李星艷，靳錄洋，徐小芳，羅 燕，谷新利

(新疆石河子工程職業(yè)技術學院，新疆石河子832000)

淫羊藿是我國傳統(tǒng)的補益中藥，有堅精骨、益精氣、補腰膝、強心力等作用。其主要成分是黃酮類和多糖，目前對淫羊藿屬植物的研究多集中在黃酮類成分，而對淫羊藿多糖的研究相對較少[4]。本試驗從淫羊藿中提取淫羊藿多糖(EPS)，探討EPS對雛雞抗氧化作用的影響，以期為研究開發(fā)新藥提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗藥物 淫羊藿購自石河子市醫(yī)藥公司。淫羊藿多糖(EPS)由石河子大學動物科技學院中獸醫(yī)實驗室提取，多糖含量為32.30%。試驗中注射劑量均指經過換算實際進入雛雞體內純多糖的含量。多糖在注射前用蒸餾水溶解，配成溶液，115 ℃ 30 min高壓滅菌，備用。

1.2 試驗動物 1日齡健康羅曼雛雞由石河子市養(yǎng)雞場提供，臨床檢查健康。用新疆天康飼料廠生產的雛雞料進行常規(guī)飼養(yǎng)，所有雞只的飼養(yǎng)方法、飼養(yǎng)條件、環(huán)境、飼料品質及飼養(yǎng)管理均一致。

1.3 方法 80只羅曼雛雞隨機分為4組，每組20只。1日齡開始用藥，Ⅰ組：皮下注射生理鹽水0.2 mL/只，連續(xù)注射7 d。Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ組：皮下注射濃度分別為12.5 mg/mL、25 mg/mL、50 mg/mL的EPS，0.2 mL/只，連續(xù)注射7 d。每組隨機抽取10只，在試驗第7天心臟采血，第14、21、28、35、42天翅靜脈采血，所采血液用3.8%檸檬酸鈉溶液抗凝。

1.4 檢測項目 測定血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽還原酶(GR)的活性、丙二醛(MDA) 含量。所有測定均采用南京建成生物技術有限公司生產的試劑盒，按照其說明書進行操作。

1.5 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件統(tǒng)計，以平均數(shù)±標準誤(Mean±SE)表示，顯著性分析采用方差分析和多重比較。

2 結果與分析

2.1 EPS對SOD活性的影響 試驗結果如表1所示，皮下注射EPS，多糖組能不同程度的提高血清中SOD的活性，且在試驗第7、14、21、28天有不同程度的提高，第35、42天略有降低。與Ⅰ組相比，Ⅱ、Ⅳ組在試驗第14、21、35天時差異顯著(P<0.05)，第28天時差異極顯著(P<0.01)；Ⅲ組在試驗第7、42天時差異顯著(P<0.05)，第14、21、28、35天時差異極顯著(P<0.01)。

表1 不同濃度的EPS對SOD活性的影響 (U/mL)

注：與Ⅰ組相比，同一列數(shù)字后*表示差異顯著 (P<0.05)，**表示差異極顯著 (P<0.01)； 下表同

2.2 EPS對MDA含量的影響 試驗結果如表2所示，皮下注射EPS，多糖組能不同程度的降低血清中MDA的含量，且在試驗第7、14、21、28天逐漸減小，第35、42天略有升高。與Ⅰ組相比，Ⅱ組在試驗第7、14、21、28天時差異顯著(P<0.05)；Ⅲ組在試驗第7、35、42天時差異顯著(P<0.05)，第14、21、28天時差異極顯著(P<0.01)；Ⅳ組在試驗第14、21、28天時差異顯著(P<0.05)。

表2 不同濃度的EPS對MDA含量的影響 (nmol/mL)

2.3 EPS對GSH-Px活性的影響 試驗結果如表3所示，皮下注射EPS，多糖組能不同程度的提高血清中GSH-Px的活性，且在試驗第7、14、21、28天有不同程度的提高，第35、42天有所下降。與Ⅰ組相比，Ⅱ組在試驗第7、14、35天時差異顯著(P<0.05)，第21、28天時差異極顯著(P<0.01)；Ⅲ組在試驗第35、42天時差異顯著(P<0.05)，第7、14、21、28天時差異極顯著(P<0.01)；Ⅳ組在試驗第7、14、21天時差異顯著(P<0.05)，第28天時差異極顯著(P<0.01)。

表3 不同濃度的EPS對GSH-Px活性的影響 (U/L)

