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        結(jié)腸癌組織中CD151和整合素α3的表達(dá)及其臨床價(jià)值

        2019-05-16 06:00:46吳春平劉艷彩劉學(xué)剛趙嶺嶺李景光
        實(shí)用癌癥雜志 2019年4期
        關(guān)鍵詞:整合素孵育切片

        吳春平 劉艷彩 劉學(xué)剛 趙嶺嶺 李景光

        結(jié)腸癌是1種常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤疾病,易發(fā)生局部和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,從而影響患者預(yù)后[1]。CD151是4次跨膜蛋白超家族中的重要成員,同時(shí)也是4次跨膜蛋白超家族中的唯一癌基因,CD151高表達(dá)可與多種整合素相互結(jié)合,然與整合素α3關(guān)系最為密切,兩者結(jié)合則可形成復(fù)合物,其與細(xì)胞粘附、細(xì)胞遷移轉(zhuǎn)移等存在緊密聯(lián)系[2]。本研究旨在探討CD151、整合素α3應(yīng)用于結(jié)腸癌中的價(jià)值,為改善結(jié)腸癌患者預(yù)后提供參考依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 一般資料

        選取我院2016年7月至2017年8月收治的60例結(jié)腸炎患者和經(jīng)手術(shù)組織病理檢查診斷為結(jié)腸癌的120例患者作為本次研究對(duì)象。結(jié)腸炎患者中,男性38例、女性 22例;年齡33~76歲,平均為(49.5±3.7)歲。結(jié)腸癌患者中,男性78例、女性42例;年齡35~78歲,平均為(49.7±3.5)歲;潰瘍型40例、腫塊型50例、浸潤(rùn)型30例;高分化腺癌30例、中分化腺癌60例、低分化腺癌26例、黏液腺癌4例;腫塊直徑1.6~5.9 cm,平均為(3.6±0.7) cm;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者90例、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者30例;遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者48例、無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者72例。

        1.2 方法

        應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)受檢對(duì)象組織中CD151和整合素α3表達(dá)情況。試劑:鼠抗人CD151單克隆抗體、整合素α3單克隆抗體,由美國(guó)Santa Cruz公司提供;免疫組化SP法所使用的相關(guān)試劑則由福州邁新生物技術(shù)公司提供,嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)執(zhí)行操作,其中陽(yáng)性組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照,而陰性對(duì)照采用PBS代替鼠抗人CD151單克隆抗體、整合素 α3單克隆抗體。嚴(yán)格按照說(shuō)明執(zhí)行各項(xiàng)操作步驟,每張切片均分別加入50 μl過(guò)氧化酶阻斷劑,然后放置于室溫下孵育,時(shí)間為10 min,再使用PBS液(福州邁新生物技術(shù)公司提供)沖洗3 次,每次沖洗3 min。然后于每張切片上加入50 μl非免疫性動(dòng)物血清,放置于室溫下孵育,時(shí)間為5 min,此步驟不需進(jìn)行沖洗,然后將多余液體甩除。向各切片上分別加入50 μl一抗,并將其放置于40 ℃冰箱中進(jìn)行孵育、過(guò)夜,于第2天采用PBS液沖洗,每次沖洗3 min,共沖洗3次。分別向各切片加入生物素標(biāo)記的二抗50 μl,然后于室溫下孵育,時(shí)間為10 min,再采用PBS液沖洗,每次沖洗3 min,共沖洗3次。再將50 μl鏈霉素抗生物素蛋白-過(guò)氧化酶溶液加入到各切片中,放置于室溫下孵育,時(shí)間為10 min,采用PBS液沖洗,每次沖洗3 min,共沖洗3次。向各切片中分別加入100 μl新鮮配制的DAB溶液,然后于顯微鏡下觀察其顯色情況來(lái)決定是否需停止顯色,采用自來(lái)水進(jìn)行沖洗,并采用蘇木精復(fù)染,應(yīng)用乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹(shù)膠封片。

        1.3 觀察指標(biāo)

        因CD151、整合素α3蛋白陽(yáng)性定位于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì),且呈棕褐色顆粒,所以采用半定量積分法進(jìn)行判斷。顯色度:按照細(xì)胞著色深淺進(jìn)行計(jì)分,其中0分:基本無(wú)色;1分:淺黃色;2分:淺棕色;3分:深棕色;根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比例計(jì)分:其中0分:無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞;1分:<10%;2分:10%~50%;3分:50%~75%;4分:>75%。顯色強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞比例相乘,如得分≥3分則判斷為陽(yáng)性;反之則為陰性[3]。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件處理,計(jì)數(shù)資料采用率表示,采用χ2檢驗(yàn),相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)性分析,以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 結(jié)腸炎與結(jié)腸癌組織中CD151與整合素α3表達(dá)情況比較

