辛凌翔，王朋朋，馮崇倫，白光燁，佟 琪，孫洪磊

(1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，北京海淀100193 ； 2.中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京海淀100081)

禽白血病(Avian Leukosis，AL)是由禽白血病病毒(Avian Leukemia Virus，ALV)和禽肉瘤病毒(Avian Sarcoma Virus，ASV)引起的以禽類造血組織中某些細(xì)胞成分增生為主的腫瘤性傳染病的統(tǒng)稱，是危害養(yǎng)禽業(yè)的主要疾病之一，呈世界性分布[1]。ALV在自然狀態(tài)下只感染雞，但是不同品種或者品系在感染后，會出現(xiàn)不同的抵抗或者發(fā)病狀態(tài)[2]，由于ALV存在多個亞群，感染的毒株不同其癥狀和病理特征也會不同[3]，且部分癥狀與其他腫瘤性疾病相似，這也給臨床疾病診斷帶來了難度[4]。2019年3月遼寧某蛋雞養(yǎng)殖場飼養(yǎng)的育成期蛋雞因感染J亞群ALV發(fā)病，報告如下。

1 流行病學(xué)調(diào)查

遼寧某蛋雞養(yǎng)殖有限公司建設(shè)于2013年，為商品蛋雞飼養(yǎng)場，建有育雛舍、育成舍、產(chǎn)蛋雞飼養(yǎng)舍，并配備飼料加工及雞蛋儲存舍。該場可容納飼養(yǎng)成年產(chǎn)蛋雞12萬只，每棟雞舍采用全進全出式飼養(yǎng)模式。2019年3月份該場飼養(yǎng)的4萬只90日齡育成期蛋雞出現(xiàn)發(fā)病，主要癥狀為采食量減少，異常消瘦，剖檢死亡雞見肝臟腫大，呈土黃色，部分病死雞有肝出血癥狀，每日死淘10只左右，病情持續(xù)1個月，飼料中添加脫霉劑，投喂抗生素等措施均無效，病雞扔持續(xù)出現(xiàn)。此次發(fā)病雞全部出自同一批次的青年蛋雞，成年雞或育雛雞未出現(xiàn)類似發(fā)病現(xiàn)象。經(jīng)與駐場獸醫(yī)溝通，得知該場免疫程序如表1所示。

2 臨床剖檢癥狀

臨床上經(jīng)對該養(yǎng)禽場發(fā)病雞進行剖檢觀察，均可見病雞腹腔內(nèi)有大量出血，肝臟腫大、破裂，肉眼可見肝臟表面被覆有較大的出血塊，肝臟質(zhì)地變脆，切面濕潤，呈現(xiàn)豆腐渣樣病變，部分病雞肝臟呈現(xiàn)為土黃色；脾臟腫大；卵泡變性粘連墜入腹腔，形成卵黃性腹膜炎；腸壁變薄、粘連。剖檢結(jié)果如中插彩版圖1所示。

圖1 臨床剖檢癥狀

表1 遼寧某蛋雞養(yǎng)殖場免疫程序

3 病理組織學(xué)病變

選取發(fā)病雞只肺臟、肝臟以及脾組織，經(jīng)甲醛固定以后，制作病理切片，經(jīng)H.E.染色后在顯微鏡下觀察。從切片中可以看出，肺臟組織切片較為正常(如中插彩版圖2A所示)，肺房結(jié)構(gòu)清晰，無異常病變；肝臟中有聚集性腫瘤細(xì)胞，細(xì)胞核大偏于細(xì)胞一側(cè)，胞漿內(nèi)有紅染顆粒為典型的禽白血病引起的髓細(xì)胞瘤(如中插彩版圖2B所示)；脾臟切片顯示出紅白髓結(jié)構(gòu)消失，表明該病雞已經(jīng)處于較強的免疫抑制狀態(tài)(如中插彩版圖2C所示)。

圖2 組織H.E.染色結(jié)果

4 病原核酸檢測

剖檢病死雞，選取適量大小的肝臟組織，研磨后離心取上清液，分別提取病原基因組RNA和DNA，利用病原特異性引物進行RT-PCR和PCR檢測。各引物擴增目的片段長度分別為：禽白血病病毒(ALV-J亞群)700 bp、馬立克病病毒(MDV)158 bp、網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(REV)438 bp、雞傳染性貧血(CIAV)298 bp、禽腺病毒(FAdV)494 bp、禽戊型肝炎病毒(AHEV)750 bp、禽呼腸孤病毒(ARV)485 bp和禽源空腸彎曲桿菌589 bp，RT-PCR和PCR結(jié)果見圖3。結(jié)果顯示，8份肝臟樣品的ALV-J均為陽性；8份肝臟樣品的AHEV、MDV、ARV、REV、CIAV、FAdV和禽源空腸彎曲桿菌均為陰性。將出現(xiàn)陽性條帶的檢測產(chǎn)物送測序公司測定序列，檢測產(chǎn)物命名為A1-G1和A1-G2，序列用于進化分析，進化樹分析見圖4。結(jié)果顯示，A1-G1與A1-G2有99%的同源性，他們與ev/J-O DQ500039、ev/J-R DQ500044、ev/J-C14 DQ500034同源性最高，ALV gp85基因同源性為98%。

5 診斷結(jié)果與建議

經(jīng)檢測確診該雞場感染了ALV，但迄今為止針對ALV還未有切實有效的治療方法，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)只能淘汰陽性雞只。由于ALV感染依賴于垂直傳播，所以減少種雞群的感染率和建立無白血病的種雞群是控制本病的最有效措施。ALV凈化可采取以下程序：(1)在種雞育成期和產(chǎn)蛋期，采集泄殖腔拭子或蛋清，用ELISA對ALV抗原進行檢測，淘汰陽性雞；(2)受精蛋在隔離條件下出雛、飼養(yǎng)，連續(xù)進行4代，建立無病雞群；(3)根據(jù)具體情況按照一定時間間隔對雞群進行病毒分離，確保根除ALV陽性雞只；(4)將ALV陰性雞群隔離飼養(yǎng)，加強飼養(yǎng)管理，減少應(yīng)激。

圖3 病原核酸PCR檢測結(jié)果

M：DNA分子量標(biāo)準(zhǔn) ； 1～8泳道 ： 8份肝臟樣品

圖4 基于ALV gp85基因序列的進化樹