receptor gamma，PPARγ）是一類核轉錄因子[1]，有調節(jié)基因表達的作用，通過增加細胞凋亡從而實現(xiàn)對細胞增殖的抑制[2]。PPARγ輔助活化因子1（PGC-1）屬于PPARγ的輔助活化因子家族，PGC-1通過與特異轉錄因子結合，對基因轉錄產(chǎn)生巨大效應。PGC-1對于線粒體功能、細胞能量代謝均有良好的調節(jié)作用，并通過這些作用的發(fā)揮參與到各種疾病的發(fā)生及發(fā)展當中[3-5]。近年來的研究指出，PPAR-γ及PGC-1分別在多種腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用，但具體的作用機制以及在臨床診斷及治療中的意義仍然不明了。以往研究顯示PPARγ在食管癌、濾泡甲狀腺癌、宮頸癌中表達下調[6-9]，在胰腺癌、卵巢癌中的表達明顯上調[10-11]，而關于PPARγ及PGC-1在胃癌及癌前病變中表達情況的研究相對較少，進一步研究兩者在胃癌前病變及胃癌組織中的表達，可明確PPARγ和PGC-1在胃癌演變各階段過程中的表達水平，為胃癌早期診斷及進展提供依據(jù)。本研究對PPAR-γ、PGC-1在胃腺癌及癌前病變中的表達情況展開研究。

1資料與方法

1.1一般資料

本研究的組織標本為荊州市第二人民醫(yī)院2011年1月～2016年9月收集的135例胃腺癌組織標本、52例正常胃黏膜組織標本以及19例慢性萎縮性胃炎、31例腸上皮化生、16例不典型增生等不同程度癌前病變組織標本。135例胃癌標本中，男87例，女48例；患者的年齡為35～84歲，平均（67.33±4.27）歲；Borrmann分型：Ⅰ型2例，Ⅱ型19例，Ⅲ型103例，Ⅳ型11例；Lauren分型：腸型胃癌63例，彌漫型胃癌60例，混合型胃癌12例；WHO組織學分型：乳頭狀腺癌1例，高分化管狀腺癌1例，中分化管狀腺癌53例，低分化腺癌62例，未分化腺癌3例，黏液腺癌13例，印戒細胞癌2例；淋巴結轉移情況：41例未發(fā)生轉移，94例發(fā)生轉移。本研究通過了本院醫(yī)學倫理委員會審核并遵循臨床相關倫理研究規(guī)定，所有患者均知情并簽署知情同意書。

1.2試劑

鼠抗人PPARγ單克隆抗體（批號：F16090-62，克隆號：3P25，上海撫生實業(yè)有限公司）、兔抗人PGC-1多克隆抗體（批號：100906B070，克隆號：G168-726，中杉金橋生物技術有限公司）、免疫組化試劑盒及DAB辣根過氧化物酶顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術公司（工作濃度為1∶100）。

1.3方法

1.3.1免疫組織化學法檢測組織中PPARγ、PGC-1表達 組織標本經(jīng)10%甲醛固定后常規(guī)石蠟包埋，根據(jù)HE染色切片進行挑選蠟塊，5 μm厚連續(xù)切片，免疫組化染色采用SP法，按試劑盒說明書進行操作。

1.3.2免疫組化結果判定 我院病理科主任使用奧林巴斯光學顯微鏡BX43觀察病理標本（放大倍數(shù)為200倍）。PPARγ、PGC-1陽性表達為黃色顆粒，染色部位主要集中于細胞核和（或）細胞漿，以染色程度評分、陽性表達細胞百分比評分對PPARγ、PGC-1表達情況進行評估。染色程度評分：無著色為0分；有輕度著色，呈現(xiàn)淺黃色為1分；有中度著色，呈現(xiàn)棕黃色為2分；有重度著色，呈現(xiàn)棕褐色為3分。陽性細胞染色百分比評分：陽性細胞<5%為0分；陽性細胞在5%～25%之間為1分；陽性細胞>25%～50%為2分；陽性細胞>50%～70%為3分；陽性細胞>70%為4分。染色結果=染色程度評分×陽性表達細胞百分比評分，染色結果為0分，則為陰性（-），染色結果為1～4分為弱陽性（+），染色結果為5～8分為中度陽性（++），染色結果為9～12分為強陽性（+++）。

1.4統(tǒng)計學方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計學軟件對相關數(shù)據(jù)資料進行處理分析，計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗，采用Spearman相關分析對胃癌中PPARγ、PGC-1表達相關性進行分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1正常胃黏膜、癌前病變、胃腺癌組織中PPARγ的表達情況分析

PPARγ在胃腺癌組織、不典型增生組織、腸上皮化生組織、慢性萎縮性胃炎組織及正常胃黏膜組織中的表達總陽性率分別為54.07%（73/135）、87.50%（14/16）、83.87%（26/31）、89.47%（17/19）、71.15%（37/52）。各組織的PPARγ陽性表達情況為癌前病變>正常胃黏膜>胃腺癌，各組織間比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（表1），具體表達情況見圖1（封四）。

2.2正常胃黏膜、癌前病變、胃腺癌組織中PGC-1的表達情況分析

PGC-1在胃腺癌組織、不典型增生組織、腸上皮化生組織、慢性萎縮性胃炎組織及正常胃黏膜組織中表達總陽性率分別為48.15%（65/135）、62.50%（10/16）、87.10%（27/31）、89.47%（17/19）、69.23%（36/52）。各組織中的PGC-1陽性表達情況為癌前病變>正常胃黏膜>胃腺癌，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（表2），具體表達情況見圖2（封四）。

