周剛

（邢臺(tái)市食品藥品檢驗(yàn)所 河北邢臺(tái) 054000）

1 前言

目前，合成色素的檢測主要依據(jù)國標(biāo)GB 5009.35—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測定》[1]、GB 5009.141—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中誘惑紅的測定》[2]以及SN/T 1743—2006《食品中的誘惑紅、酸性紅、亮藍(lán)、日落黃的含量檢測 高效液相色譜法》[3]，完成對(duì)8種合成色素的檢測需采用多個(gè)液相系統(tǒng)。UPLC 法比傳統(tǒng)液相色譜法大幅度地改善了分析速度、分離度以及靈敏度，文獻(xiàn)中提及的檢測方法多是針對(duì)合成色素中的一種或幾種，樣品前處理一般都采用聚酰胺吸附法或是液液萃取法(赤蘚紅)等，這些前處理方法回收率低、操作費(fèi)時(shí)繁瑣、重現(xiàn)性差[4,5]。關(guān)于檸檬黃、新紅、胭脂紅、莧菜紅、日落黃、亮藍(lán)、赤蘚紅、誘惑紅這8種合成色素在裱花蛋糕中同時(shí)檢測的報(bào)道尚未出現(xiàn)。本實(shí)驗(yàn)采用Pro ElutPWA 固相萃取柱對(duì)樣品進(jìn)行前處理，利用UPLC 分離技術(shù)，對(duì)8種常見的合成色素進(jìn)行檢測。

2 設(shè)備及方法

2.1 儀器和試劑

H-Class UPLC 儀（PDA 檢測器，沃特世，美國）；Pro ElutPWA-2 SPE 柱（迪馬科技，中國）；新紅、檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)、赤蘚紅、誘惑紅等色素標(biāo)準(zhǔn)溶液均購自中國計(jì)量科學(xué)研究院；甲醇、乙腈（均為色譜純，美國Fisher 公司）；裱花蛋糕樣品均購自本地蛋糕店。

2.2 方法

2.2.1 色譜條件

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制與曲線繪制

分別準(zhǔn)確稱量8種色素標(biāo)準(zhǔn)品各100.0 mg，置于100 mL 容量瓶中，用純水溶解稀釋至刻度，配制成濃度為1.0 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。將8種標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制成適當(dāng)濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液，過0.22 μm 尼龍濾膜后，按 2.2.1 中色譜條件進(jìn) UPLC上機(jī)。以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.2.3 樣品的前處理

處理方法(SPE 法)：取 2 g 樣品（精確到 0.001 g）與20 mL 提取劑 [乙醇-乙腈-甲醇-氨水（30:30:30:10）]混合，渦旋 2 min，超聲提取 10 min，6 000 r/min 離心3 min，收集上清液；將下層殘留物依次用10 mL 提取劑重復(fù)提取2 次，合并上清液；將上清液在45℃ 水浴條件下，減壓蒸餾6 mL，再加入80 μL 甲酸，混勻，待凈化。SPE 柱（使用前先用5 mL 甲醇和5 mL 水預(yù)淋洗并保持柱體濕潤，待用），待測樣品以1.0 mL/min的速度過柱，棄去流出液；待樣品液全部流出后，再用4 mL 水淋洗，將SPE 柱抽干；加入6 mL 2%氨水甲醇溶液，收集流出液；將洗脫液在45℃下氮?dú)獯抵良s 0.5 mL，再用水定容至 1 mL，過 0.22 μm 尼龍濾膜后，上UPLC 分析。

2.2.4 樣品上機(jī)分析

在相同的色譜條件下，將經(jīng)上述處理后樣品溶液上機(jī)，以保留時(shí)間定性，峰面積進(jìn)行定量。

3 結(jié)果與分析

3.1 色譜條件的優(yōu)化

以 A（0.02 mol/L 乙酸銨溶液），B（乙腈）為流動(dòng)相，流速0.3 mL/min。調(diào)整有機(jī)相的比例，優(yōu)化梯度洗脫的條件，保證8種色素能夠完全分離并有尖銳的峰形，在相同的色譜條件下，用各對(duì)應(yīng)色素單一標(biāo)準(zhǔn)溶液確定8種色素的出峰順序和保留時(shí)間。梯度洗脫程序：5%B（0～1 min），90%B（2.3～3.3 min），5%B（3.5～7.0 min）。其中，檸檬黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、赤蘚紅、誘惑紅在240 nm 波長左右響應(yīng)信號(hào)值最高，而亮藍(lán)在307 nm 波長左右才有較好響應(yīng)信號(hào)值。因此，儀器設(shè)定采集時(shí)間段如下：0～2.8 min 采集 240 nm 圖譜，2.8～3.2 min 采集 307 nm 圖譜（亮藍(lán)出峰位置），3.2～4.0 min 采集 240 nm 圖譜，可在 7 min 內(nèi)對(duì)8 合成色素進(jìn)行完全分離，見圖1。

圖1 8種合成色素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

3.2 實(shí)際樣品的測定

對(duì)市售6份蛋糕樣品進(jìn)行測定，不同顏色的裱花糕點(diǎn)都不同程度地使用了相應(yīng)顏色的色素，但劑量都在GB 2760—2014《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》最大允許使用量范圍。

4 結(jié)語

本研究建立了固相萃取—超高效液相色譜同時(shí)測定裱花蛋糕中8種合成色素的方法。該方法簡化了前處理過程，而且回收率和穩(wěn)定性良好。本方法優(yōu)于國標(biāo)方法，可用于裱花蛋糕中8種合成色素的測定。