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        抗核抗體、抗核抗體譜及其聯(lián)合檢測(cè)診斷自身免疫性疾病的價(jià)值比較

        2019-05-21 02:57:54郭佳佳蔣曉欽慕珂珂董炎紅
        實(shí)用醫(yī)藥雜志 2019年5期
        關(guān)鍵詞:核型滴度特異性

        郭佳佳,蔣曉欽,李 琰,慕珂珂,董炎紅

        自身免疫性疾病(autoimmune disease,AID)是機(jī)體對(duì)自身抗原產(chǎn)生免疫反應(yīng),造成自身組織損害而引發(fā)的疾病,其病因與自身抗原改變、免疫調(diào)節(jié)異常、遺傳等相關(guān)[1,2],主要表現(xiàn)為器官特異性自身免疫疾病和系統(tǒng)性自身免疫疾病,如甲狀腺功能亢進(jìn)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等,對(duì)患者身體健康具有不同程度的影響。自身抗體是AID診斷關(guān)鍵,分子生物學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步使得AID有關(guān)抗體也不斷被發(fā)現(xiàn),AID檢出率亦明顯提高??购丝贵w(ANA)是指抗細(xì)胞核抗原成分的自身抗體,而以Hep-2細(xì)胞為基質(zhì)的間接免疫熒光法(IIF)檢測(cè)ANA是AID重要篩選實(shí)驗(yàn)[3]。此外,免疫印跡法(IBT)檢測(cè)抗核抗體譜(ANAs)亦對(duì)AID鑒別和病情評(píng)價(jià)具有重要價(jià)值[4]。為了解ANA、ANAs及其聯(lián)合檢測(cè)對(duì)AID的診斷價(jià)值,筆者將所在醫(yī)院1095例疑似AID患者作為研究對(duì)象,進(jìn)行血清ANA、ANAs檢測(cè),觀察其診斷結(jié)果。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 選擇2018年1月—2018年6月筆者所在醫(yī)院1095例疑似AID患者為研究對(duì)象,其中男382例,女713例;年齡4~80歲,平均(41.76±16.92)歲。

        1.2 方 法

        1.2.1 儀器與試劑 日本奧林巴斯BX50熒光顯微鏡,德國(guó)歐蒙EURO Blot MasterII型全自動(dòng)免疫印跡儀,日本佳能公司Lide100掃描儀,歐蒙(杭州)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷有限公司提供的ANA檢測(cè)試劑盒、免疫印跡試劑盒。

        1.2.2 檢測(cè)方法 采集所有受檢者清晨空腹靜脈血5 ml,靜置30 min后以3000 r/min離心,分離血清,采用 IIF檢測(cè) ANA,ANA 滴度設(shè)定為 1:100、1:320、1:1000 和 1:3200, 在載片反應(yīng)區(qū)將稀釋的血清標(biāo)本和固定有包被基質(zhì)生物薄片的Hep-2細(xì)胞進(jìn)行反應(yīng),常溫下孵育30 min,清洗封片,操作步驟均嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,由2位有豐富經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)師在熒光顯微鏡下進(jìn)行讀片,觀察有無(wú)熒光,抗體滴度≥100為陽(yáng)性。采用IBT檢測(cè)ANAs,檢測(cè)nRNP/Sm、Sm、SS-A、Ro-52、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENP-B、PCNA、dsDNA、AMA-M2、核小體、組蛋白、核糖體P蛋白15種特異性抗體。于膜條上平行抗原,將1:101稀釋的血清標(biāo)本和膜條上靶抗原進(jìn)行反應(yīng),常溫下孵育,加入酶標(biāo)記抗IgG抗體后再次溫育,跟底物液呈顏色反應(yīng)后進(jìn)行清洗,風(fēng)干后使用掃描儀掃描,以EUROLineScan軟件評(píng)估檢測(cè)結(jié)果,特異性抗體強(qiáng)度為“+”及以上判為陽(yáng)性。