        結(jié)腸炎患者組織中無(wú)CD151和整合素α3表達(dá),而結(jié)腸癌組織中CD151和整合素α3陽(yáng)性表達(dá)率分別為88.33%(106/120)、85.83%(103/120),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=128.919、120.389,P=0.00、0.00)。

        2.2 結(jié)腸癌組織中CD151和整合素α3表達(dá)狀況與臨床病理特征的關(guān)系

        不同年齡、性別、組織學(xué)分型、腫瘤大小及分化程度結(jié)腸癌組織CD151和整合素α3表達(dá)陽(yáng)性率比較,P>0.05;而存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌組織CD151陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者,P<0.05;遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌組織CD151陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者,P<0.05。存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌組織整合素α3陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者,P<0.05;遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌組織整合素α3陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者,P<0.05。見(jiàn)表1。

        2.3 CD151與整合素α3的相關(guān)性分析

        結(jié)腸炎患者中,CD151和整合素α3均為陰性表達(dá)。結(jié)腸癌組織中,CD151和整合素α3陽(yáng)性表達(dá)率分別為88.33%、85.83%;經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)性分析,CD151和整合素α3陽(yáng)性表達(dá)在結(jié)腸癌患者中呈正相關(guān)性(γ=0.5123,P=0.000)。

        3 討論

        結(jié)腸癌具有較高的發(fā)病率和死亡率,盡管現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)得到快速發(fā)展,結(jié)腸癌篩查和診治也得到明顯進(jìn)步,但結(jié)腸癌患者預(yù)后仍不理想。結(jié)腸癌是1種常見(jiàn)的惡性腫瘤疾病,影響患者預(yù)后的因素主要是腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移,而腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移則是1個(gè)多因素參與的復(fù)雜過(guò)程。所以深入研究結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展成為當(dāng)前臨床醫(yī)師和各學(xué)者研究重點(diǎn)。

        表1 結(jié)腸癌患者不同情況下CD151和整合素α3表達(dá)狀況比較(例,%)

        CD151基因是人們最近發(fā)現(xiàn)的一種癌基因,其可與整合素特異性結(jié)合,并形成復(fù)合體參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖和粘附及遷移等過(guò)程[4]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[5-6],CD151在多種惡性腫瘤中存在高度表達(dá)情況,如膀胱癌、結(jié)腸癌、肝癌及前列腺癌等,且發(fā)現(xiàn)CD151高度表達(dá)與各惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后存在緊密聯(lián)系。本文研究通過(guò)對(duì)結(jié)腸癌患者中CD151、整合素α3進(jìn)行檢測(cè),旨在探討其表達(dá)狀況,為臨床判斷結(jié)腸癌患者病情提供參考,同時(shí)為醫(yī)師制定治療方案提供依據(jù)。本次研究中整合素α3可通過(guò)與其配體蛋白的作用來(lái)調(diào)控細(xì)胞內(nèi)外信號(hào)傳導(dǎo),對(duì)細(xì)胞遷移、轉(zhuǎn)移有一定影響。然細(xì)胞遷移信號(hào)從細(xì)胞外向細(xì)胞內(nèi)傳遞的關(guān)鍵步驟則是整合素與CD151復(fù)合體的形成,所以通過(guò)檢測(cè)CD151、整合素α3表達(dá)情況對(duì)掌握結(jié)腸癌患者病情及預(yù)后具有重要意義。本文研究結(jié)果顯示,CD151、整合素α3在結(jié)腸癌組織中呈高度表達(dá),且CD151與整合素α3呈正相關(guān)性,由此說(shuō)明CD151、整合素α3相互結(jié)合可能在結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。有報(bào)道稱(chēng)[7],CD151與整合素的復(fù)合體形成后,其在纖維粘連蛋白上的連接大約減少90%。本文研究結(jié)果顯示,CD151與整合素α3在結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移中起著關(guān)鍵作用,同時(shí)為臨床醫(yī)師判斷患者病情狀況提供重要依據(jù),為臨床治療提供指導(dǎo)價(jià)值。

        綜上所述,結(jié)腸癌患者CD151與整合素α3可作為臨床醫(yī)師評(píng)估結(jié)腸癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)。此外,隨著臨床不斷深入研究,相信今后結(jié)腸癌靶向治療會(huì)出現(xiàn)新的分子靶點(diǎn),更好地改善患者預(yù)后。

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