何江耀，王健文，朱新宇

（廣東省東莞東華醫(yī)院 病理科，廣東 東莞 523110）

子宮內(nèi)膜癌是婦科最為常見的三大惡性腫瘤 之一，隨著外源性雌激素接觸機會的增加以及生活質(zhì)量的改善、平均壽命的延長，女性罹患該病的風險較以往有所增加，且存在年輕化的趨勢。我國在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率方面缺乏大樣本的流行病學研究，但通過對住院患者中宮頸癌與該病的比例進行估算發(fā)現(xiàn)，該病的發(fā)病率已明顯上升，且在經(jīng)濟發(fā)達地區(qū)尤為顯著[1-2]，需引起廣大學者的高度重視。子宮內(nèi)膜癌的早期診斷和治療可使患者獲得良好的預后，大多數(shù)研究已證實超聲和宮腔鏡對該病的早期診斷價值[3-4]，但對于免疫組化標記物檢測技術(shù)的應用價值仍存在一定爭議，本研究對此展開探討，以期為提高子宮內(nèi)膜癌早期診斷的準確性提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2016年1月- 2018年1月本院收治的80 例早期子宮內(nèi)膜癌患者的組織標本納入觀察組。年齡35～75歲，平均（51.53±9.42）歲；初潮年齡12～17歲，平均（14.23±2.05）歲；有生育史69例，無生育史11例；絕經(jīng)51例，未絕經(jīng)29 例。納入標準：①術(shù)后病理確診為子宮內(nèi)膜癌，依據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO）2014年修訂的外陰癌、宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌病理分期標準[5]診斷為I期者；②初次就診，在未行放化療和激素療法時進行手術(shù)并獲取子宮內(nèi)膜組織標本；③未合并其他惡性腫瘤、肝腎功能不全、心腦血管疾病、自身免疫性疾病以及除剖宮產(chǎn)以外的腹部手術(shù)史；④對本次研究知情同意并自愿簽署知情同意書。排除標準：①術(shù)前通過實驗室和影像學檢查為子宮內(nèi)膜癌晚期患者；②合并有急性感染性疾??；③嚴重的精神疾病者；④病歷資料不完整者。再將同期經(jīng)病理證實為單純子宮內(nèi)膜增生者的組織標本50例納入對照組。年齡30～79歲，平均（50.89±8.57）歲；初潮年齡12～18歲，平均（14.86±2.61）歲；有生育史44例，無生育史6例；絕經(jīng)35例，未絕經(jīng)15例。觀察組和對照組年齡、初潮年齡、生育史和絕經(jīng)情況比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 檢測方法

兩組子宮標本組織均采用免疫組化檢測，應用EnVision兩步法，首先經(jīng)10%福爾馬林固定、乙醇脫水、石蠟包埋及切片等處理，確認后行脫蠟處理，再采用3%雙氧水進行室溫下孵育10 min，蒸餾水沖洗，高壓修復抗原，再用磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffer saline,PBS）沖洗，滴加一抗，放于37℃冰箱1 h后以PBS沖洗并滴加二抗，37℃下孵育30 min，PBS沖洗，采用二氨基聯(lián)苯胺顯色5 min后反復水洗，復染后再次行乙醇脫水，中性樹膠封片等處理，將處理好的標本在顯微鏡下進行觀察。

1.3 結(jié)果判斷標準

以PBS代替一抗作為陰性對照，細胞相應部位出現(xiàn)棕黃色顆粒深染為陽性。雌激素受體（estrogen receptor,ER）、孕激素受體（progestrone receptor,PR）、p53和ki67陽性定位于細胞核；癌胚抗原（carcino-embryonic antigen,CEA）陽性定位于細胞質(zhì)；p16陽性定位于細胞核/細胞質(zhì)。

1.4 觀察指標

比較觀察組和對照組之間ER、PR、CEA、p16、p53和ki67表達情況的差異；再比較觀察組不同分期、分型和組織分化程度患者上述標記物表達情況的差異。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用EXCEL和SPSS 19.0軟件對本研究數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計和分析，計量資料以均數(shù)±標準差（）表示，計量資料組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以百分比（%）表示，計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組免疫組化標記物表達情況比較