        1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,計(jì)數(shù)資料以(%)表示,比較用χ2檢驗(yàn);ANA、ANAs兩種方法檢測(cè)一致性采用Kappa檢驗(yàn)分析,κ<0.4表示檢測(cè)一致性弱,0.4<κ≤0.6表示檢測(cè)一致性中等,0.6<κ≤0.8表示檢測(cè)一致性高,κ>0.8表示檢測(cè)一致性極高;以最終確診AID為標(biāo)準(zhǔn),評(píng)估ANA、ANAs及其聯(lián)合檢測(cè)對(duì)AID的診斷效能,取P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 ANA及ANAs陽(yáng)性標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果 1095例受檢者血清標(biāo)本中,ANA檢測(cè)陽(yáng)性為511例,陽(yáng)性率為46.67%(511/1095);ANAs檢測(cè)陽(yáng)性為490例,陽(yáng)性率為44.75%(490/1095)。兩種方法檢測(cè)結(jié)果符合率為75.80%,檢測(cè)一致性κ=0.511,P<0.05。其中ANA(+)/ANAs(+)比率為 33.61%,ANA(-)/ANAs(+) 比率為11.14%,ANA (+)/ANAs (-) 比率為13.06%,ANA(-)/ANAs(-)比率為 42.19%。

        2.2 ANA陽(yáng)性標(biāo)本熒光核型及ANAs檢測(cè)結(jié)果在511份血清ANA陽(yáng)性標(biāo)本中,熒光核型以核顆粒型、核均質(zhì)型、混合型為主;ANA(+)/ANAs(+)標(biāo)本熒光核型中,著絲點(diǎn)型、核顆粒型、混合型陽(yáng)性率較高。見(jiàn)表1。

        表1 ANA陽(yáng)性標(biāo)本熒光核型及ANAs檢測(cè)結(jié)果[例(%)]

        2.3 不同熒光滴度ANA陽(yáng)性率及ANAs陽(yáng)性率不同熒光滴度ANA陽(yáng)性率、ANAs陽(yáng)性率均存在差異,隨著熒光滴度的增高,ANA陽(yáng)性降低 (χ2=186.643,P<0.05), 其中,ANAs所占比例逐漸增高(χ2=48.079,P<0.05),見(jiàn)表 2。

        2.4 ANAs陽(yáng)性標(biāo)本中不同特異性抗體類型ANA陽(yáng)性和陰性情況 490份血清ANAs陽(yáng)性標(biāo)本中,特異性抗體類型以Ro-52、SS-A和nRNP/Sm為主,ANAs(+)/ANA(+)標(biāo)本中 nRNP/Sm、SS-A 和 Ro-52陽(yáng)性比例較高,ANAs(+)/ANA(-)標(biāo)本中,Scl-70、PM-Scl、PCNA陽(yáng)性比例較高。見(jiàn)表3。

        表2 不同熒光滴度ANA陽(yáng)性率及ANAs所占比例[例(%)]

        表3 ANAs陽(yáng)性標(biāo)本中不同特異性抗體類型ANA陽(yáng)性和陰性情況[例(%)]

        2.5 ANA、ANAs及其聯(lián)合檢出率比較 最終診斷結(jié)果顯示,1095例疑似AID者中有668例為AID,ANA 檢出率為 76.50%(511/668),ANAs檢出率為73.35%(490/668),ANA+ANAs 檢 出 率 為 94.76%(633/668),ANA+ANAs 檢 出 率 顯 著 高 于 ANA、ANAs檢出率,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=58.332,χ2=78.648,P<0.05)。

        3 討論

        AID是以自身免疫耐受平衡失調(diào)引發(fā)自身免疫反應(yīng)的一類疾病,其臨床癥狀復(fù)雜多樣,診斷時(shí)容易與感染性疾病或其他系統(tǒng)疾病混淆,導(dǎo)致誤診或漏診,影響患者治療[5,6]。 及早明確診斷是 AID 患者實(shí)施有效治療的基礎(chǔ),對(duì)提高患生存質(zhì)量具有重要意義。IIF是我國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)ANA最早的方法,且得到廣泛應(yīng)用,IIF-ANA作為AID診斷的標(biāo)準(zhǔn)方法,具有敏感度和特異性高、操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。然而,IIF是以Hep-2細(xì)胞為基質(zhì),其包被抗原存在分布不均勻情況,且部分含量較低,容易發(fā)生特定抗原流失等情況,造成部分特異性抗體漏檢[7,8]。 此外,部分人群在無(wú) AID 情況下,也可檢測(cè)出低滴度 ANA,影響結(jié)果判斷[9,10]。 IBT 檢測(cè)ANAs也是臨床診斷AID較為常用方法,其操作簡(jiǎn)便,特異性高,自動(dòng)化程度高,檢測(cè)結(jié)果判讀容易,并且能夠單次檢測(cè)多種抗體,長(zhǎng)期保存膜條結(jié)果,方便查看[11,12]。