2.3 PPARγ、PGC-1陽性表達與胃腺癌臨床病理特征的關系

對135例胃癌患者的PPARγ、PGC-1陽性表達與病理關系進行分析，結果顯示PPARγ、PGC-1陽性表達與患者的Borrmann分型、Lauren分型、組織分化程度及TNM分期有關（P<0.05）。PPARγ、PGC-1陽性表達與患者的性別、年齡、淋巴結轉移無關（P>0.05）（表3）。

2.4胃腺癌中PPARγ、PGC-1表達相關性分析

本研究135例胃腺癌患者中，PPARγ、PGC-1均為陽性者62例，均為陰性者59例，PPARγ陰性、PGC-1陽性者3例，PPARγ陽性、PGC-1陰性者11例，兩者之間的表達情況成正相關關系，r值絕對值為0.956，在0.8～1之間，接近于1（P<0.05），相關性強，具體見表4。

3討論

胃癌為臨床常見惡性腫瘤，發(fā)病率在我國各種腫瘤排名中居于第二位[12]。普遍觀點認為胃癌是一個循序漸進的發(fā)展過程，即由正常→癌前病變→癌變的演變過程。PPAR-γ屬于配體依賴核轉錄因子，有脂肪組織特異性，在各種代謝、腫瘤細胞的增殖分化及凋亡中都發(fā)揮重要作用[1-2]。PGC-1是PPAR-γ的主要轉錄刺激因子，直接影響其作用的發(fā)揮。在人食管癌中發(fā)現(xiàn)PPARγ表達下調[6]，然而在肺癌、結腸癌、乳腺癌中表達上調[13-15]。本研究結果顯示，PPARγ、PGC-1在癌前病變組織中的表達水平明顯高于正常胃黏膜組織（P<0.05），而在胃腺癌組織中的表達水平顯著低于癌前病變組織、正常胃黏膜組織（P<0.05），提示PPARγ、PGC-1水平降低在胃黏膜細胞惡變的過程中可能是一個重要因素，在胃癌發(fā)生過程中可能發(fā)揮抑制作用。PGC-1在胃癌發(fā)展、形成階段對于癌細胞的增殖、分化具有抑制作用，能夠保護機體防止癌細胞侵害，分泌水平迅速提升以適應抑制癌細胞的需要，因此會出現(xiàn)癌前病變階段PPARγ、PGC-1表達水平上調現(xiàn)象，而隨著癌癥的形成、惡化，癌細胞大量增殖、分化，PGC-1對癌細胞的抑制作用受限，無法正常發(fā)揮，進而出現(xiàn)表達下調現(xiàn)象。本研究結果提示PPARγ、PGC-1在癌前病變、癌癥發(fā)展惡化中表達水平呈現(xiàn)“上升→下降”變化趨勢，可能與其機體保護、癌抑制作用有關，但具體機制仍需要進一步研究證實。

本研究發(fā)現(xiàn)PPARγ、PGC-1陽性表達與患者的Borrmann分型、Lauren分型、WHO分型中管狀腺癌的組織分化程度及TNM分期有關（P<0.05），但未發(fā)現(xiàn)與淋巴結轉移有明顯相關性。廖山嬰等[16]的研究顯示，PPARγ在胃癌低分化、淋巴結轉移患者中的表達水平有明顯提升，這與本研究有些許出入，可能與本研究選擇的病例數(shù)相對較少有關，對于這一問題需進一步深入研究分析。本研究結果顯示，PPARγ、PGC-1陽性表達率隨著組織分化水平的降低而降低，提示Borrmann分型越高、Lauren分型越重、WHO分型中管狀腺癌的分化度越低，患者的PPARγ、PGC-1表達度越低，PPARγ、PGC-1活性的逐步降低可能參與胃癌及進展，隨著腫瘤惡化程度的加重，患者的PPARγ、PGC-1表達出現(xiàn)明顯下調。但是PPARγ、PGC-1陽性表達與患者的性別、年齡、淋巴結轉移與否無明顯相關性（P>0.05），提示胃腺癌的PPARγ、PGC-1陽性表達狀況與其病理分型密切相關。

PPARγ為潛在的腫瘤抑制因子，PGC-1為PPARγ的輔助活化因子，PGC-1改變能夠影響PPARγ活動，進而在腫瘤疾病發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮作用[17-18]。本研究結果顯示，PGC-1、PPARγ表達具有正相關關系，兩者的相關性也支持兩者在胃癌發(fā)生、發(fā)展中相互影響，共同發(fā)生作用。由于多重因素的影響和限制，本研究未能獲得胃癌患者較準確的隨訪數(shù)據(jù)，以至于對胃癌的預后評估未能完成，從而未能得出PGC-1、PPARγ的表達與胃癌預后的相關性。

綜上所述，本組研究證實胃癌癌前病變組織中PPARγ、PGC-1陽性表達上調，而胃癌組織中PPARγ、PGC-1陽性表達下調，且兩者之間的變化具有同步性，提示PPARγ、PGC-1表達與胃癌發(fā)生、發(fā)展關系密切。PPARγ、PGC-1陽性表達與胃癌的Borrmann分型、Lauren分型、WHO分型中管狀腺癌的組織分化程度有關，其表達水平會隨著患者病情的惡化而降低，檢測PPARγ、PGC-1表達水平，有助于預測胃癌的進展情況。

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（收稿日期：2018-09-19 本文編輯：祁海文）