董晨虹，李欽青，柴金苗，曹曉龍，段秀俊

（山西中醫(yī)藥大學(xué)，山西晉中030619）

助陽開郁顆粒由黑順片、炙甘草、炒黃柏、桂枝、砂仁、牡蠣、蛤粉、茯苓八味藥組成，是山西省名中醫(yī)趙杰醫(yī)生多年來的臨床驗方，具有助陽開郁、疏肝健脾等功效，主要用于治療抑郁癥，臨床療效甚佳。為更好地服務(wù)患者，欲將其開發(fā)為顆粒劑。因處方中含有黑順片，項目組對助陽開郁顆粒的急性毒性進(jìn)行了研究，為其臨床應(yīng)用提供一定的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 藥物與動物 助陽開郁顆粒（批號20180721，實驗室自制），娃哈哈純凈水。SPF級昆明種小鼠，1~8 w 齡，雌雄各半，體質(zhì)量為（18～22）g，購自中國食品藥品檢定研究院，實驗動物生產(chǎn)許可證編號：SCXK（京）2014-0013。

1.1.2 儀器與設(shè)備 LT10028B電子天平（常熟市天量儀器有限責(zé)任公司）、ZNHW型電熱套（上海越眾儀器設(shè)備有限公司）、Model型真空干燥箱（上海貴測實驗設(shè)備有限公司）、TD5A-WS湘立離心機(jī)（湖南湘立儀器有限公司）、DHG9053型烘箱（上海承標(biāo)實驗儀器有限公司）、一次性使用無菌注射器（圣貝諾上海醫(yī)療用品有限公司）、灌胃針（創(chuàng)博環(huán)球北京生物科技有限公司）。

1.2 方 法

1.2.1 助陽開郁顆粒混懸液的制備 取助陽開郁顆粒，研磨成細(xì)粉，加蒸餾水配制成最大藥物濃度1.5 g/mL的混懸液（相當(dāng)于生藥含量7.11 g/mL）。

1.2.2 半數(shù)致死量（LD50）的測定［1］取SPF級小鼠40只，雌雄各半，適應(yīng)性分開飼養(yǎng)7 d后，禁食不禁水12 h。實驗前稱重，標(biāo)記，按體質(zhì)量隨機(jī)分為對照組和4個給藥組，每組8只。對照組以40 mL/kg生理鹽水灌胃，給藥組分別以10 mL/kg、20 mL/kg、30 mL/kg、40 mL/kg的助陽開郁顆?；鞈乙哼M(jìn)行灌胃，給藥5 h后自由進(jìn)食進(jìn)水，連續(xù)觀察1 w。1 w之內(nèi)，小鼠全部存活，解剖之后未見各個臟器有明顯病變。受給藥體積和藥液濃度的限制，未能測出本品的半數(shù)致死量。故目前認(rèn)為40 mL/kg的給藥劑量即為該制劑的最大耐受量。為了進(jìn)一步評價制劑安全性，進(jìn)行了最大耐受量實驗的驗證實驗。

1.2.3 最大耐受量驗證實驗［2-3］取SPF級昆明小鼠40只，雌雄各半，適應(yīng)性分開飼養(yǎng)7 d后，按體質(zhì)量隨機(jī)分為對照組和給藥組，每組20只，禁食不禁水12 h。對照組以40 mL/kg生理鹽水灌胃，給藥組以40 mL/kg助陽開郁顆?；鞈乙汗辔福ㄏ喈?dāng)于臨床成人用量的153.15倍），給藥5 h后自由進(jìn)食進(jìn)水，連續(xù)觀察14 d，記錄小鼠有無死亡情況，外觀、排泄等有無異常［4］，并定期記錄體質(zhì)量，結(jié)果見表1。14 d后進(jìn)行解剖，觀察各組臟器有無病變，取心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟進(jìn)行稱重，計算臟器指數(shù)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，各組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 對小鼠一般狀況的影響

小鼠灌胃助陽開郁顆粒后觀察，給藥后動物行為、外觀等均未見異常；未觀察到動物出現(xiàn)抽搐、麻痹等肌肉活動異常，對外界反應(yīng)正常；無流涎、流淚等現(xiàn)象；糞便顏色正常，無稀便、便秘、膿血便等；膚色正常，無眼球突出、眼瞼下垂、呼吸興奮或抑制等中毒癥狀；無動物死亡情況［5-6］。

2.2 小鼠體質(zhì)量的變化

分別于給藥后第1、7、14天測動物體質(zhì)量，發(fā)現(xiàn)給藥組小鼠體質(zhì)量與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果見表1。

表1 助陽開郁顆粒急性毒性實驗對小鼠體質(zhì)量的影響 （g，x±s）

2.3 對小鼠臟器的影響

對小鼠的心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟進(jìn)行稱重，計算臟器指數(shù)［7］，給藥組小鼠與對照組比較，臟器指數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果見表2。

表2 助陽開郁顆粒急性毒性實驗對小鼠臟器指數(shù)的影響 （mg/g，x±s）

3 討 論

半數(shù)致死量是藥物急性毒性實驗評價的一個重要指標(biāo)［8］，LD50越大，藥物的毒性越低。實驗按照最大灌胃體積40 mL/kg給予助陽開郁顆粒最稠混懸液，相當(dāng)給予生藥量為284.4 g/kg，黑順片為22 g/kg，該生藥劑量為臨床成人用量的153.15倍，小鼠全部存活，且未見明顯毒性反應(yīng)。實驗結(jié)果說明該制劑臨床用藥是安全的，為其進(jìn)一步開發(fā)和推廣應(yīng)用提供了實驗依據(jù)。

未經(jīng)炮制的藥材附子中雙酯型生物堿含量普遍很高，單酯型及非酯型生物堿含量低，而炮制品則反之。在炮制過程中劇毒性的雙酯型生物堿會變成單酯型及非酯型生物堿，從而降低了附子的毒性。助陽開郁顆粒中用到附子的炮制品黑順片，為有毒中藥，周子渝等［9］報道黑順片的LD50為44.8 g/kg，在進(jìn)行該制劑的急性毒性實驗時，用到最大給藥劑量，相當(dāng)于黑順片為22 g/kg，遠(yuǎn)遠(yuǎn)未達(dá)到文獻(xiàn)報道的半數(shù)致死劑量。再加上中藥復(fù)方配伍的增效減毒作用，使該制劑的用藥安全系數(shù)更大。李冰潔等［10］報道附子與甘草配伍具有一定的減毒作用，助陽開郁顆粒處方中同時含有附子與甘草，這也可能是制劑不呈現(xiàn)毒性的原因之一。