        該研究對(duì)1095例疑似AID者進(jìn)行血清IIFANA和IBT-ANAs檢測(cè),顯示ANA檢測(cè)陽(yáng)性率為46.67%,ANAs檢測(cè)陽(yáng)性率為44.75%,兩種方法檢測(cè)結(jié)果符合率為75.80%,檢測(cè)一致性κ=0.511,為中等一致,表明IIF-ANA和IBT-ANAs檢測(cè)存在吻合情況,但并非完全一致,不可互為替代。王紅娟等[13]亦對(duì)IIF-ANA和 IBT-ANAs檢測(cè)情況進(jìn)行探討,顯示兩種方法的檢測(cè)結(jié)果一致性為中度(κ=0.503),與該研究結(jié)果較為接近。此外,不同熒光滴度ANA陽(yáng)性率、ANAs陽(yáng)性率均存在差異,隨著熒光滴度的增高,ANA陽(yáng)性降低,ANAs陽(yáng)性率升高,提示ANA陽(yáng)性率與熒光滴度存在相關(guān)性,且ANA陽(yáng)性結(jié)果與ANAs陽(yáng)性結(jié)果亦有出入,也說(shuō)明了IIF-ANA和IBT-ANAs檢測(cè)不能相互替代。馬華瑜等[14]研究指出,ANA 陽(yáng)性標(biāo)本中,核顆粒型、核均質(zhì)型是其主要核型,但其未分析ANA與ANAs檢出核型的關(guān)系。該次研究檢驗(yàn)ANA陽(yáng)性標(biāo)本熒光核型,發(fā)現(xiàn)核顆粒型、核均質(zhì)型、混合型是其主要核型,與馬華瑜等[14]研究結(jié)果相符。 而 ANA(+)/ANAs(+)標(biāo)本中,顯示著絲點(diǎn)型、核顆粒型、混合型陽(yáng)性率較高,提示核顆粒型、混合型是ANA與ANAs檢出主要核型,且兩種方法對(duì)其他核型檢出情況亦存在差異。另一方面,ANAs陽(yáng)性標(biāo)本特異性抗體類型以 Ro-52、SS-A 和 nRNP/Sm 為主,ANAs (+)/ANA(+)標(biāo)本中nRNP/Sm、SS-A和Ro-52陽(yáng)性比例較高,ANAs (+)/ANA (-) 標(biāo)本中,Scl-70、PM-Scl、PCNA陽(yáng)性比例較高,說(shuō)明ANAs與ANA對(duì)特異性抗體類型檢出有差異,進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)可提高各類型特異性抗體陽(yáng)性檢出率,有利于AID分類診斷。陳向華等[15]分析ANA和ANAs檢測(cè)AID情況,表示同時(shí)進(jìn)行ANA和ANAs檢測(cè)能夠有效提高AID檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。該研究對(duì)ANA、ANAs及其聯(lián)合檢出率進(jìn)行比較,顯示ANA檢出率為76.50%,ANAs檢出率為73.35%,分析漏診原因,前者可能是IIFANA檢測(cè)中Hep-2細(xì)胞基質(zhì)的包被抗原分布不均勻或含量較低,而后者與IBT-ANAs檢測(cè)特異性抗體數(shù)量有限相關(guān)。結(jié)果中ANA+ANAs檢出率顯著高于 ANA、ANAs檢出率(P<0.05),說(shuō)明 ANA 聯(lián)合ANAs檢測(cè)可提高AID檢出率。

        綜上所述,盡管ANA、ANAs檢測(cè)均能夠檢出AID,但漏檢和假陽(yáng)性發(fā)生可能性較大,而ANA聯(lián)合ANAs檢測(cè)可減少漏檢情況發(fā)生,提高AID檢出率,為臨床診斷提供有效依據(jù)。

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