靳偉躍，楚 溪，張一昕，王紅芳，張建平*

(1.河北中醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，河北 石家莊 050091；2.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院，河北 石家莊050011)

研究表明，中醫(yī)藥可通過清除氧自由基、減輕炎癥反應(yīng)、抑制細(xì)胞凋亡等藥理作用發(fā)揮抗心肌缺血損傷的作用[1]。西紅花是常用的活血化瘀藥物，具有疏經(jīng)活絡(luò)、通經(jīng)化瘀、散郁開結(jié)、消腫止痛的功效。西紅花苷(Crocin)是一類水溶性的類胡蘿卜素，是西紅花的主要活性成分，研究發(fā)現(xiàn)其具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤、抑制鈣通道和心血管保護(hù)作用[2-6]。本實(shí)驗(yàn)通過注射垂體后葉素(Pit)誘導(dǎo)大鼠急性心肌缺血模型，研究西紅花苷對Pit所致大鼠急性心肌缺血保護(hù)作用及相關(guān)機(jī)制，為進(jìn)一步的新藥研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 試劑及藥品

乳酸脫氫酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和肌酸激酶(CK)試劑盒購自江蘇南京建成生物科技有限公司；垂體后葉素(天津生化制藥有限公司)；丹參注射液(江蘇神龍藥業(yè))；西紅花苷(美國Sigma公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

50只體重為180～220 g的雄性Wistar大鼠，購自河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組與給藥

將大鼠隨機(jī)分成5組(n=10)：空白對照組、模型組、丹參注射液組(5.0 g/kg)和西紅花苷高劑量組(0.2 g/kg/d)、西紅花苷低劑量組(0.1 g/kg/d)。給藥組大鼠腹腔注射對應(yīng)劑量的丹參、西紅花苷，空白組和模型組大鼠腹腔注射生理鹽水(1 mL/100 g/d)。各組大鼠連續(xù)給藥7 d，末次給藥1 h后分別給予模型組及給藥組大鼠舌靜脈注射Pit 0.35 μg/kg，建立Pit誘導(dǎo)的急性心肌缺血模型[7]。

2.2 指標(biāo)檢測

以6 mL/kg的10%烏拉坦腹腔注射麻醉，將大鼠固定于鼠板上，并采用多道生理記錄儀連接以監(jiān)測大鼠Ⅱ?qū)?lián)心電圖T波變化。記錄注射Pit后0.5 min、1 min、2 min及5 min 4個(gè)時(shí)間點(diǎn)的心電圖T波變化情況。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，根據(jù)試劑盒說明，取各組大鼠血清測定CK、LDH、SOD活性和MDA含量。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 各組大鼠Ⅱ?qū)?lián)心電圖T波百分比變化情況比較

與空白對照組相比，模型組大鼠注射Pit后T波明顯抬高，0.5 min時(shí)達(dá)到高峰。丹參注射液組和西紅花苷組大鼠T波不同程度地降低，與模型組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，丹參注射液組、西紅花苷高劑量組和西紅花苷低劑量組大鼠Ⅱ?qū)?lián)心電圖T波百分比比較無明顯差異(P>0.05)。見表1。

組別例數(shù)(n)缺血后(%)0.5min1min2min5min空白對照組100.95±0.431.07±0.280.97±0.141.34±0.25模型組1039.27±8.33##37.84±7.92##36.45±6.51##34.85±6.18##丹參注射液組1018.24±3.03??18.16±2.74??20.74±3.87??21.15±4.04??西紅花苷高劑量組1015.97±2.18??17.86±3.24??19.23±2.89??21.72±3.14??西紅花苷低劑量組1019.98±3.22??20.56±2.15??22.45±4.22?22.32±3.98?

注：與空白對照組相比，##P<0.01；與模型組相比，**P<0.01。

3.2 各組大鼠血清LDH和CK活性比較

與空白對照組比較，模型組大鼠血清中LDH和CK活性顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，丹參注射液組和西紅花苷組大鼠血清LDH和CK活性顯著降低(P<0.01或P<0.05)，提示西紅花苷能減少心肌酶釋放，有效保護(hù)心肌細(xì)胞膜的完整性。見表2。

組別LDH(mol/L)CK(U/L)空白對照組183.4±21.23475.7±62.34模型組359.28±50.12##872.49±81.53##丹參注射液組254.95±33.17??584.76±63.64??西紅花苷高劑量組225.13±41.05??621.48±74.35??西紅花苷低劑量組267.54±39.42??684.22±95.83?

注：與空白對照組相比，##P<0.01；與模型組相比，**P<0.01；*P<0.05。

3.3 各組大鼠血清SOD活性和MDA含量比較

與空白對照組相比，模型組大鼠血清中SOD活性顯著降低，MDA含量顯著增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與模型組相比，丹參注射液組及西紅花苷組大鼠SOD活性均明顯升高，MDA含量明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)，提示西紅花苷具有一定的抗氧化作用。見表3。

組別SOD(U/mL)MDA(μmol/L)空白對照組203.15±32.117.45±1.41模型組124.85±18.26##11.91±1.87##丹參注射液組174.26±20.36??4.27±0.63??西紅花苷高劑量組182.48±17.66??4.96±0.71??西紅花苷低劑量組155.91±12.45?6.04±1.17??

注：與空白對照組相比，##P<0.01；與模型組相比，**P<0.01；*P<0.05。

4 討論

心肌缺血是指心肌供血減少或心肌需氧量增加超過其最大供血量，導(dǎo)致心肌代謝、功能和結(jié)構(gòu)發(fā)生的病理變化[8]。Pit作用于血管加壓素V1受體，導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈血流減少和心電圖改變，從而出現(xiàn)心肌供血不足和心肌損傷[9-10]。本實(shí)驗(yàn)選用注射Pit復(fù)制大鼠急性心肌缺血模型，該模型廣泛用于抗心肌缺血藥物的研究。

近年來，心肌缺血損傷機(jī)制的研究越來越多，有研究顯示氧自由基的產(chǎn)生和脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的增強(qiáng)與心肌缺血損傷有密切聯(lián)系[11]。SOD能夠清除氧自由基，其活力水平間接反映了清除自由基的能力，在人體的氧化和抗氧化平衡中發(fā)揮重要作用。MDA是脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，間接反映了細(xì)胞氧化損傷的程度[12]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，丹參注射液、西紅花苷均能明顯升高大鼠血清SOD活性，降低血清中MDA含量，從而對心肌發(fā)揮保護(hù)作用，其可能的作用機(jī)制是減少心肌缺血的氧化損傷。磷酸肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)是目前實(shí)驗(yàn)和臨床均公認(rèn)的對心肌缺血具有診斷意義的酶，可作為觀察心肌缺血嚴(yán)重程度的指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，丹參注射液組和西紅花苷高低劑量組大鼠血清LDH和CK的活性均明顯低于模型組，表明西紅花苷對心肌有一定保護(hù)作用。

綜上所述，西紅花苷對Pit所致的急性心肌缺血具有明顯的保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與抗氧化應(yīng)激、降低肌酸激酶活性有關(guān)，為后續(xù)的新藥研發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。