觀察組ER、PR、p16的陽性表達率顯著低于對照組（P＜0.05），CEA、p53和ki67的陽性表達率顯著高于對照組（P＜0.05）。見表1。

2.2 觀察組臨床病理特征與標記物表達的關(guān)系

不同臨床分期之間，ER、PR、p16的陽性表達率差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），CEA、p53和ki67的陽性表達率差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；不同分型之間，CEA和p16的陽性表達率差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），ER、PR、p53和ki67的陽性表達率差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；不同組織分化程度之間，p16和p53的陽性表達率差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），ER、PR、CEA和ki67的陽性表達率差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表 2。

表1 兩組免疫組化標記物表達情況比較 例（%）

表2 觀察組臨床病理特征與標記物表達的關(guān)系 例

3 討論

在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生和發(fā)展中，ER和PR起著尤為重要的作用，國內(nèi)外學者就此開展了多項研究[6-8]，證實了該病與人體激素代謝紊亂尤其是雌激素增多密切相關(guān)。正常情況下，雌激素和孕激素通過與ER和PR結(jié)合來發(fā)揮生理作用，并參與子宮內(nèi)膜的增殖，當細胞病變時，這些受體的數(shù)量會顯著減少，功能明顯減弱[9]。本研究中，觀察組ER和PR的陽性表達率顯著低于對照組，說明子宮內(nèi)膜癌I期患者存在ER和PR減少甚至消失的情況。進一步對臨床病理特征分析顯示，肌層浸潤＜50%（IA期）和肌層浸潤≥50%（IB期）之間ER和PR陽性表達率差異無統(tǒng)計學意義，說明ER和PR的表達可能不受肌層浸潤程度的影響。子宮內(nèi)膜癌分為I型（雌激素依賴型）和II型（非雌激素依賴型），本研究中，I型患者ER和PR陽性表達率顯著低于II型患者，說明ER和PR的檢測有助于該病的臨床分型判斷。另外，不同組織分化程度間ER和PR的陽性表達率差異顯著，說明ER和PR的檢測有助于評估腫瘤分化程度。這些結(jié)果說明，隨著疾病的進展，ER和PR表達逐漸缺失，其缺失程度與細胞惡性程度上升、浸潤性增加以及轉(zhuǎn)化為非激素依賴型密切相關(guān)。

p16是一種細胞周期依賴激酶抑制蛋白，與ER和PR類似，其在腫瘤細胞中處于表達缺失的狀態(tài)[10]。p53是人體抑癌基因，可抑制細胞增殖，促進細胞凋亡，但是p53的點突變可能使該基因失去原本的作用，甚至誘導正常的細胞發(fā)生惡變[11]，本研究中，觀察組p16的陽性表達率顯著低于對照組，p53的陽性表達率顯著高于對照組，說明子宮內(nèi)膜癌I期患者存在p16表達減少和p53表達增多的情況。臨床病理特征分析顯示，p16的表達不受肌層浸潤程度、分型和腫瘤組織分化程度的影響，但p53的表達受肌層浸潤程度和分型的影響，但不受腫瘤組織分化程度的影響。

CEA是一項臨床廣泛應用的腫瘤標志物，在多種腫瘤組織中均可檢出。ki67則是一種與細胞有絲分裂過程密切相關(guān)的增殖細胞抗原，其表達水平的高低可反映細胞增殖的活躍狀態(tài)[12]。本研究中，CEA和 ki67的陽性表達率顯著高于對照組，說明子宮內(nèi)膜癌I期患者存在CEA和ki67表達增多的情況。臨床病理特征分析顯示，CEA的表達不受子宮內(nèi)膜癌分型的影響，但與肌層浸潤程度和腫瘤組織分化程度有關(guān)，而ki67的表達則與肌層浸潤程度、分型和腫瘤組織分化程度均相關(guān)。

綜上所述，通過免疫組化標記物檢測技術(shù)評估子宮內(nèi)膜組織ER、PR、CEA、p16、p53和ki67的表達情況，有助于提高該病早期診斷的準確性，具有一定應用價值。