2.4 EPS對CAT活性的影響 試驗顯示如表4所示，皮下注射EPS，多糖組能不同程度的提高血清中CAT的活性，且在試驗第7、14、21、28天都有不同程度的提高，第35、42天逐漸降低。與Ⅰ組相比，Ⅱ、Ⅳ組在試驗第7、14、35天時差異顯著(P<0.05)，第21、28天時差異極顯著(P<0.01)；Ⅲ組在試驗第7、42天時差異顯著(P<0.05) ，第14、21、28、35天時差異極顯著(P<0.01)。

表4 不同濃度的EPS對CAT活性的影響 (U/mL)

2.5 EPS對GR活性的影響 試驗結果如表5所示，皮下注射EPS，多糖組能不同程度的提高血清中GR的活性，且在試驗第7、14、21、28天都有不同程度的提高，第35、42天逐漸降低。與Ⅰ組相比，Ⅱ組在試驗第14、35、42天時差異顯著(P<0.05)，第21、28天時差異極顯著(P<0.01)；Ⅲ組在試驗第7天時差異顯著(P<0.05)，第14、21、28、35、42天時差異極顯著(P<0.01)；Ⅳ組在試驗第14、21、28、35天時差異顯著(P<0.05)。

表5 不同濃度的EPS對GR活性的影響 (U/L)

3 討論

皮下注射不同濃度的EPS后，多糖組血清中SOD、GR、GSH-Px、CAT的活性均表現(xiàn)升高，在第28天時達到峰值，第35、42天有所下降，而MDA的含量均表現(xiàn)降低，在第28天時降到最低，第35、42天略有升高。本試驗結果表明，EPS能明顯提高雞血清中SOD、GR、GSH-Px、CAT活性，并能明顯降低雞血清中MDA含量。李明[5]、梁亦龍[6]、吳偉[7]等研究也發(fā)現(xiàn)多糖具有抗氧化作用，與本試驗研究結果一致。提示EPS具有抗氧化活性。

濃度之所以是一個重要因素，是因為清除自由基速率是由其濃度和速率常數(shù)決定的?？寡趸瘎┑幕钚栽谏矬w內和體外常常有很大區(qū)別，造成這種差別的重要原因之一是抗氧化劑和底物在生物膜中所處的微環(huán)境與體外不同。決定抗氧化能力的另一主要因素是抗氧化劑引發(fā)自由基產生。當抗氧化劑清除自由基時，轉換成其他自由基，也可能會發(fā)生某些化學反應，這些反應決定了整個體系的抗氧化能力，有時高濃度的抗氧化劑還會起到促氧化作用[8]。本試驗結果表明，在試驗第7、14、21、28、35、42天時，血清中SOD、GR、GSH-Px、CAT的活性以及MDA的含量均表現(xiàn)為濃度為25 mg/mL的多糖組優(yōu)于濃度為12.5 mg/mL、50 mg/mL的多糖組。提示EPS的抗氧化活性不是濃度越大越好。 鄒佳妤[9]、蘇圓圓[10]等研究也發(fā)現(xiàn)不同濃度和劑量的多糖抗氧化性能不同，其機理有待進一步研究。

本試驗結果表明，皮下注射不同濃度的EPS后，血清中SOD、GSH-Px、CAT的活性以及MDA的含量在第42天時，與對照組相比，濃度為12.5 mg/mL、50 mg/mL組恢復正常，濃度為25 mg/mL組差異顯著(P<0.05) ，提示測定血清中SOD、GSH-Px、CAT活性時，濃度為25 mg/mL組應適當延長測定時間；血清中GR的活性在第42天時，與對照組相比，濃度為12.5 mg/mL組差異顯著(P<0.05)，25 mg/mL組差異極顯著(P<0.01)， 提示測定血清中GR時，濃度為12.5 mg/mL組 、25 mg/mL組應適當延長測定時間。

本試驗中，各試驗組皮下注射的EPS均為0.2 mL/只，由于濃度不同，即各組所用劑量是不同的。試驗結果表明，濃度為25 mg/mL組較濃度為12.5 mg/mL、50 mg/mL組EPS抗氧化活性高，影響因素是劑量還是濃度，有待進一步研究。

4 結論

EPS能使血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽還原酶(GR)的活性明顯升高，使丙二醛(MDA)的含量明顯降低。提示淫羊藿多糖作為天然抗氧化劑，具有很好的研究價值與應用前景。